靶向位于线粒体circRNA,SCAR通过减少mROS输出缓解NASH

　靶向位于线粒体的 circRNA SCAR 通过减少 mROS 输出缓解 NASH 导读 在免疫代谢疾病中发挥核心作用的线粒体拥有自己的基因组。然而，由于缺乏特定的传递系统，线粒体定位的非编码 RNA 的功能在很大程度上是未知的。通过对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者的肝成纤维细胞中环状 RNA(circRNA)表达谱分析，研究发现，在 NASH 成纤维细胞中，下调的 circRNA 中大多数为线粒体 circRNA。通过构建靶向线粒体的纳米颗粒，研究观察到，位于线粒体中的脂肪肝相关circRNA ATP5B 调节因子(SCAR)抑制了线粒体 ROS (mROS)的输出和成纤维细胞的激活。circRNA SCAR由 PGC-1α介导，与 ATP5B 结合，通过阻断 CypD-mPTP 相互作用而关闭 mPTP。过多脂质通过内质网(ER)应激诱导的 CHOP 而抑制 PGC-1α。在人体内，靶向 circRNA SCAR 可以减轻高脂肪饮食引起的肝硬化和胰岛素抵抗。临床上，circRNA SCAR 与脂肪变性到 NASH 这一发展过程相关。总之，研究确定了一种线粒体 circRNA，它促进代谢性炎症并作为 NASH 的治疗靶点。

　 实验设计

　 结果

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　脂质暴露的成纤维细胞的促炎性表型需要 mROS

　 成纤维细胞介导多种疾病的纤维化。其中，NAFLD 影响了全球 25%的人口。为了研究 NAFLD患者成纤维细胞的线粒体代谢，本研究从 NASH 肝硬化和非 NAFLD 患者的肝组织中分离出成纤维细胞。利用海马细胞外通量分析仪，研究观察到与正常成纤维细胞相比，NASH 成纤维细胞中细胞外酸化速率(ECAR)和耗氧率(OCR)增加(图 1A)。然而，NASH 成纤维细胞中 ECAR/OCR 比值显著升高(图 1B)。同样，棕榈酸盐处理的正常成纤维细胞的 ECAR/OCR 比值也明显增加(图1C)，这概述了体外脂质暴露。另外，棕榈酸盐处理略微增加了成纤维细胞的凋亡(图 S1A)。总之，这些数据表明，在脂质负担下，成纤维细胞中 ATP 的产生从线粒体氧化磷酸化转变为糖酵解。

　电子传递链的质子泵产生的线粒体膜电位(ΔΨm)是产生 ATP 所必需的。因此，研究 JC-1荧光评估了ΔΨm，发现 NASH 成纤维细胞的ΔΨm 明显降低(图 1D 和 1E)。电镜显示ΔΨm 降低后伴有线粒体肿胀(图 1F)，提示线粒体应激。ROS 经常在线粒体应激中增加。因此，研究采用两种方法，包括荧光染料 Mito-SOX 和 DCFH-DA，评估了线粒体中 ROS(mROS)和细胞质ROS(cROS)，以及分别用室间特异性 ROS 传感器 mitoORP 和 cytoORP 进行转导。抑制ΔΨm 同时，NASH 成纤维细胞中 mROS 和 cROS 均显著增加(图 1G-1J)。同样，棕榈酸盐暴露显著增加了mROS 和 cROS 水平(图 S1B 和 S1C)。mROS 可通过线粒体通透性转换孔(mPTP)释放到细胞质中，这是 cROS 的重要来源。同样，mPTP 抑制剂(环孢素 A)显著降低了棕榈酸钠处理的 NASH 成纤维细胞和正常成纤维细胞的 cROS 水平(图 S1D 和 S1E)。这些数据表明，脂质暴露的成纤维细胞表现出线粒体应激，mROS 产生升高，并向细胞质中外泄。

　虽然 ROS 对多种免疫细胞的最佳活化是必需的，但 ROS 是否介导成纤维细胞激活仍不清楚。为了解决这个问题，研究用 ROS 抑制剂治疗原发性 NASH 成纤维细胞，观察到逆转了收缩性(图1K)、胶原合成和α-SMA 的表达(图 1L)。此外，抑制 ROS 抑制了炎症细胞因子的分泌(图 1M)。同样，抑制 ROS 消除了棕榈酸盐处理成纤维细胞的促纤维化和促炎症的功能(图 S1F 和 S1G)。总的来说，这些结果表明脂质积累增加了 mROS 的输出，从而促进成纤维细胞的活化。

