改良型自体富血小板纤维蛋白联合重组类人胶原蛋白面膜对女性面部皮肤光老化的修复效果研究▲

陈富禄 唐欷柯 彭智鹏 唐 超 粟本义 黎洪棉 韦 俊

(1 昭平县人民医院外科，广西昭平县 546800；
2 南宁市第四人民医院皮肤科，广西南宁市 530023；
3 南宁梦想整形美容医院，广西南宁市 530021；
4 广西壮族自治区人民医院整形美容外科，广西南宁市 530021；
5 广西医科大学第一附属医院烧伤整形外科，广西南宁市 530021)

随着年龄增长，人体皮肤逐渐变薄并失去弹性和张力，易出现皱纹、松弛及干燥等老化现象。补充外源性胶原蛋白或促进内源性胶原蛋白生成是改善皮肤光老化的关键，在此基础上增强局部血管化、改善血运可达到改善皮肤老化、促进面部年轻化的目的。改良型自体富血小板纤维蛋白(advanced platelet-rich fibrin，A-PRF)是在传统富血小板纤维蛋白基础上进行改良优化的血小板浓缩物，其含有大量的血小板，激活后可释放血管内皮生长因子、转化生长因子-β、碱性成纤维细胞生长因子等因子，这些生长因子具有促进创面愈合、刺激血管生成、促进细胞增殖和迁移等功能[1-3]。重组类人胶原蛋白是一种应用基因工程技术将胶原蛋白的mRNA逆转录为cDNA，然后经酶切修饰后重组，再经过高密度发酵、分离、纯化等工艺生产得到的新型胶原蛋白[4-7]，含有高纯度、高浓度类人胶原蛋白的面膜具有极好的屏障修复能力和保湿性能，可更有效地帮助肌肤锁住水分，补充胶原蛋白，目前已在临床上得到广泛应用。本研究探讨A-PRF联合重组类人胶原蛋白面膜对女性面部光老化皮肤的修复作用。现报告如下。

1.1 一般资料 选取2018年1月至2022年1月在南宁市第四人民医院皮肤科及南宁梦想整形美容医院进行美容咨询并确诊为面部皮肤光老化的80例女性患者作为研究对象，通过抽签法将其分为对照组和治疗组，每组40例。皮肤光老化诊断标准：由于皮肤光老化的临床表现呈多样化和细微化，目前尚未形成统一的诊断标准，本研究主要是根据临床表现进行诊断，即面部暴露部位出现皮肤松弛、深浅皱纹、皮肤粗糙、皮革样外观、色素沉着斑或色素脱失斑、紫癜、毛细血管扩张、外观明显改变或消失、肤色常呈灰黄等。纳入标准：Fitzpatrick皮肤分型为Ⅲ～Ⅳ型；
排除标准：合并感染、肿瘤、肝病、代谢及免疫等相关疾病的患者。对照组年龄24～60(38.00±8.49)岁，皮肤分型：Ⅲ型31例，Ⅳ型9例；
治疗组年龄24～60(38.00±9.62)岁，皮肤分型：Ⅲ型33例，Ⅳ型7例。两组患者的年龄和皮肤分型比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)，具有可比性。本研究经过南宁市第四人民医院医学伦理审查委员会批准，且所有患者均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 仪器和材料 VISIA皮肤图像分析仪由美国Can field科技公司生产(型号：Canfield Visia, Visia-CR, Reveal)；
SOFT 5.5皮肤性质测试仪由意大利Allegation科技公司生产。重组类人胶原蛋白面膜(可丽金)由西安巨子生物基因技术股份有限公司生产。

1.2.2 自体APRF的制备[8-9]无菌条件下抽取患者静脉血20 mL至真空负压管中，立即以1 500 r/min离心14 min。离心后全血可分为3层，最底层为红细胞，上层为血浆，中间层即为富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin，PRF)。用无菌长镊取出中间层半固态状的蛋白胶，剪去其下段红细胞部分即可获得PRF蛋白凝胶。将获得的PRF蛋白凝胶放入另一支10 mL离心管中，4 ℃条件下静置5 d后，PRF蛋白凝胶会持续释放出含多种细胞因子的液态A-PRF，用无菌注射器抽吸A-PRF，收集后备用。

1.2.3 治疗方法 (1)治疗组用电动微针将5 mL A-PRF原液一次性导入面部皮肤光老化部位的真皮内，然后用重组类人胶原蛋白面膜(可丽金)外敷，1次/d，连续使用1周。(2)对照组单纯使用重组类人胶原蛋白面膜(可丽金)外敷，1次/d，连续使用1周。

