【IL-1A基因多态性与深圳市人群牙周炎的相关性研究】 牙周炎痛怎么办

　　[摘要]目的：探讨IL-1A-889的基因多态性与慢性牙周炎及侵袭性牙周炎易感性的相关关系。材料和方法：选取华南地区慢性牙周炎患者57例，侵袭性牙周炎患者45例，健康志愿者50例，从颊黏膜脱落细胞中获得DNA，用PCR-RFLP法检测IL-1A-889基因型的分布。结果：慢性牙周炎患者的IL-1A-889基因型的分布以及T等位基因的出现频率显著高于对照组，侵袭性牙周炎患者与对照组相比无显著性差异。结论：IL-1A-889基因多态性与深圳市慢性牙周炎患者的易感性有显著相关性。
　　[关键词]IL-1；基因多态性；慢性牙周炎；侵袭性牙周炎
　　[中图分类号]R78 [文献标识码]A[文章编号]1008-6455（2011）01-0071-03
　　
　　Study on the association of IL1A gene polymorphism with periodontitis in Shenzhen individuals
　　LIU Jian-lin,ZHAO Zhong-cheng
　　(Department of Stomatology, The Second TCM Hospital of Shenzhen，Shenzhen，518034 Guangdong,China)
　　
　　Abstract:ObjectiveTo discuss the association of the IL1A (-889) gene polymorphism in Shenzhen individuals with chronic and aggressive periodontitis.Material and methodsDNA was obtained from oral swabs of 152 shenzhen individuals and was amplified using the polymerase chain reaction (PCR). Products were submitted to digestion and were analyzed by electrophoresis to distinguish the C and T alleles through Restriction Fragment Length Polymorphism method (RFLP).Results A significant difference in the genotype distribution was observed when comparing the chronic periodontitis group with the control group. Moreover, a higher incidence of the T allele in the chronic periodontitis group was detected when compared with the control group. No statistical difference was observed when the aggressive periodontitis group was compared with the control group.Conclusion These data show an association of the IL1A (-889) polymorphism with chronic periodontitis in Shenzhen individuals.
　　Key words:IL-1;gene polymorphism;chronic periodontitis;aggressive periodontitis
　　
　　牙周炎是一种常见的发生在牙周支持组织的感染性疾病，不同的个体对牙周炎的易感性不同。近年来，牙周炎敏感性相关基因的研究成为热点，越来越多的研究证明IL-1基因多态性与牙周炎敏感性、牙齿缺失等的相关性最为密切[1-5]。本研究拟通过检测IL-1A-889的基因多态性在华南地区牙周炎患者中的分布，观察IL-1基因多态性对慢性牙周炎及侵袭性牙周炎易感性的影响，以期从基因水平探讨牙周炎发病的遗传学机制。
　　
　　1材料和方法
　　1.1 研究对象：选择前来深圳市第二中医院口腔科就诊的患者152例。研究对象分成3组：慢性牙周炎患者（57例）、侵袭性牙周炎患者（45例），牙周健康志愿者(50例)。所有受试者来自深圳市常驻人口，三代均为汉族，社会经济背景相似，无口腔正畸治疗史、无明显错牙合 畸形，无全身系统性疾病。组间无年龄和性别分布差异。慢性牙周炎的纳入标准：全口至少有10颗可进行牙周评价的牙齿,至少有4颗磨牙(不包括第三磨牙)，不同象限至少2个部位牙周袋深度(PD)≥5 mm或附着丧失量(AL)≥2mm，X线显示牙槽骨吸收≥ 1/3。侵袭性牙周炎的纳入标准：快速的附着丧失和骨破坏且与菌斑堆积量不成正比，包括第一恒磨牙在内至少2颗恒牙有邻面附着丧失，X线片示第一恒磨牙典型的弧形吸收,下切牙广泛的水平吸收。对照组为50例牙周健康志愿者，年龄3l～70岁，均无病理性牙周附着丧失。所有研究对象均填写了知情同意书。
