Ｖｐ５３２ｎｍ激光治疗兔耳增生性瘢痕的实验研究:激光治疗疤痕

　　[摘要]目的:探讨可调脉宽（Vp）532nm激光对兔耳增生性瘢痕微血管、成纤维细胞、胶原纤维的影响。方法:利用兔耳腹侧面建立增生性瘢痕模型,按不同时间取材,对比研究Vp532nm激光对兔耳增生性瘢痕微血管、成纤维细胞、胶原纤维的影响。结果:激光治疗后微血管、成纤维细胞、胶原纤维较对照组明显减少。结论:Vp532nm激光可明显抑制兔耳增生性瘢痕。
　　[关键词]Vp532nm激光；增生性瘢痕；微血管；成纤维细胞； 胶原纤维
　　[中图分类号]Q813.1 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2009）02-0207-03
　　
　　Effects of VP532nm laser on the hypertrophic scar in rabbit ears
　　WANG Xing-wu,SUN Xiao-yan,GUO Dang-xue,YAN CHao-ying,ZHANG Mei-fang
　　(1.Department of Dermatology; 2.Department of Pathology. Shaanxi Provincial
　　People"s Hospital,Xi"an 710068, Shaanxi,China)
　　
　　Abstract:ObjectiveTo investigatethe effect of VP532nm laser onhypertrophic scar in rabbit ears.Methodshypertrophic scarsin rabbit ears were established, specimens were harvested on different time, microvascular, fibroblast and collagenous fiber were observed.ResultsCompared with the control group, The expressions of microvascular、fibroblast and collagenous fiber in the experimental group were obviously weaker. ConclusionVP532nm laser mayplay a role ininhibiting hypertrophic scarring in rabbit ears.
　　Key words: VP532nmlaser; hypertrophic scar; microvascular；fibroblast；collagenous fiber
　　
　　增生性瘢痕是医学美容界的一个难题，目前没有一种方法可以阻止瘢痕的发生。近年来，对瘢痕血管形成的研究颇多，并已证实瘢痕的发生、发展、转归及预后与瘢痕组织的微血管活性密切相关。
　　Vp532nm激光治疗皮肤血管性疾病已取得良好的效果，增生性瘢痕内存在大量新生血管，Vp532nm激光是否可以用来治疗增生性瘢痕？本实验通过建立兔耳增生性瘢痕模型，观察在瘢痕形成过程中微血管、成纤维细胞、胶原的变化，以及可调脉宽532nm激光对其的影响，探索激光防治增生性瘢痕的可能机制。
　　
　　1材料和方法
　　1.1 实验动物及设备：实验动物：大耳白兔10 只,雌雄各5只,体重1.5～2.0kg，由西安交通大学医学院实验动物中心提供；设备：Vp532激光，美国科医人公司生产。
　　1.2实验方法
　　1.2.1 建立动物模型：参照 牛扶幼[1]等建立动物模型的方法略作改进。常规术前准备，2%利多卡因局部麻醉，将兔子固定在操作台上。在兔耳腹侧手术切除全层皮肤并刮去软骨膜，形成4～6个直径1cm或1.5cm的创面。术后1周去除创面痂皮，3周创面上皮化，形成早期增生性瘢痕动物模型。
　　1.2.2 实验分组与处理：增生性瘢痕形成后切取一组标本，然后将其余的随机分为激光治疗组和对照组。治疗组采用Vp532nm激光治疗，治疗参数是光斑直径2～5mm，频率2.5Hz，脉宽10～30ms，能量密度12～20J/cm2，以表面发白或发灰而未破损为宜。开始时，每周治疗1次，一个月后改为每2周1次，2个月后改为每月1次。对照组不进行治疗。
　　1.2.3 观察指标：分别在治疗后1、4、12周后，切取标本，10%的福尔马林固定。HE染色切片，测微尺测出瘢痕最高点至耳软骨表面的垂直厚度（a）、瘢痕周边正常皮肤至耳软骨表面的垂直厚度（b），测算出瘢痕增生指数（HI=a/b）；每张HE染色组织切片分别随机选5个不重叠视野（×200），计数成纤维细胞数。Masson 染色切片，观察胶原分布情况。免疫组化CD34染色检测瘢痕中微血管的变化，在瘢痕的增殖活跃区随机选择8个高倍视野，计数每个视野中微血管数量，然后求其平均数，按Weidner的方法计算每平方毫米的微血管数量。1.2.4 统计学分析：数据用均数±标准差即（x±s）表示，采用t 检验，以P＜0.05为有显著性差异。