1.3 观察指标 分别于治疗前、治疗后1周及1个月，同时采用VISIA皮肤图像分析仪和SOFT 5.5皮肤性质测试仪对两组患者的皮肤性质进行定量分析和评价。定量分析和评价方法如下：治疗前后均由同一名医生和同一名护士采用同一相机、在同一光源下、以同一角度对面部区域进行摄影并存档；
测试条件为室温24 ℃，湿度40%～50%；
患者在测试前30 min进入测试环境中安静待测。(1)SOFT 5.5皮肤性质检测仪主要检测皮肤的pH值、水分、弹性和油脂分泌情况。将检测仪的探头垂直置于皮肤上5～10 s，待测定值稳定后读取数值，取5次测定的平均值计算，皮肤pH值为5.0～7.0说明不易衰老，水分和弹性的SOFT 5.5数值越大提示光老化程度越轻，油脂的SOFT 5.5数值越大提示光老化程度越严重。(2)VISIA皮肤图像分析仪主要检测皮肤色素斑、皱纹、纹理和毛孔情况。首先清洁面部，15 min后用VISIA皮肤图像分析仪拍摄患者面部图像，分析区域尽量避免反光区域和头发干扰，所有皮肤检测均由同一医生操作。测定时VISIA皮肤图像分析仪自动生成VISIA 绝对分值，皮肤色素斑、皱纹、纹理、毛孔的VISIA值越大，提示皮肤衰老越严重。(3)不良反应：观察治疗后1周至1个月的不良反应发生情况，包括红肿、过敏、发热。

1.4 统计学方法 采用SPSS 19.0软件进行数据分析。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(x±s)表示，组内治疗前后比较采用配对t检验，组间比较采用两独立样本t检验。以P<0.05 为差异有统计学意义。

2.1 两组治疗后的表现 两组患者治疗后1周及1个月，面部皮肤状态均获得不同程度的改善，其中治疗组患者皮肤的皱纹、纹理、毛孔、水分、弹性和油脂方面的改善明显优于对照组，表现为细腻度及光泽度明显增加、细纹减少，主观感受皮肤滋润并有饱满感和弹性等。两组患者在观察期间均无不良反应发生。典型案例见图1。

图1 典型案例

2.2 两组VISIA绝对分值比较 治疗前，两组患者的皮肤纹理、毛孔、色素斑、皱纹的VISIA绝对分值比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。治疗组患者治疗后1周及1个月的纹理VISIA绝对分值低于治疗前且低于对照组，对照组患者治疗后1个月的纹理VISIA绝对分值低于治疗前(均P<0.05)，但治疗后1周的纹理VISIA绝对分值与治疗前差异无统计学意义(P>0.05)；
两组治疗后1周及1个月的毛孔VISIA绝对分值均低于治疗前，且治疗组患者治疗后1个月的毛孔VISIA绝对分值低于对照组(均P<0.05)；
两组患者治疗后1周及1个月的色素斑VISIA绝对分值与治疗前比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)，治疗组与对照组间的差异亦无统计学意义(均P>0.05)；
治疗组患者治疗后1周及1个月的皱纹VISIA绝对分值均低于治疗前且低于对照组，对照组患者治疗后1个月纹理VISIA的绝对分值低于治疗前(均P<0.05)，但治疗后1周的绝对分值与治疗前差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组患者各项指标的VISIA绝对分值比较 (x±s)

2.3 两组SOFT 5.5数值比较 治疗前，两组患者的皮肤pH值，水分、弹性和油脂的SOFT 5.5数值比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。治疗后1周及1个月，治疗组患者的皮肤pH值，水分、弹性的SOFT 5.5数值均高于治疗前且高于对照组，油脂的SOFT 5.5数值均低于治疗前且低于对照组(均P<0.05)；
而对照组患者治疗后1周和1个月的皮肤pH值，水分、弹性的SOFT 5.5数值，以及治疗后1周油脂的SOFT 5.5数值与治疗前比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)；
治疗后1个月，对照组患者油脂的SOFT 5.5数值低于治疗前(P<0.05)。见表2。

表2 两组患者各项指标的SOFT 5.5数值比较 (x±s)