　图 1 脂质暴露的成纤维细胞的促炎性表型一定需要 mROS。

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　脂质暴露诱发成纤维细胞中线粒体 s circRNomics 的不平衡

　 环状 RNA(circRNAs)是多种细胞类型的关键信号调节因子。然而，circRNA 在成纤维细胞中的作用尚不清楚。因此，研究比较了 4 例 NASH 肝硬化患者和 4 例非 NAFLD 患者分离的原代成纤维细胞的 circRNA 表达谱。15 个和 11 个 circRNA 在 NASH 成纤维细胞中分别持续上调和下调(图 2A 和 S2A-S2C)。引人注目的是，尽管核 circRNA 在整个 circRNomics 中占大多数(图S2D)，但很大一部分(11 个 circRNA 中有 4 个)下调的 circRNA 是由线粒体基因组编码的(图 2B)。其中，NASH 患者中 3 个线粒体 circRNA(mito-circRNAs)的抑制通过 qRT-PCR 在另一个由 18 例NASH 肝硬化患者和 20 例非 NAFLD 患者组成的队列中得到验证(图 2C)。分离实验表明，这些circRNA 主要定位于线粒体而不是细胞质中(图 2D)。扩增 PCR 和测序分析表明，这 3 个mito-circRNA 都是由线粒体基因组通过“反向拼接”机制生成的(图 S2E)。尽管hsa_circ_0089763 外显子之间保留有一个内含子，但成熟转录本均含有外显子序列。其中，hsa_circ_0089762 和 hsa_circ_0089763 由 mito-DNA 的轻链产生，hsa_circ_0008882 由重链产生(图 2E)。

　为了研究这些 mito-circRNA，研究构建了线粒体靶向纳米颗粒(mito-NP)。mito-NP 含有一种核内体 PH 响应聚合物，可以在核内体酸性微环境下被质子化，从而在细胞摄取后从核内体释放复合物。此外，它由包裹的 circRNA 表达载体和三苯膦(TPP)修饰的两亲性阳离子肽(TACP)组成，它们专门将包裹的载体传递到线粒体(图 2F)。采用动态光散射法测定 mito-NP的大小和 zeta 电位，通过标记封装在 mito-NP 中的载体检测 circRNA 表达载体的包封率(EE%)为 90.86%±3.24% (Table S1)。免疫荧光显微镜显示，当表达 GFP 的载体与 lipo3000 转染成纤维细胞时，只有 12.35%±2.35%的 GFP 信号与线粒体共定位(图 2G、2H 和 S2F)。相比之下，用 mito-NP 孵育成纤维细胞时，GFP 信号与线粒体共定位 90.84%±2.22%(图 2G、2H 和 S2F)，说明 mito-NP 靶向线粒体的特异能力。

　使用这个线粒体靶向的纳米颗粒，研究观察到过表达 hsa_circ_0089762(脂肪性肝炎相关的 circRNA ATP5B 调节因子[SCAR])而不是 hsa_circ_0008882 显著降低 NASH 成纤维细胞内的cROS(图 2I 和 S2G)。构建一个线粒体特异性表达载体是当前线粒体靶向技术的一个常见障碍。因此，研究不能构建 hsa_circ_0089763 mito-NP。总之，这些数据表明抑制 mito-circRNA 可能在 NASH 成纤维细胞的激活中发挥作用。

　图 2 脂质暴露诱发成纤维细胞中线粒体 circRNomics 的不平衡。

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　位于线粒体中

　circRNA

　R SCAR 抑制成纤维细胞的激活

　 接下来，研究进一步探讨了 circRNA SCAR 在成纤维细胞活化中的作用。使用特定探针检测 circBase 中 SCAR 的圆形转录本，而不是已知的线性转录本(图 3A)，RNA 荧光原位杂交(FISH)和免疫荧光共染色显示，90.38%±2.56%的内源性 circRNA SCAR 信号在线粒体内共定位(图 3B)。研究分别使用检测 SCAR 圆形和线性转录本的引物(图 3C)，进行了绝对 qRT-PCR。研究的数据显示，circRNA SCAR 为 966.37±114.68 拷贝/每个正常成纤维细胞，明显高于其线性版本