　　1.2样本采集和DNA提取：消毒棉签取颊粘膜拭子，室温下自然干燥过夜。剥取拭子表层，加Chelex-100 200μl，蛋白酶K(20�/ml)10μl，混匀，55℃水浴3h，煮沸8min，置冰上3min，12 000r/min离心2min，取上清，-20℃保存,OD260检测浓度。
　　1.3多态性目的基因片段扩增和酶切：本研究采用聚合酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测受试者IL-1基因多态性的基因型和等位基因。IL-1A-889/Nco I基因多态性目的基因引物：上游引物-5"-aagcttgttctaccacctgaactaggc-3" 和下游引物5"-ttacatatgagccttccatg-3" [4]。PCR产物为99bp。PCR反应体系（25μl）：DNA模板5μl，10×Premix PCR缓冲液2.5μl，Taq DNA聚合酶1U，上下游引物各1μl，无菌去离子水补足体积为25ul。 PCR反应参数为94℃ 5min,30×（94℃ 30s，56℃ 40s，72℃ 50s），72℃ 5min。PCR产物经Nco I 酶在37℃消化4h，酶切产物经电泳分析鉴定。
　　1.4 PCR质量控制措施：为保证基因分型结果没有偏倚，所有标本均在盲法下进行测定。随机抽取10%样本在单盲情况下重复测定各位点基因型，以检验所测基因型的重复性和可靠性。
　　1.5 统计分析：所有实验数据输入SPSS 13.0(SPSS Inc, Chicago, IL, USA)统计软件处理。病例组和对照组基因型分布和等位基因频率用卡方检验，并计算比值（odds ratio, OR）和95%的可信区间（confidence intervals, CI）表示相对危险度，各基因型Hardy-Weinberg平衡拟合优度由观察值和期望值进行卡方检验，自由度为1。所有统计均为双侧检验，检验水准 P＜0.05。
　　
　　2结果
　　2.1 PCR 质量控制结果：各位点随机抽取10%(6 例) 的样本,重复检测基因型结果与之前完全一致,证明本试验结果是可靠的。
　　2.2 IL-1A-889的基因多态性：目的基因PCR产物片段为99bp。经Nco I 酶切后，出现83bp和16bp两个产物即存在C等位基因，若只出现99bp的一个产物，即存在T等位基因。因此存在3种基因型：CC、CT、TT。对照组的各基因型Hardy-Weinberg平衡拟合优度由观察值和期望值经卡方检验无差异。慢性牙周炎组与对照组相比，IL-1A-889基因型分布存在显著差异（χ2检验=9.493，P=0.009），相反，侵袭性牙周炎组与对照组相比，IL-1A-889基因型分布无显著差异（χ2检验=3.728，P=0.155）。进一步统计结果显示CT和TT基因型的分布可能与慢性牙周炎相关。而且，慢性牙周炎组出现了较高的T等位基因分布（32.5%），相反，健康对照组T等位基因的出现率较低（16%）。此结果进一步揭示携带T等位基因的个体罹患慢性牙周炎的风险性相对较高。而侵袭性牙周炎组与其他各组间均无显著差异。见表1、表2。
　　
　　3讨论
　　牙周炎是遗传因素、环境因素和个人行为长期共同作用的结果，越来越多的研究证明牙周病的易感性与遗传因素密切相关。白细胞介素是一种重要的炎症反应调节因子，与慢性炎症的活跃性有着密切的关系，IL-1基因簇定位于2q13，包括编码IL-1a、IL-1β的IL-1A、B基因。ILs基因簇各基因型和等位基因频率在不同种族、地域、疾病的人群中分布特点不一致，这是由于不同种族和地区的人群发生了基因漂移，某种基因的多态性在某一群体中产生较大影响，是疾病的重要病因，而在另一群体中起作用的可能是其它基因。本研究调查了IL-1A-889／NcoI基因多态性在华南地区人群中的分布，发现慢性牙周炎患者基因型的分布以及T等位基因的出现频率显著高于健康对照组，黄海云等[5]在四川汉族人的研究中，也发现IL-1A-889基因型与慢性牙周炎存在相关关系。这一研究与Moreira等[4]在巴西人群中的研究相似，慢性牙周炎患者中T等位基因的出现频率更高,他们还发现IL-1A-898的基因多态性与牙周炎之间的严重程度无显著相关性。Sakellari等[6]在希腊人群的研究中也观察到T等位基因的出现频率在慢性牙周炎患者中似乎更普遍，尽管差异没有统计学意义。然而， Rogers等[7]的研究发现IL-1A-898基因多态性与白种人的慢性牙周炎之间没有显著相关性。关于侵袭性牙周炎，本研究发现IL-1A-889基因多态性与对照组相比无显著差异，与之前大多数国内外学者的研究结果一致[4-5]。而Brett等[8]在欧洲白种人的研究中发现IL-1A-889 和IL-1B +3954的复合等位基因与慢性牙周炎无关，而是侵袭性牙周炎的重要相关基因。可见，不同种族之间IL-1A的基因多态性并不完全一致，有必要深入研究种族之间的差异。