　　
　　2结果
　　2.1 瘢痕形成情况：兔耳腹侧创面的愈合,具有增生性瘢痕的特点，上皮化后20天为增生最高峰，增生块的厚度为耳腹侧面正常皮肤的2～3倍，呈鲜红色, 增生范围不超过原创缘。部分兔耳增生块孪缩,使兔耳耳廓畸形,类似人瘢痕孪缩所致的畸形，光镜下见图1a、1b。
　　2.2组织切片观察
　　2.2.1 HE染色切片
　　2.2.1.1 对照组：真皮层明显增厚,为正常真皮厚度的2～3倍, 主要是大量聚集的成纤维细胞及胶原纤维, 成纤维细胞呈梭形或椭圆形, 胞浆丰富,核大深染，排列无序,有旋涡状结构。真皮浅层胶原纤维呈结节或旋涡状排列，胶原纤维含量丰富、粗大,排列紊乱。增生的真皮中可见扩张的毛细血管及炎症细胞浸润，见图2a。瘢痕增生指数及成纤维细胞数详见表1、表2。
　　2.2.1.2 治疗组：真皮层较对照组变薄，增生性瘢痕的胶原纤维结构整齐、排列疏散、细胞成分明显减少，见图2b。治疗后1周组瘢痕增生指数及成纤维细胞数与对照组相比，无显著性差异（P�0.05）。治疗后4、12周组瘢痕增生指数及成纤维细胞数与对照组相比，有显著性差异（P�0.05）。详见表1、表2。
　　
　　2.2.2 免疫组化检查微血管计数：光镜下瘢痕组织中可见棕黄色染色的微血管，呈圆形、椭圆形或者条索形，见图3a、3b。治疗组兔耳瘢痕组织微血管计数明显低于对照组。治疗组与对照组相比有显著性差异（P 　　沈锐[2]、岳毅刚[3]等用VEGF 抗体对增生性瘢痕动物模型进行靶向血管治疗,使瘢痕体积明显减小,血管密度明显降低,胶原纤维减少排列整齐，结果表明,VEGF 抗体靶向血管治疗能抑制增生性瘢痕的生长,具有重要的临床应用价值。宋保强[4]采用血管内皮抑制素作用于增生性瘢痕动物模型，发现血管内皮抑制素注射后瘢痕组织真皮层变薄，血管数量及成纤维细胞数量明显减少，胶原纤维较细致，排列有序。提示血管内皮抑制素对增生性瘢痕的形成产生了明显的抑制作用。宋保强[5]等构建基因重组血管生成抑制因子1并将其作用于兔耳增生性瘢痕模型，发现兔耳瘢痕中血管生成受到明显抑制，瘢痕为成熟期表现，提示基因重组血管生成抑制因子1在抑制瘢痕组织血管生成的同时对增生性瘢痕的形成起到了明确抑制作用。因此，通过影响血管因素来防治瘢痕组织的过度增生是可行的。
　　近年来脉冲染料激光应用于临床治疗各种血管性病变的同时,发现其对瘢痕有一定作用[6]。Vp532nm激光是根据选择性激光光热作用原理设计，波长532nm，为绿色激光，位于血红蛋白的最佳吸收区内，能最大限度地被血红蛋白吸收并转变成热量，使血管萎缩或闭塞。在皮肤组织中的穿透深度适中，脉冲的宽度可调，使得激光能够在组织热弛豫时间上与各种直径的血管和病变区域相匹配，可以有效地治疗各种类型的皮肤血管性疾病[7]。与脉冲染料激光相比，具有热损伤小，没有术后紫癜反应等优点。
　　本研究发现，Vp532nm激光治疗增生性瘢痕模型后，瘢痕颜色变淡，质地变柔软，微血管、成纤维细胞、胶原纤维数量减少，排列整齐，提示Vp532nm激光可抑制兔耳瘢痕增生程度,但其对于人类增生性瘢痕的作用还有待于进一步的研究。
　　
　　[参考文献]
　　[1]牛扶幼,牛永敢,陈言汤.兔耳增生性瘢痕模型的建立[J].中国医学工程，2004，（12）：12-17.
　　[2]沈锐,利天增,祁少海.靶向血管治疗增生性瘢痕的实验研究[J].中华整形外科杂志2003，7，19（ 4）：254-257.
　　[3]岳毅刚,蒋常文,李佩英. VEGF 抗体靶向血管治疗增生性瘢痕的研究[J].中国实用美容整形外科杂志，2006，17（1）： 68-71.
　　[4]宋保强,鲁开化,张阳,等.兔耳增生性瘢痕血管生成及腺病毒转染基因重组血管生成抑制因子1[J].中国修复重建外科杂志，2008， 22（1）：70-74.
　　[5]宋保强,鲁开化,郭树忠.兔耳增生性瘢痕与血管内皮抑制素的抑制[J]. 中国临床康复2005，9（18）：111-113.
　　[6]Kono T,Ercocen AR, Nakazawa H,et al .The flashlamp-pumped pulsed dye laser (585 nm) treatment of hypertrophic scars in Asians[J]. Ann Plast surg,2003,51(4):366-371.
　　[7]John Louis R atz 著,刘辅仁主译.皮肤外科学[M ].西安:世界图书出版公司,1999:319-324.
　　
　　[收稿日期]2008-09-15[修回日期]2009-01-08
　　编辑/张惠娟