注射用鹿瓜多肽细菌内毒素检查方法的探讨_注射用鹿瓜多肽

　　[摘要]目的研究注射用鹿瓜多肽对细菌内毒素检查实验的干扰情况,并建立其细菌内毒素检查的质量标准。方法参照《中国药典》2005年版二部附录ⅪE细菌内毒素检查法进行试验,用二个不同厂家的鲎试剂对注射用鹿瓜多肽进行干扰试验研究。结果注射用鹿瓜多肽稀释成≥ 25倍时对细菌内毒素检查无干扰作用。结论用细菌内毒素检查法(凝胶法)检测注射用鹿瓜多肽热原是可行的。
　　[关键词]细菌内毒素; 注射用鹿瓜多肽; 鲎试剂
　　[中图分类号] R927.1 [文献标识码]A [文章编号] 1005-0515(2010)-10-029-01
　　
　　Research of BacterialEndotoxin Test in Cervus and Cucumis Polypeptide for Injection
　　Zhangxiuhu
　　(Jiangsu Institute for Drug Control223800)
　　[Abstract]ObjectiveTo study the interference of Cervus and Cucumis Polypeptide for Injection in bacterial endotoxin testand to establish bacterial endotoxin testmethod for the sample・Method According to China Pharmacopoeia 2005, inhibition or enhancement test for bacterial endo tox in test was performed with Amebocyte Lysatemanufac-tured by two different companies・ResultsThe interfere on the determination of bacterial endotox in scan be ex-cluded when Cervus and Cucumis Polypeptide for Injection for Injection was diluted ≥ 25times Conclusion Examination the pyrogen of the Cervus and Cucumis Polypeptide for Injection by the bacteria endotoxin test isfeasible.
　　[Keywords] Cervus and Cucumis Polypeptide for Injection for Injection; Bacterial endotoxin test; Interference
　　
　　注射用鹿瓜多肽为注射用无菌粉末,常用于静脉滴注,现标准规定用热原法检查 ,但其影响因素多,检验成本大,耗时长。为此,笔者探讨注射用鹿瓜多肽的细菌内毒素检查法,来代替热原检查法,其实验方法如下。
　　1仪器与试剂
　　1.1样品注射用鹿瓜多肽 批号:20091152、20091046、20090935,规格8mg ,生产企业:黑龙江迪龙制药有限公司; 注射用鹿瓜多肽批号090622、090714、090806,规格8mg, 生产企业:黑龙江江世药业有限公司 。
　　1.2 试剂细菌内毒素工作标准品(批号:150601-200965,规格180EU/ml,中国药品生物
　　制品检定所);鲎试剂(TAL):灵敏度0.25EU/ml,批号1002090, 湛江博康海洋生物有限公司; 0.25EU/ml 090416,湛江安度斯生物有限公司;细菌内毒素检查用水(BET水),内毒素≤0.003EU/ml,批号W2008 04, 中国药品生物制品检定所)
　　1.3 仪器:ZH-2型旋涡混匀器;101-3型电热恒温干燥箱; ET-96型内毒素凝胶法测定仪。
　　2方法与结果
　　2.1热原检查按热原检查法[1]操作,以上所取各生产企业的每批样品热原检查均符合规定。
　　2.2TAL标示灵敏度(λb)复核按细菌内毒素检查法[2]操作,各批TAL灵敏度标示符合规定。
　　2.3限值(L)的确定[2]按公式L=K/M确定,注射剂K为5EU/(kg・h);注射用鹿瓜多肽最大注射剂量为每次24mg,按60kg成人标准体重,1h最快给药速度计算,即:L=K/M=12.5EU/mg
　　2.4注射用鹿瓜多肽细菌内毒素限值为12.5EU/mg,对应灵敏度0.5～0.03 EU/ml的鲎试剂,按公式计算,对应的有效稀释倍数分别为25倍、50倍、100倍、200倍。
　　2.5取注射用鹿瓜多肽样品,用BET水稀释成1:25、1:50、1:100、1:200、倍系列浓度,记此系列溶液为Sw;另制备同样稀释倍数并含有2λ浓度内毒素系列的样品溶液,记此系列溶液为SE。选择两个鲎试剂生产企业,灵敏度均为λ=0.25EU/ml的TAL,分别与SW和SE两个系列稀释液反应,依次记为NPC和PPC,正式进行注射用鹿瓜多肽干扰试验预试验,试验重复2管,另分别设PC、NC管各2支,分别做阳性和阴性对照。结果见表1。
　　
　　对另一厂家3个批号的注射用鹿瓜多肽的干扰试验预试验,都得出以上相同结论,因此可初步确定注射用鹿瓜多肽的最小不干扰稀释倍数为25倍,可在此浓度下进行干扰验证试验。
　　2.6干扰试验从预试验结果可知, 注射用鹿瓜多肽在稀释到50倍时可排除干扰,以细菌内毒素检查用水及注射用鹿瓜多肽50倍的稀释液,分别将细菌内毒素工作标准品配成浓度为2.0λb,1.0λb,0.5λb,0.25λb4个浓度的溶液(分别称X系列和Y系列),同时两个系列分别以细菌内毒素检查用水和注射用鹿瓜多肽50倍的稀释液作阴性对照(NC)。以两个不同企业,灵敏度均为0.25EU/ml的TAL,进行干扰试验[2]。结果见表2。
　　结果表明注射用鹿瓜多肽稀释50倍后,消除了对鲎试剂与细菌内毒素反应的抑制作用。供试品的λ值均在0.5～2.0λb(0.125～0.5 EU/ml)
　　因此,在进行该品种的细菌内毒素检查时可选用的鲎试剂最大的灵敏度:λ= 0.125EU/ml。同时,用以上方法和试剂对注射用鹿瓜多肽100倍的稀释液进行干扰验证,其结果为Et=Es=λb,证明无干扰。
　　2.7 注射用鹿瓜多细菌内毒素检查 按《中国药典》2005年版二部附录XIE中细菌内素素检查法,使用二批不同厂家的鲎试剂分别对样品进行细菌内毒素检查,并同时设立样品的自身对照管,结果见表3
　　3讨论
　　注射用鹿瓜多肽对鲎试剂与细菌内毒素的反应无干扰作用。干扰试验结果证实, 注射用鹿瓜多肽在稀释倍数≥25倍时,对灵敏度在0.5～2.0λb(0.125～0.5 EU/ml)的鲎试剂无干扰作用,因此注射用鹿瓜多肽用细菌内毒素检查法是可行的。按细菌内毒素检查法[2]进行检查,每1mg本品中含细菌内毒素量应小于12.5EU/mg。
　　参考文献
　　[1] 国家药典委员会.中国药典2005版二部附录ⅪD・北京:化学工业出版社,2005.85.
　　[2] 国家药典委员会.中国药典2005版二部附录ⅪE・北京:化学工业出版社,2005.85.
　　[3] 刘婉.注射用更昔洛韦细菌内毒素检查法的实验研究[J].中国实用医药2008, 3(27): 69-71.
　　[4] 张云平,陈启钊. 注射用血栓通细菌内毒素检查方法的探讨[J]. 中国药师, 2010,13(3).