　　Meisel等[9]分析了吸烟、年龄、性别、菌斑、受教育程度与ILs基因型与牙周破坏程度的关系，发现吸烟、年龄、菌斑、受教育程度都是牙周破坏的危险因素。Laine等[10]在研究成人牙周炎IL-1家族基因多态性时，将龈下菌斑中Pg和Aa的存在与吸烟这两个危险因素纳入其内，结果发现，没有Pg和Aa存在的牙周炎患者，IL-1复合等位基因T的检出率高于对照组。McGuire等[2]用IL-1基因多态性和吸烟这两个危险因素评价患牙早期脱落率，得出了基因型阳性和基因型阴性的非吸烟者与基因型阴性的吸烟者患牙的早期脱落率一致的结论。Moreira等[4]的研究则证明当排除了吸烟这个促进牙周炎病程发展的危险因素，在巴西人群中IL-1A889的基因的分布以及T等位基因的出现频率均显著高于对照组和混合吸烟组，可见吸烟相关的危险因素可削弱IL-1A基因多态性与慢性牙周炎的相关性。而且，有研究报道吸烟人群中龈沟液中IL-1A的浓度低于不吸烟人群[9]。可能的原因是吸烟人群中龈沟液中中性粒细胞数目减少，炎症反应降低，引起IL-1A的分泌减少，或者是吸烟直接抑制了IL-1A的产生。本研究中收集的研究对象中吸烟患者例数较少，所以未将其作为分组因素，今后的研究中需加大样本量，有效地排除吸烟这一影响因素。
　　综上所述，本研究证实IL-1A基因在889位点（C/T）的基因多态性可作为评估华南地区人群慢性牙周炎的易感因素。今后的研究需将遗传因素、环境因素和个人行为综合起来考虑，进一步深入阐明影响汉族人群牙周病发生、发展的生物学机制，以期为临床个性化治疗提供参考。
　　
　　[参考文献]
　　[1]Grigoriadou ME, Koutayas SO, Madianos PN,et al. Interleukin-1 as a genetic marker for periodontitis:review of the literature[J]. Quintessence Int, 2010,41(6):517-525.
　　[2]McGuire MK, Nunn ME. Prognosis versus actual outcome. IV. The effectiveness of clinical parameters and IL-1 genotype in accurately predicting prognoses and tooth survival[J]. J Periodontol,1999,70(1):49-56.
　　[3]Huynh-Ba G,Lang NP,Tonetti MS,et al. The association of the composite IL-1 genotype with periodontitis progression and/or treatment outcomes: a systematic review[J].J Clin Periodontol,2007, 34(4):305-317.
　　[4]Moreira PR,Costa JE,Gomez RS,et al.The IL1A (-889) gene polymorphism is associated with chronic periodontal disease in a sample of Brazilian individuals[J]. J Periodontal Res,2007,42(1):23-30.
　　[5]黄海云,章锦才.白细胞介素1基因多态性与四川地区慢性牙周炎相关关系的研究[J].华西口腔医学杂志,2004,22(5):415-419.
　　[6]Sakellari D,Koukoudetsos S,Arsenakis M,et al. Prevalence of IL-1A and IL-1B polymorphisms in a Greek population[J].J Clin Periodontol,2003, 30(1):35-41.
　　[7]Rogers MA,Figliomeni L,Baluchova K,et al. Do interleukin-1 polymorphisms predict the development of periodontitis or the success of dental implants[J]? J Periodontal Res,2002,37(1):37-41.
　　[8]Brett PM,Zygogianni P,Griffiths GS,et al. Functional gene polymorphisms in aggressive and chronic periodontitis[J].J Dent Res,2005,84(12):1149-1153.
　　[9]Meisel P,Schwahn C,Gesch D,et al. Dose-effect relation of smoking and the interleukin-1 gene polymorphism in periodontal disease[J].J Periodontol, 2004,75(2):236-242.
　　[10]Laine ML,Farré MA,González G,et al. Polymorphisms of the interleukin-1 gene family, oral microbial pathogens,and smoking in adult periodontitis[J]. J Dent Res, 2001,80(8):1695-1699.
　　
　　[收稿日期]2010-10-12[修回日期]2010-12-23
　　编辑/张惠娟