　(443.27±43.69) (图 3D 和 S3A)。NASH 成纤维细胞中圆形和线性的 SCAR 显著减少(图 3D)。在 NASH 成纤维细胞中，圆形 SCAR 和线性 SCAR 的比例进一步增加(图 S3B)。研究通过 RNase R酶切分析证实 circRNA SCAR 为 circRNA(图 3D)。

　circRNA SCAR 起源于其宿主基因(JA760602)的第二个外显子(图 2E)。研究将外显子 2 插入到 circRNA 过表达载体中(图 3C)，并将其封装在 mito-NP 中。circRNA SCAR 的 mito-NP 显著增加了 circRNA SCAR(图 3E)，但对未剪接的前体或线性转录本无明显影响(图 S3C)。抗 RNase R 的线粒体片段中的 circRNA SCAR 水平远高于细胞质片段中的(图 3E)。此外，Northern blot分析表明，circRNA SCAR 的 mito-NP 治疗显著增加抗 RNase R 的 circRNA SCAR。相反，其对RNase R 敏感的线性转录本保持不变(图 3)。此外，该载体 RNA 产物的测序结果与内源性 circRNA SCAR 完全吻合(图 S3D)。

　在功能上，线粒体特异性的 circRNA SCAR 过表达显著降低了 mROS 和 cROS 水平(图 S3E)，逆转了 NASH 成纤维细胞中ΔΨm 的抑制(图 3G)，研究发现对 ECAR/OCR 比率没有明显影响(图S3F)。这些数据表明，circRNA SCAR 在线粒体中抑制 ROS 的产生和ΔΨm 的降低。

　考虑到脂质负担导致 mROS 积累，研究想知道 circRNA SCAR 是否可以通过脂质治疗来调节。事实上，研究观察到棕榈酸盐显著降低了 circRNA SCAR 的表达(图 3H)。更重要的是，circRNA SCAR 的 mito-NP 的培养消除了 mROS 和 cROS 的升高(图 3I)和ΔΨm 的降低(图 3J)，表明脂质抑制的 circRNA SCAR 调节了线粒体中 ROS 的释放和ΔΨm。

　在棕榈酸盐处理的成纤维细胞中敲低 circRNA SCAR 进一步增加了 mROS，降低了ΔΨm (图S3G-S3I)，这与过表达实验结果相一致。然而，沉默 circRNA SCAR 对正常成纤维细胞无明显影响(图 S3G、S3J、S3K)，暗示单纯抑制 circRNA SCAR 对正常成纤维细胞 ROS 或ΔΨm 无显著影响。

　接下来，研究者研究了 circRNA SCAR 是否也调节成纤维细胞的促纤维化功能。circRNA SCAR过表达显著降低了 NASH 成纤维细胞中胶原和α-SMA 的表达(图 3K)、胶原收缩(图 3L)和细胞因子分泌(图 3M)。同样，circRNA SCAR 过表达也抑制棕榈酸盐处理成纤维细胞的活化(图 S3L和 S3M)。此外，在棕榈酸盐处理的成纤维细胞中沉默 circRNA SCAR 进一步增强了其纤维化前的表型(图 S3N 和 S3O)。总之，这些数据表明，脂质负荷抑制 mito-circRNA SCAR，从而抑制ROS 的升高和成纤维细胞的激活。

　图 3 circRNA SCAR 位于线粒体中，抑制成纤维细胞激活。

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　R circRNA SCAR 直接与 B ATP5B 结合

　接下来，研究者研究了 circRNA SCAR 形成的机制。虽然 circRNA SCAR 预测了一个潜在的开放阅读框(ORF)，但研究在其终止密码子上游插入了一个 33 FLAG-coding 序列，在潜在的ORF 序列中未检测到标记蛋白(图 S4A)，表明 circRNA SCAR 可能是非编码 RNA。此外，研究确定了 circRNA SCAR 中几种 microRNA 的假定结合位点(图 S4B)。然而，这些 microRNA 都没有超过两个结合位点的，也没有被线粒体基因组转录，这表明 circRNA SCAR 并不是 microRNA 的基底。此外，研究没有观察到过表达 circRNA SCAR 导致其宿主基因(JA760602)发生明显变化(图S3C)，排除了调控 JA760602 转录本的机制。