随着年龄增长，皮肤中的成纤维细胞合成能力降低，导致胶原蛋白含量减少和结构改变，使皮肤变薄并失去弹性和张力，还可导致皮下脂肪减少、真皮纤维断裂、汗腺及皮脂腺分泌减少，从而出现皱纹、松弛及干燥等老化现象。为老化的皮肤补充胶原蛋白是抗衰老的关键，这是因为胶原蛋白进入皮肤后可引导上皮细胞迁移至缺损区，使上皮细胞产生趋化因子如血小板生长因子、纤维连接蛋白等，促进自身成纤维细胞合成胶原和其他细胞外间质成分，从而达到改善皮肤老化的目的[10]。类人胶原蛋白是人工合成且与天然胶原蛋白极其相似的高分子材料，其具有良好的组织相容性和易被吸收等优点，被广泛应用于抗皮肤老化中，目的是迅速补充皮肤组织流失的胶原蛋白，修复断裂的纤维框架，改善皮肤皱纹，恢复皮肤弹性[11]。类人胶原蛋白的微针导入疗法是目前临床上应用最广泛的抗皮肤老化疗法之一。类人胶原蛋白面膜虽然是一种无创方法且不需要专业技术人员操作，但目前关于这种大分子材料能否透过表皮吸收仍存在争议，多数学者认为其不能透过表皮被吸收，但Pan等[12]的研究结果显示，类人胶原蛋白的透皮吸收度较好，且加入某些促渗剂还可提高其透皮吸收率。路雪艳等[13-14]也报道类人胶原蛋白敷料有改善皮肤屏障功能、减轻皮损的作用。

PRF属于新一代血小板浓缩物，与第一代富血小板血浆相比，其具有制备简单等优点[15]。PRF含有大量的血小板，可释放碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-β、血小板源性生长因子、血管内皮生长因子、胰岛素样生长因子、表皮生长因子、白细胞介素-6等多种细胞因子，这些细胞因子可以促进骨形成、血管生成，以及细胞迁移、增殖和分化等生物学功能[16-18]。PRF的显微结构与人类天然纤维蛋白的结构相似，由纤维蛋白排列成疏松的三维立体网络结构，并聚集了大量血小板，多孔疏松纤维网状结构不仅有利于新生细胞的迁移和增殖，还能够使组织再生修复所需的氧气与相关营养成分更好地扩散，从而加速组织的愈合过程[19]。PRF的纤维蛋白能将血小板和生长因子以化学键结合起来，随后缓慢释放。Caterino等[20]的研究结果显示，PRF缓慢释放生长因子与其纤维网状结构中血小板逐渐激活有关。此外，陈铁楼等[21]通过电镜观察发现，血小板激活后的α-颗粒性物质释放其实是生长因子分泌的过程，分泌后的生长因子迁移到立体网状结构中。目前，PRF在促进创面愈合及软组织再生方面的疗效已得到证实[22]，然而其在抗皮肤老化中的应用研究尚少。李泽华等[23]研究发现，PRF与自体脂肪联合注射可以促进局部血管化、改善血运，从而获得良好的面部年轻化效果。PRF通过其含有的细胞因子发挥生物学作用，可以促进细胞增殖、基质改建和血管再生，其中碱性成纤维细胞生长因子是促进成纤维细胞生成胶原的重要细胞因子，表皮生长因子则可以促进上皮细胞、表皮细胞及真皮层细胞的增殖和迁移，加快新陈代谢，达到嫩肤、抗皱及滋润皮肤的效果，这些因子在PRF析出液中进一步浓集，可发挥更好的效果。

既往研究表明，A-PRF是在传统富血小板纤维蛋白基础上进行优化的血小板浓缩物，其含有大量的血小板，激活后可释放血管内皮生长因子、转化生长因子-β、碱性成纤维细胞生长因子等，这些生长因子具有促进细胞增殖、刺激血管化等功能[24-26]。本研究结果显示，治疗组患者完成治疗后的1周及1个月，面部皮肤状态均有显著改善，其中治疗组患者皮肤的皱纹、纹理、毛孔、水分、弹性和油脂方面的改善明显优于对照组，表现为细腻度及光泽度明显增加、细纹减少，主观感受皮肤滋润并有饱满感和弹性等，提示A-PRF联合类人胶原蛋白面膜可以显著改善皮肤的衰老状态，其效果优于单纯敷贴面膜。此外，国外有学者提出，促渗剂可以提高皮肤对类人胶原蛋白的吸收率[4]，而A-PRF是富含生长因子的液体，可起到类似促渗剂作用，因而可进一步提高外用类人胶原蛋白改善肤质的效果。本研究的创新点在于首次尝试采用A-PRF联合重组类人胶原蛋白面膜对面部光老化皮肤进行修复并取得良好的效果。

综上所述，采用A-PRF联合重组类人胶原蛋白面膜对女性面部光老化皮肤进行修复，可提升面部皮肤的水分和弹性，同时降低油脂、减轻细纹，对女性面部光老化皮肤具有明显的促修复作用，且该疗法具有无创、操作相对简单的优点，具有较好的临床应用前景。