血清微环境对小鼠T细胞衰老的调节作用 小鼠脾脏中t细胞比例

　　[摘要]目的：探讨血清微环境对小鼠T细胞衰老的调节作用。方法：分别取年老（12～14月龄）及年轻（1.5～2月龄）小鼠各10只，提取其脾脏淋巴细胞及血清，实验分4组。组I为年老鼠T淋巴细胞+10%年轻鼠血清；组II为年老鼠T淋巴细胞+10%年老鼠血清；组III为年轻鼠T淋巴细胞+10%年轻鼠血清；组IV为年轻鼠T淋巴细胞+10%年老鼠血清。培养48h后，经流式细胞术研究CD8+CD28+共表达率差异。结果：组I和组II T细胞表面的CD8+CD28+共表达率分别是（10.84±0.6841）%和（3.18±0.1789）%，组III和组IV T细胞表面的CD8+CD28+共表达分别是（12.5±0.9445）%和（8.36±0.2074）%。各组间对比有统计学差异（P 　　1.3 方法
　　1.3.1 血清的制备：血清购自于北京中国军事医学科学院，无菌操作下，分别自月龄1.5～2月及月龄12～14月C57BL/6N雌性小鼠心脏内取血，自然沉淀4℃过夜，离心1000rpm/min，5min，提取上清液备用。
　　1.3.2 小鼠淋巴细胞悬浮液制备：以10%水合氯醛0.02ml腹腔注射，麻醉小鼠，75%酒精浸泡10min,无菌操作下剪开左下腹部皮肤进入腹腔，取出脾脏，PBS冲洗两遍，放到200目细胞筛上用10ml玻璃注射器内芯进行研磨，研磨后用RPMI1640培养基冲洗两遍，放入5ml小鼠淋巴细胞分离液中，2 500rpm、20min慢加速慢减速离心，吸取第二层白色浑浊层，均加入含有15%胎牛血清的RPMI1640培养基10ml，细胞计数后备用。
　　1.3.3 分组和处理：① 年老鼠T淋巴细胞组：组I：年老鼠T淋巴细胞+10%年轻鼠血清溶液；②年老鼠T淋巴细胞组：组II：年老鼠T淋巴细胞+10%年老鼠血清溶液；③年轻鼠T淋巴细胞组：组III：年轻鼠T淋巴细胞+10%年轻鼠血清溶液；④ 年轻鼠T淋巴细胞组：组IV：年轻鼠T淋巴细胞+10%年老鼠血清溶液。
　　1.3.4 检测：以上各组在37℃、5% CO2细胞培养孵箱里培养48h后，吸出淋巴细胞，离心后加入100μl细胞染色缓冲液，并加入PE-anti-mouse CD8a和FITC-anti-mouse CD28，4℃孵育60min，细胞染色缓冲液冲洗两遍，用流式细胞仪检测。
　　1.3.5统计学方法：采用SPSS 13.0统计软件，所有数据用（x±s）表示，组间比较采用独立样本t检验。P