牙周组织_硝苯地平对鼠牙移动过程中牙周组织中MMP-1的影响

　　[摘要]目的:观察在硝苯地平作用下大鼠牙齿移动过程中牙周组织中MMP-1的表达。方法:选取60只雄性SD大鼠随机分为加力组、加力+低浓度硝苯地平组和加力+高浓度硝苯地平组,每组再按观察时间点的不同分为5组。用免疫组化方法结合计算机光密度分析系统检测并比较各组样本的张力侧与压力侧MMP-1的表达。结果:硝苯地平可以引起正畸牙周膜中MMP-1表达的减少,并呈药物浓度增加而减少的更加明显。结论:在硝苯地平影响下牙周膜张力侧和压力侧MMP-1表达减少,MMP-1参与了大鼠正畸牙齿移动过程中牙周组织ECM降解与合成的调节。
　　[关键词]金属基质蛋白酶-1;硝苯地平;细胞外基质(ECM);钙离子通道
　　[中图分类号]Q813.1[文献标识码]A[文章编号]1008-6455(2010)06-0862-03
　　
　　The effects of nifedipine on expression of MMP-1 on periodontal tissues in the process tooth movement of rat
　　ZHAI Ma-li,ZHANG Miao-miao,LIU Di,LIU He-ting,WANG Xu
　　(Department of Orthodontics,Stomatological School of Harbin Medical University,Harbin 150001,Heilongjiang,China)
　　Abstract:ObjectiveTo observe the effects of nifedipine (NIF) on expression of MMP-1 on periodontal tissue of first maxillary molar of rat during tooth movement.MethodsSixty male Sprague-Dawley rats were randomly divided into three groups: orthodontic group and groups that received either low or high concentration nifedipine. And each group was divided into 5 parts determined by different time points. The expression of MMP- 1 on tension side and pressure side were examined by immunehis tochemical dyeing and analyzed with photodensitometry.ResultsThe expression of MMP-1 decreased after using Nifedipine, and the decline was more obviously with higher concentration of Nifedipine.ConclusionThe expression of MMP-1 on tension side and pressure sidewere decreased. MMP-1 participates the accommodation synthesis and degradationof ECM during the tooth movement of rat.
　　Key words:matrix metalloproteinase-1;nifedipine;extracellular matrix;calciumion channel
　　
　　正畸牙齿移动是牙周膜和牙槽骨的同时发生改建的过程,牙齿的移动除了牙槽骨的改建,还包括牙周膜的主要组成部分细胞外基质,胶原的变性,消退和重建[1]。金属基质蛋白-1(matrix metalloproteinase 1 ,MMP-1)为间质型胶原酶,在细胞外降解过程中是必不可少的[2]。本实验采用SD大鼠建立正畸牙齿移动模型,应用免疫组化法观察并对比使用硝苯地平前后ECM内MMP-1的变化。
　　
　　1材料和方法
　　1.1 材料
　　1.1.1 实验动物:选取60只健康雄性成年SD大鼠,体重250g左右。
　　1.1.2 实验分组将60只大鼠随机分入以下3组:加力组(组1)、加力+ 低浓度硝苯地平组(组2)、加力+ 高浓度硝苯地平组(组3),每组20只大鼠。每组再按1、3、7、14 和21 天分为5个亚组,每组4只大鼠。
　　1.1.3、建立动物模型:麻醉下将一段Ni-Ti螺旋拉簧结扎于大鼠上颌第一磨牙与两个上颌切牙间,以两切牙为支抗向近中移动第一磨牙,力值为60g,每天加力1次,选取大鼠右侧上颌为实验侧。大鼠药物灌胃的方法:将硝苯地平片研磨后用生理盐水配置成混悬液,浓度分别为10mg/kg、40mg/kg。每次灌胃前取大鼠称重,按不同药物浓度计算每只大鼠所需药量,用灌胃针将药液直接推注入胃。每只大鼠早晚灌胃两次。每只大鼠双侧上颌牙齿均受药物作用,但只有实验侧上颌牙齿既受药物作用又受力的作用。在牙齿移动第0、1、3、5、7、10、14天,用4%多聚甲醛溶液(pH7.4) 灌注双侧颈总动脉30min,处死大鼠后,取上颌标本,保留完整左侧第一磨牙及周围牙槽骨组织,放入4 %多聚甲醛固定液中4℃固定24h,10%乙二胺四乙酸的磷酸盐缓冲溶液中脱钙约28天。按常规系列乙醇脱水、制备石蜡组织切片,厚约5μm,分别行苏木精- 伊红染色和免疫组化染色。
　　1.1.4 光镜观察与图像分析:分别对大鼠上颌实验侧与对照侧第一磨牙的远颊根远中侧(张力侧)、中颊根近中侧(压力侧)的颈1/3牙周组织中阳性信号进行观察和计算机光密度测量,比较MMP-1表达的变化。
　　1.1.5 统计学分析:首先使用裂区设计进行多因素分析,其中时间因素(T)根据不同时间点分为5个水平;药物因素(A)根据不同药物剂量分为3个水平;部位因素(B)根据牙根的张力侧与压力侧分为2个水平;加力因素(C)根据是否加力分为2个水平。其次,绘制柱状图描述MMP-1随时间点的变化。
　　
　　2结果
　　2.1 HE染色
　　2.1.1 各组对照侧:一组的牙周膜胶原纤维排列规则,成纤维细胞分布均匀。二、三组牙周膜细胞体积增大,核浓染,胞浆丰富,呈活跃状态。
　　2.1.2 一组实验侧:张力侧牙周膜成纤维细胞数量较多,体积大,靠近牙根侧;胶原纤维分布呈方向性(延力的方向),牙周膜宽度在14天组表现增宽,21天组明显;血管丰富。压力侧牙周膜成纤维细胞数量较少,体积小,靠近牙槽骨侧;胶原纤维分布无方向性;血管较少,牙周膜宽度变化与张力侧相反。
　　2.1.3 二、三组实验侧:牙周膜细胞呈长梭形静止状态,细胞不活跃,随药物浓度增加静止状态明显,在14天组表现突出。
　　2.2免疫组化染色:图文分析结果如下:
　　2.2.1对照侧:正常组织中就有基质金属蛋白酶的表达,在成纤维细胞、巨噬细胞和血管内皮细胞胞浆及细胞间质中都可以看到(A:P 　　2.2.2一组实验侧:阳性信号较其对照侧表达(C:P