　RNA 结合蛋白在 circRNA 功能中起关键作用。使用 RNA 下拉实验和质谱分析，研究鉴定了8 个被 circRNA SCAR 特异性生物素化探针下拉的蛋白(图 S4C)。其中检测到作为 ATP5A 和 ATP5B调控因子的 mPTP 脱颖而出(图 4A)，western blotting 进一步验证了这一点(图 4B)。反之，RNA 免疫沉淀(RIP)显示 circRNA SCAR 由 ATP5A 或 ATP5B 特异性沉淀(图 4C)。由于 ATP5A 与ATP5B 结合，那 circRNA SCAR 是否直接与 ATP5A 或/和 ATP5B 结合。为了解决这个问题，研究采用体外 RNA/蛋白相互作用试验，发现 circRNA SCAR 直接拉下了重组 ATP5B，而不是 ATP5A。此外，circRNA SCAR 只能在 ATP5B 存在的情况下检索 ATP5A(图 4D)。同样，敲低内源性 ATP5B基因使得 circRNA SCAR 与 ATP5A 的结合失效(图 4E)，而沉默 ATP5A 基因对 circRNA SCAR-ATP5B的相互作用没有明显的影响(图 S4D)。

　ATP5B 固定在线粒体内膜的基质上。研究对外膜剥离的线粒体和有丝分裂体进行了纯化，观察到它们的 circRNA SCAR 水平具有可比性(图 S4E 和 S4F)，表明 circRNA SCAR 并不主要位于外膜或膜间空间。为了研究 ATP5B、circRNA SCAR 和 mito-NP 是否在同一个空间中，研究采用了一种工程抗坏血酸过氧化物酶(APEX)标记方法来识别活细胞中 RNA 或蛋白质的特定线粒体区域。研究将以 APEX 为靶点的正常成纤维细胞转染到不同的区域，并使用链霉亲和素磁珠收获不同的部分。ATP5B 和 circRNA SCAR 主要存在于基质和面向基质的内膜(基质-APEX)中，而不存在于膜间空间(IMS-APEX)或外膜(OMM-APEX)中(图 4F-4H)。此外，研究将含有 GFP 表达载体的 mito-NP 应用于分别转染 3 种不同的 APEX 表达质粒的成纤维细胞。在基质-APEX 沉淀的部分中主要检测到 GFP(图 S4G)。总之，这些数据表明 ATP5B、circRNA SCAR 和 mito-NP 在同一亚线粒体中。

　本研究和其他人已经证明，非编码 RNA 通常通过茎环结构与蛋白质相互作用。因此，研究构建了一系列 SCAR 截断片段，发现 nt 100-182 的 SCAR (SCAR100-182)，形成双链茎结构(图S4H)，与 ATP5B 相互作用(图 4I)。此外，在 circRNA SCAR 表达的 NASH 成纤维细胞中，破坏配对区域的核苷酸突变消除了 ATP5B RIP 试验中增强的 SCAR 富集(图 4J)和 ROS 抑制(图 4K 和S4I)。

　虽然缺乏关于 ATP5B-RNA 结合的报道，但研究在一个已发表的质谱数据库中确定了 ATP5B结构域(ILQDYK)是一个潜在的 RNA 结合区域。这 6 个氨基酸的突变，而不是相邻部分的突变，使得 ATP5B 不能与 circRNA SCAR 结合(图 4L)。综上所述，这些数据表明 circRNA SCAR 中的100-182 motif 与 ATP5B 中的区域 ILQDYK 结合。

　图 4 circRNA SCAR 直接与 ATP5B 结合。

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　ci rcRNA

　R SCAR 通过阻断 CypD- -P mPTP 相互作用来关闭 mPTP

　 mPTP 的开放降低了ΔΨm，增加了 mROS 的生成和释放。circRNA SCAR 抑制 ROS 输出和ΔΨm 的降低，可以直接结合 ATP5B，ATP5B 是 mPTP 调节器。为了评估 circRNA SCAR 是否阻碍

　mPTP 开放，研究采用 calcein 释放试验，发现棕榈酸盐导致 calcein 荧光明显下降，提示 mPTP开放。更重要的是，circRNA SCAR 过表达逆转了棕榈酸盐诱导的 mPTP 开放(图 5A)。研究始终在 NASH 成纤维细胞中观察到类似的结果(图 S5A)。探讨 circRNA SCAR 对 mPTP 开放的影响是否依赖于其与 ATP5B 的结合，研究应用了含 circRNA SCAR 突变体的 mito-NP，其与 ATP5B 的结合被消除(图 5B)。circRNA SCAR 在 calcein 荧光上的过表达完全缺失(图 5A 和 S5A)，提示与 ATP5B 结合对于 circRNA SCAR 关闭 mPTP 是不可或缺的。

