传染性单核细胞增多症患儿血清Toll样受体2、Toll样受体9与外周血T淋巴细胞亚群变化及临床意义

马永梅，樊 荣

(宝鸡市妇幼保健院儿科，陕西 宝鸡 721000)

传染性单核细胞增多症(Infectious mononucleosis，IM)是由EB病毒(Epstein-barr virus，EBV)感染引起的急性病，好发于儿童，以发热、淋巴结及肝脾肿大等为主要表现，部分患儿可并发心肌炎、肝功能异常等严重并发症，危及生命健康[1-2]。EBV感染可引起机体免疫功能调节紊乱，激发T淋巴细胞增殖及免疫应答，因此随着IM病情进展及转归，T淋巴细胞亚群也呈相应变化[3]。Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)作为模式识别受体，可识别病原体，在天然免疫中发挥重要作用。其中，TLR2和TLR9在多种免疫细胞上均有表达，在机体抗病毒免疫中占据重要地位[4]。基于此，本研究回顾性分析我院106例IM患儿临床资料，以评估血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴细胞亚群在IM诊疗中的应用价值。

1.1 研究对象 回顾性分析2015年2月至2020年5月宝鸡市妇幼保健院106例IM患儿临床资料，其中男性61例，女性45例；
年龄3～14岁，平均(7.23±1.39)岁。病例纳入标准：符合《诸福棠实用儿科学》第8版[5]中IM诊断标准；
年龄3～14岁。排除标准：合并慢性心功能不全、支气管哮喘等慢性疾病；
伴支原体感染、腺病毒感染等其他病原体感染；
伴艾滋病、甲状腺功能亢进、糖尿病等免疫性疾病或致免疫功能低下的疾病；
合并白血病、淋巴瘤等良性或恶性肿瘤。本研究病例资料收集均获得患儿监护人知情同意，且经宝鸡市妇幼保健院医学伦理委员会审批。

1.2 研究方法 106例IM患儿入院后给予更昔洛韦注射液(批号：H20051041)静脉滴注，每次5 mg/kg，每次滴注时间>1 h，2次/d，连续治疗7 d。再给重组人干扰素α1b注射液(批号：S20040039)雾化吸入治疗，每次2～4 μg/kg+0.9%氯化钠溶液2 ml，采用氧气驱动雾化，每次持续15 min，2次/d，连续治疗5 d。收集治疗前及治疗7 d时外周血，采用荧光定量聚合酶链式反应检测EBV脱氧核糖核酸(EBV-DNA)，检测试剂均购自中山大学达安基因股份有限公司(试剂盒批号：140936、160539、180934)，以EBV-DNA<500 copies/L定义为阴性。使用流式细胞仪(型号：FACSCalibur，美国BD公司)检测外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+表达水平(试剂盒批号：141119、161033、181127，均购自美国BD公司)，并计算CD4+/CD8+。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血清TLR2、TLR9水平，试剂盒(批号：141108、160931、181044)均购自上海生工生物工程股份有限公司。收集急性期(发病后3～7 d)和恢复期(发病后45～60 d，淋巴结、脾明显缩小，临床症状消失)患者空腹外周静脉血，检测血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴细胞亚群表达水平，检测方法同上。

1.3 观察指标 比较IM患儿急性期与恢复期血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴细胞亚群表达水平；
治疗7 d时，根据EBV-DNA是否转阴将IM患儿分为转阴组和未转阴组，比较两组一般资料，以及治疗7 d时血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴细胞亚群表达水平；
分析治疗7 d时EBV-DNA载量与血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴细胞亚群表达水平的关系。

2.1 IM患儿急性期与恢复期血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴细胞亚群表达水平比较 见表1。IM患儿急性期血清TLR2、TLR9表达水平高于恢复期，外周血CD3+、CD8+表达水平高于恢复期，外周血CD4+及CD4+/CD8+表达水平则低于恢复期(均P<0.05)。

表1 IM患儿急性期与恢复期血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴细胞亚群表达水平比较

2.2 两组患儿一般资料比较 见表2。治疗7 d时，106例IM患儿EBV-DNA转阴82例(77.36%)，纳入转阴组；
未转阴24例(22.64%)，纳入未转阴组。两组患儿性别、入院前病程及治疗前白细胞计数比较差异无统计学意义(均P>0.05)。未转阴组年龄低于转阴组，治疗前EBV-DNA载量高于转阴组(均P<0.05)。

