结直肠癌组织Twist、Vimentin蛋白表达情况及与奥沙利铂为主的术后辅助化疗耐药的关系

吴清珍

河南省南阳市第一人民医院 473000

结直肠癌是恶性细胞能够从原发肿瘤散播并转移到远处器官，严重威胁患者身体健康，临床以便血、腹胀腹痛、疲劳乏力等为主要表现[1]。结直肠癌患者机体对化疗药物的敏感性、肿瘤对药物的抵抗及肿瘤对化疗药物产生多药耐药等因素均可影响效果[2]。扭曲基因(Twist)蛋白是调控肿瘤细胞上皮—间质转化的转录因子，而肿瘤细胞在上皮—间质转化过程中可以获得耐药性[3]。波形蛋白(Vimentin)是一种普遍存在的中间丝蛋白，是间充质细胞标志物，可影响上皮—间质转化进程，进而影响肿瘤细胞的耐药性[4]。鉴于此，本文回顾性分析医院收治的88例根治性切除术后并实施以奥沙利铂为主辅助化疗的结直肠癌患者临床资料，报道如下。

1.1 临床资料 回顾性分析2019年4月—2020年9月医院收治的88例根治性切除术后并实施以奥沙利铂为主辅助化疗的结直肠癌患者临床资料。其中男48例，女40例，年龄36～79岁，平均年龄(57.39±8.17)岁，高分化19例，中分化59例，低分化10例，结直癌分期Ⅲ期57例，Ⅳ期31例。腺癌58例，黏液腺癌25例，其他5例，取癌组织和远癌组织。

1.2 选择标准 (1)纳入标准：①所有研究对象均符合结直肠癌诊断标准[5]，且均经病理检查确诊；
②术前未接受放化疗、免疫治疗，且手术切除标本均有石蜡存档者；
③符合以奥沙利铂为主的术后辅助化疗方案指征；
④临床资料完整。(2)排除标准：①合并其他肿瘤患者；
②合并急慢性肠炎、炎症性肠病等消化系统疾病患者；
③合并急性泌尿感染、结核菌感染等感染性疾病患者。

1.3 方法 采集手术切除术留取的癌组织和远癌组织，所有标本经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，4μm厚切片，0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液抗原修复，免疫组织化学染色后光镜观察。由2位医师采用双盲法观察切片，在高倍镜下随机选取5个视野，按照染色强度及阳性细胞占比综合计分，其中染色轻度分为：无色(0分)、淡黄色(1分)、棕黄色(2分)、黄褐色(3分)，阳性细胞数占比分为：≤10%(0分)、11%～25%(1分)、26%～50%(2分)、51%～100%(3分)，2类分值乘积为总分，0～3分为阴性，4分弱阳性，6分为中等阳性，9分为强阳性，将弱阳性、中等阳性、强阳性表达均记为阳性表达。

化疗敏感及耐药性判断参照实体瘤疗效评价标准[6]，所有目标和(或)残留病灶消失且维持4周，记为完全缓解；
基线目标和(或)残留病灶长径总和缩小30%且维持4周，记为部分缓解；
基线目标和(或)残留病灶长径总和有缩小但未达到部分缓解标准，记为稳定；
基线目标和(或)残留病灶长径总和增加≥20%，记为进展；
将完全缓解和部分缓解记为化疗敏感，将稳定和进展记为化疗耐药。

1.4 观察指标 (1)对比癌组织和远癌组织Twist、Vimentin蛋白阳性表达率；
(2)统计所有患者化疗效果；
(3)对比化疗敏感和耐药患者癌组织Twist、Vimentin蛋白阳性表达率；
(4)对比化疗耐药患者与化疗敏感患者的自变量构成比，分析影响其化疗耐药的影响因素。

1.5 统计学方法 应用SPSS22.0软件分析所得数据。以[n(%)]描述计数资料，行χ2检验，若理论频数为1～5则需校正，等级分布资料以秩和检验，以Logistic回归分析探讨影响结直肠癌患者术后辅助化疗耐药的影响因素，P<0.05时差异有统计学意义。

2.1 癌组织和远癌组织Twist、Vimentin蛋白阳性表达率比较 癌组织Twist、Vimentin蛋白阳性表达率均高于远癌组织(P<0.05)，见表1。

表1 癌组织和远癌组织Twist、Vimentin蛋白阳性表达率比较[n(%)]

2.2 所有患者化疗效果 88例患者化疗后有54例化疗敏感，占61.36%；
有34例化疗耐药，占38.64%。

2.3 化疗敏感和耐药患者癌组织Twist、Vimentin蛋白阳性表达率比较 化疗耐药患者癌组织Twist、Vimentin蛋白阳性表达率均高于化疗敏感患者(P<0.05)，见表2。