　CypD 是 mPTP 打开的主要促进因子，与 ATP 合成酶结合，ATP5B 位于 ATP 合成酶中。因此，circRNA SCAR 是否会破坏 CypD-mPTP 的相互作用。免疫沉淀实验显示棕榈酸盐显著增强了 CypD与 mPTP 的结合，而这一作用被野生型 circRNA SCAR 的过表达而明显抑制(图 5C)。沉默 CypD(图S5B)挽救了 circRNA SCAR 对棕榈酸盐处理过表达突变成纤维细胞 mPTP 开放的抑制作用(图5D)。同样，研究观察到对ΔΨm 抑制(图 5D)、ROS 生成(图 5E)、胶原蛋白收缩(图 5E)和细胞因子产生(图 5G)也有类似的效果。综上所述，这些数据表明 circRNA SCAR 直接结合 ATP5B，干扰 CypD-mPTP 交互，阻止 mPTP 打开，减少 mROS 输出。

　图 5 circRNA SCAR 通过阻断 CypD-mPTP 相互作用来关闭 mPTP。

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　脂质诱导的内质网应激通过 P CHOP 抑制 PGC- -1 1 α介导 R circRNA SCAR 表达

　SCAR 宿主基因所在的线粒体光链被转录为一个大的多顺反子前体转录本，然后被加工成功能单位。核编码剪接体的组成部分，包括 eIF4A3 和 7 个核内不均一核糖核蛋白(hnRNP)，调节线粒体 RNA 的生物发生。确定其中是否有 circRNA SCAR 参与生物发生过程，研究用相应的小干扰 RNA (siRNA)转染正常成纤维细胞。沉默 hnRNPM，而不是其他(图 S6A)，会增加 circRNA SCAR水平和圆形/线形 SCAR 之间的比率(图 6A)。事实上，CLIP-seq 数据显示，SCAR 无拼接前体的外显子和侧翼内含子含有 hnRNPM 的结合位点(图 6B)，RIP 和 qRT-PCR 实验得到了验证(图 6C)。此外，RNase L 可以介导核 circRNA 的降解。有趣的是，虽然 RNase L 在线粒体中的分布远小于在细胞质中的分布(图 6D)，沉默 RNase L 增加了 poly(I:C)处理成纤维细胞的 circRNA SCAR水平(图 6E 和 S6B)。总的来说，这些结果表明 mito-circRNAs 不是随机的转录错误，而是在其形成和降解过程中受到调控。

　脂质对 circRNA SCAR 的下调促使研究探索其表达机制。生物信息学分析确定了一个假定的 PGC-1α位点，位于 25 ~18bp 的光链启动子，负责线粒体基因组中的 circRNA SCAR 转录(图6F)。ChIP 实验显示抗 PGC-1α抗体沉淀了此基序(图 6G)。与 circRNA SCAR 表达一致的是，棕榈酸盐显著减少 PGC-1α(图 6H)及其与线粒体中假定基序的结合(图 6G)。此外，沉默 PGC-1α显著降低 circRNA SCAR 表达(图 6I 和 S6C)，表明 PGC-1α调控 circRNA SCAR 转录。

　脂质超载导致内质网应激。事实上，研究发现棕榈酸盐处理的成纤维细胞(图 6J)和原发性NASH 成纤维细胞(图 6K)中内质网应激标志物上调。内质网应激的中介物 CHOP 可以抑制 PGC-1α。为了研究 CHOP 是否抑制成纤维细胞中的 PGC-1α，研究沉默了 CHOP，观察到棕榈酸盐处理的成纤维细胞中 PGC-1α的表达恢复到了与未处理成纤维细胞相当的水平(图 6L)。PGC-1α表达同时敲低 CHOP 也减轻了棕榈酸盐诱导的 circRNA SCAR 抑制(图 6M)。同样，研究在 NASH成纤维细胞中观察到类似的效果(图 S6D 和 S6E)。总的来说，这些结果表明脂质诱导的内质网应激拮抗剂 PGC-1α依赖于 CHOP 的 circRNA SCAR 表达。