表2 两组患儿一般资料比较

2.3 两组患儿治疗7 d时血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴细胞亚群表达水平比较 见表3。治疗7 d时，未转阴组血清TLR2、TLR9表达水平高于转阴组，外周血CD3+、CD8+表达水平高于转阴组，外周血CD4+及CD4+/CD8+低于转阴组(均P<0.05)。

表3 两组患儿治疗7 d时血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴细胞亚群表达水平比较

2.4 治疗7 d时EBV-DNA载量与血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴细胞亚群表达水平的关系 经Pearson相关性分析，发现EBV-DNA载量与血清TLR2、TLR9及外周血CD3+、CD8+表达水平呈正相关(r=0.381、0.362、0.319、0.347，均P<0.05)，与外周血CD4+及CD4+/CD8+呈负相关(r=-0.360、-0.395，均P<0.05)。

研究[6-7]发现，TLR2是机体EBV感染免疫反应中最直接的模式识别受体，可直接将病原体交予抗原呈递细胞，激活机体免疫反应。Noor等[8]也发现，B淋巴细胞是原发EBV感染最初靶细胞，而TLR9主要表达于B淋巴细胞表面，EBV感染可激活淋巴细胞上TLR9，产生抗病毒细胞因子。本研究中，IM患儿急性期血清TLR2、TLR9水平均高于恢复期，提示随着IM病情转归，患儿血清TLR2、TLR9水平显著降低。推测该结果由以下原因引起：在IM急性期，EBV入侵引起TLR2、TLR9表达上调，使机体识别抗原体，激活免疫反应，随着治疗后EBV的清除，TLR2及TLR9配体对TLR2、TLR9刺激减弱，使TLR2、TLR9表达下调[9-10]。不仅如此，治疗7 d时，未转阴组血清TLR2、TLR9水平高于转阴组，且EBV-DNA载量与血清TLR2、TLR9水平呈正相关。考虑该结果与治疗后EBV-DNA载量较高者EBV未得到有效清除，TLR2、TLR9仍然受病原体刺激而呈高表达有关[11]。因此，临床也可通过监测血清TLR2、TLR9水平判断EBV感染进程，评估IM患儿病情转归情况。

另外，本研究也对T淋巴细胞亚群的变化展开分析，发现IM患儿急性期外周血CD3+、CD8+表达水平均高于恢复期，CD4+及CD4+/CD8+则低于恢复期。其中，CD8+作为细胞毒T细胞及抑制T细胞的表面标志，在EBV感染后可大量增殖，发挥细胞毒作用，消灭感染的B细胞[12]；
CD3+、CD4+则是辅助T细胞及效应T细胞表面标志，均能刺激免疫细胞的增殖、分化，以清除EBV[13]；
CD8+的大量增殖可抑制CD4+的增殖、分化，而CD4+/CD8+能直接反映机体免疫功能的高低[14]。上述结果也说明，T淋巴细胞介导的免疫应答参与了EBV感染的发展及转归。在IM急性期，EBV的感染刺激T淋巴细胞强烈反应，引起CD3+、CD8+表达上调，CD4+/CD8+比值降低；
而在恢复期，EBV被清除，免疫紊乱缓解，使CD3+、CD8+表达下降，CD4+/CD8+动态平衡改善[3，15]。另外，治疗7 d时，未转阴组外周血CD3+、CD8+表达水平高于转阴组，外周血CD4+及CD4+/CD8+低于转阴组，EBV-DNA载量与外周血CD3+、CD8+表达水平呈正相关，与外周血CD4+及CD4+/CD8+呈负相关，这也说明EBV感染转归情况与T淋巴细胞功能具有相关性，EBV清除后机体免疫功能也显著改善[16]。故监测T淋巴细胞亚群变化情况对评估IM患儿病情变化有利[17]。

本研究还发现，未转阴组年龄低于转阴组，治疗前EBV-DNA载量高于转阴组，提示IM抗病毒疗效可能与患儿年龄及治疗前EBV感染状况有关[18]。其原因可能为：年龄较小患儿免疫系统发育尚未完善，自身抗病毒能力弱，导致病情转归延迟[19]；
治疗前EBV-DNA载量较高提示急性期病毒复制水平较高，病情更为严重，造成治疗难度增加[20]。

综上所述，IM患儿在EBV感染后，TLR2、TLR9表达上调，T淋巴细胞功能紊乱，在EBV清除、病情转归后，TLR2、TLR9表达下调，T淋巴细胞功能恢复，因此监测血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴细胞亚群表达水平有利于IM患儿病情进展及转归的判断。