表2 化疗敏感和耐药患者癌组织Twist、Vimentin蛋白阳性表达率比较[n(%)]

2.4 对比化疗耐药患者与化疗敏感患者的自变量构成比，分析影响其化疗耐药的影响因素 化疗耐药患者记为耐药组，化疗敏感患者记为敏感组，归纳可能影响化疗耐药的因素，对其进行赋值，自变量赋值结果见表3；
将化疗敏感/耐药作为因变量(Y)，化疗耐药为1，化疗敏感为0，分析影响因素。化疗耐药患者Vimentin蛋白阳性表达、Twist蛋白阳性表达、淋巴结转移、肿瘤低分化、TNM分期Ⅳ期构成比均高于化疗敏感患者(P<0.05)，见表4。

表3 癌组织患者化疗耐药的自变量赋值结果

表4 耐药组和敏感组自变量构成比对比[n(%)]

将单因素分析结果中P<0.01的因素纳入Logistic回归分析模型，结果发现Vimentin蛋白阳性表达、Twist蛋白阳性表达、淋巴结转移、肿瘤低分化、TNM分期Ⅳ期均是影响以奥沙利铂为主的术后辅助耐药的独立危险因素(P<0.05)，见表5。

表5 Logistic回归分析

术后辅助化疗耐药是当前结直肠癌治疗中的主要难题，从分子角度探讨结直肠癌细胞的耐药机制具有重要意义。本文结果显示，癌组织Twist、Vimentin蛋白阳性表达率均高于远癌组织，提示结直肠癌组织Twist、Vimentin蛋白阳性表达率升高。Twist参与肿瘤细胞周期的调控，并通过调解肿瘤细胞上皮—间质转化等参与恶性肿瘤的发生，促进肿瘤侵袭转移。结直肠癌组织Twist蛋白阳性表达率升高可能与肿瘤微环境中免疫细胞、肿瘤细胞间释放肿瘤坏死因子和转化生长因子β等细胞因子增多有关[7]。Vimentin通过整合来自环境的机械输入信号并调节微管和肌动球蛋白网络的动力学促进细胞的迁移，促进癌细胞局部侵袭及淋巴结转移，肿瘤发生时负性调控Vimentin表达的微小RNA-145表达下调，Vimentin的mRNA稳定性增加，导致Vimentin蛋白阳性表达率升高[8]。

本文结果显示，癌组织患者化疗后化疗敏感者占61.36%，化疗耐药者占38.64%，且癌组织化疗耐药患者癌组织Twist、Vimentin蛋白阳性表达率均高于化疗敏感患者，提示以奥沙利铂术后辅助化疗为主的产生耐药性患者结直肠癌组织Twist、Vimentin蛋白阳性表达率高于化疗敏感患者。有研究发现[9]，减弱E钙黏蛋白表达可以获得间叶细胞表型，促进Vimentin蛋白阳性表达，使肿瘤细胞出现典型的上皮—间质转化表型特征。本文与上述报道相符。

本文中Vimentin蛋白阳性表达、Twist蛋白阳性表达、淋巴结转移、肿瘤低分化、TNM分期Ⅳ期均是影响以奥沙利铂化疗为主术后辅助化疗耐药的独立危险因素。癌组织Twist、 Vimentin蛋白阳性表达诱导肿瘤细胞上皮—间质转化的发生，使肿瘤细胞获得间质细胞特征，表现为抗凋亡能力增强，突破细胞外基质获得浸润转移能力，对化疗药物产生耐药性。研究报道[10]，淋巴结转移、肿瘤低分化和TNM分期Ⅳ期患者结直肠癌组织中Twist、Vimentin蛋白阳性表达率均升高，能够阻碍化疗药物对肿瘤细胞的损伤作用，减少细胞凋亡，导致肿瘤细胞对化疗药物不敏感。

综上所述，Twist、Vimentin蛋白在结直肠癌组织中阳性表达率均升高，Vimentin蛋白阳性表达、Twist蛋白阳性表达与奥沙利铂为主的术后辅助化疗耐药有关，且淋巴结转移、肿瘤低分化、TNM分期Ⅳ期均可增加结直肠癌患者以奥沙利铂为主术后辅助化疗耐药的风险。建议在临床实践中积极控制上述因素，同时将癌组织Twist、Vimentin蛋白作为以奥沙利铂为主术后辅助化疗耐药的预测分子标志物。