　 图 6 脂质诱导的内质网应激通过 CHOP 抑制 PGC-1α介导 circRNA SCAR 表达。

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　circRNA

　R SCAR 减轻高脂饮食诱导的小鼠肝硬化

　虽然研究没有鉴定出 circRNA SCAR 的小鼠同源物，ATP5B 的蛋白序列在人和小鼠中高度保守(96.22%)。使用人类非编码 RNA 与小鼠蛋白相互作用的治疗策略已经被证明。的确，人类circRNA SCAR 可以与小鼠 ATP5B 结合(图 S7A)。circRNA SCAR 过表达抑制小鼠成纤维细胞中mPTP 开放(图 S7B)、cROS 释放(图 S7C)和胶原收缩(图 S7D)。

　为了评估 mito-NP 是否能在体内有效地导入肝成纤维细胞的线粒体，研究用 Cy5 荧光标记了 circRNA 表达载体。空载体或经 mito-NP 包封载体经尾静脉注射至小鼠体内。与空载体相比，mito-NP 在主要器官中表现出更高的荧光信号。其中，肝脏 mito-NP 积累最高(图 7A 和图 S7E)。为了调查细胞中 mito-NP 摄取的百分比，研究从肝脏中分离成纤维细胞。注入空载体和 mito-NP后，成纤维细胞 Cy5+的比例分别为 20.32%±3.67%和 74.12%±7.05%(图 7B 和 S7F)。为了量化

　线粒体中 mito-NP 的积累，研究对细胞器进行了分离，观察到线粒体中 mito-NP 的富集量是细胞质的 10 倍以上(图 7C 和 S7G)。

　为了研究体内 circRNA SCAR 的治疗潜力，研究将含有 mito-NP 的 circRNA SCAR 过表达载体或空载体尾静脉注入小鼠，且每 3 天喂食高脂肪食物。研究没有观察到 mito-NP 对小鼠的明显毒性(表 S2)。FISH 和免疫荧光染色显示，在表达 circRNA SCAR 的 mito-NP 小鼠中，有 86.07%±7.17%的 circRNA SCAR 信号与线粒体共定位(图 7D 和 S7H)。分离成纤维细胞的细胞器分级检测显示，线粒体片段中的 circRNA SCAR 比细胞质中多 14.92±1.79 倍(图 7E)。研究没有通过体内过表达 circRNA SCAR 检测到其线性表达(图 7E)。

　肝成纤维细胞线粒体中 circRNA SCAR 水平的升高伴随着 ROS 水平的抑制(图 S7I)和细胞因子表达(图 S7J)。更重要的是，在高脂喂养的小鼠中，表达 circRNA SCAR 的 mito-NP 的治疗显著提高了葡萄糖耐受性(图 S7K)和胰岛素耐受性(图 S7F)，阻止体重增加(图 S7L)，减少肝纤维化和巨噬细胞浸润(图 7G)。

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　circRNA

　R SCAR 与患者的脂肪变性发展为 H NASH 相关

　为了探讨 circRNA SCAR 的临床意义，研究用 FISH 评估了其在有无 NAFLD 的患者肝脏组织中的表达。circRNA SCAR 位于线粒体中，主要在成纤维细胞中检测到(图 7H)。更重要的是，与非 NAFLD 患者相比，NAFLD 患者的 circRNA SCAR 表达明显降低，并由单纯脂肪变性持续变为 NASH 肝硬化(图 7I 和 S7M)。此外，NAFLD 患者肝脏标本中，成纤维细胞 circRNA SCAR 表达与 cROS 水平和纤维化程度呈负相关(图 7I 和 7J)。此外，稳态模型评估-胰岛素抵抗(HOMA-IR)与 circRNA SCAR+肝成纤维细胞百分比呈负相关(图 S7N)。总的来说，这些结果表明，肝成纤维细胞中 circRNA SCAR 下调与患者脂肪变性转化为 NASH 进展以及胰岛素抵抗密切相关。

　图 7 circRNA SCAR 与患者的脂肪变性发展为 NASH 相关，具有治疗潜力。

　 结论

　 综上所述，该研究揭示了线粒体定位的 circRNA 在代谢性炎症中发挥重要功能，并且率先构建靶向线粒体 circRNA 的纳米递送系统，实现在体内外干预线粒体定位 circRNA，为靶向线

　粒体信号治疗代谢性免疫疾病提供新思路。通过干扰 mito-circRNAs 靶向一个被破坏的细胞器代谢轴为免疫代谢疾病提供了一个重要的治疗策略。