[硒化壳聚糖促表皮细胞增殖作用的实验研究]硒壳聚糖

　　[摘要]目的：研究硒化壳聚糖对体外培养表皮细胞增殖的影响。方法：用不同剂量（25、50、100、200、400mg/L）硒化壳聚糖作用于表皮细胞，电镜观察药物对细胞超微结构的影响； 3H－TdR掺入法、LDH漏出率用于检测药物对细胞增殖及损伤的影响，并以等体积的细胞培养液处理为对照组。结果：各药物浓度作用细胞后，细胞核均有不同程度的增大，核浆比增大，核仁变大，变多，扩张的内质网增多，细胞表面突起增加，线粒体更为丰富，更易见到聚集成团的糖原等现象；硒化壳聚糖可促进表皮细胞对3H－TdR的吸收(P 　　1.2.4 LDH漏出率的测定：取第6代细胞， 5×103个/ml接种于96孔板，每孔接种100μl,培养48h, 按分组加入不同浓度的硒化壳聚糖继续培养24h，用全自动生化分析仪检测上清液中LDH的含量，将培养板中的细胞用0.25%胰酶消化，收集细胞，超声波粉碎后加入PBS液，用全自动生化分析仪检测LDH的含量,LDH漏出率的计算公式[7]：
　　漏出率＝（LDH上清液－LDH胞内）/ LDH胞内。
　　1.2.5统计学处理 数据均以x±s表示，应用SPSS 13.0统计软件进行方差分析。
　　
　　2结果
　　2.1电镜下观察结果：透射电镜下空白组的细胞核仁可见，多为单个，少量细胞也可见多个核仁, 细胞表面可见微绒毛。各浓度硒化壳聚糖组细胞表面微绒毛丰富，核大，扭曲明显，有深凹陷，核内异染色质稍多，呈小斑块状散在分布于核基质中，核仁大，常多个（2～3个）有时可达4个，有少数细胞体积明显增大，部分细胞内见多个核切面。细胞浆内糖原丰富，有线粒体和粗面内质网，有些高尔基体也较发达，细胞多处于分裂期。见图1。
　　2.2硒化壳聚糖对表皮细胞LDH漏出率和DNA合成的影响: 硒化壳聚糖可降低表皮细胞LDH漏出率，药物浓度越大漏出率降低越明显，呈剂量依赖趋势，当药物浓度为100mg/L及以上时，对LDH漏出率的影响与空白对照组比较差异有统计学意义(P