冠状病毒症状多克隆抗体制备硕士论文

　 SARS冠状病毒spike蛋白受体结合域的表达及S1抗原表位多肽多克隆抗体制备

　英文缩略词表 3-4

　中文摘要 4-7

　英文摘要 7-9

　前言 10-15

　第一部分 PET32(A)-RBD 重组质粒的构建及原核表达 15-29

　 1. 材料 15-17

　 2. 方法 17-23

　 3. 结果 23-27

　 4. 讨论 27-29

　第二部分 S1 蛋白抗原表位多肽合成及其多克隆抗体制备 29-37

　 1. 材料 29-30

　 2. 方法 30-32

　 3. 结果 32-35

　 4. 讨论 35-37

　参考文献 37-39

　小结 39-40

　综述 40-46

　 参考文献 44-46

　致谢

　【学科专业名称】 免疫学

　【学位年度】 2010

　【论文级别】 硕士

　【关键词】 SARS; Spike蛋白; 受体结合域; 表达; 多肽; 抗体;

　【英文关键词】 SARS; Spike Protein; Receptor binding domain; Gene Expression; Polypeptide; antibody;

　【中文摘要】 目的 利用大肠杆菌BL21原核表达系统对spike蛋白的受体结合域(RBD)片段进行融合表达,为进一步研究spike蛋白免疫原性及抗原特性提供了物质基础,同时建立HIS融合表达实验室系统;运用Fmoc技术合成纯化抗原多肽,免疫小鼠获得多克隆抗体,为进一步研究抗体特性并应用于SARS疾病的预防、预后诊断及治疗提供了物质基础。

　方法 1、构建PET32(a)-RBD重组质粒进行原核表达依赖高效T4连接酶连接PET32(a)和RBD,转化感受态BL21大肠杆菌。提取质粒酶切电泳初步确定获得PET32(a)-RBD重组质粒,送TaKaRa公司测序。以IPTG诱导BL21大肠杆菌对融合蛋白进行表达,运用聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western-blotting来检测表达产物,保存菌种。

　2.SARS-CoV的S1蛋白抗原表位多肽合成及其抗体的制备 以DNAstar软件对S1蛋白RBD片段的原始序列进行软件分析,选择三段亲水性强,抗原指数高的多肽,运用Fmoc固相法合成三条肽链:CQ19(CFSNVYADSFVVK GDDVRQ)、TY-14(TRNIDATSTGNYNY)和LV-11 (LRPF...

　【英文摘要】 Objective The objective of our study is to construct the basis of HIS fusion expression model through amplifying SARS-Cov S protein RBD gene and fusing with PET-32(a) vector to perform the prokaryotic expression.It will be the supportment of searching spike protein and SARS prevention, prognosis diagnosis, treatment and so on. Methods 1, Constructing of PET32(a)-RBD plasmid and performing prokaryotic expression. PET32(a) vector and RBD fragment were combined by high-efficiency T4 joinase, which ...