[As2O3对肺腺癌耐药细胞株A549/R耐药性的作用观察]控制细菌耐药性的质粒是R质粒

　　【中图分类号】R734 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)09－0023－01 　　【摘要】：目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对肺腺癌耐药细胞株A549／R耐药性的影响作用。方法 采用肺腺癌耐药细胞株A549／R，运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及荧光分光光度计检测As2O3对肺腺癌耐药细胞株A549／R的细胞毒性作用，用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测多药耐药性相关蛋白(MRP)mRNA表达水平及变化。结果 As2O3可显著下调MRP的表达，且对A549／R有一定的抑制作用，其抑制率呈时间-剂量依赖关系。结论 As2O3可通过下调MRP的表达而部分逆转A549／R细胞的耐药性。�
　　【关键词】As2O3；肺腺癌；耐药；RT-PCR
　　 化疗在治疗晚期肺癌患者中发挥着重要的作用，但耐药是化疗失败的主要原因之一。近来有研究表明三氧化二砷(As2O3)对肿瘤细胞的耐药性有一定的改善作用［1］。本文旨在研究As2O3对肺腺癌耐药细胞株A549／R耐药性的影响。�
　　1 材料与方法�
　　1.1 材料:As2O3由哈尔滨伊达药业有限公司生产；ADM购于意大利法玛西亚普强公司)；人肺腺癌细胞株A549／S由哈尔滨医科大学遗传教研室提供；四甲基偶氮唑蓝(MTT)购于Sigma公司；人肺腺癌耐药细胞株A549／R(对阿霉素、长春新碱和丝裂霉素等多种抗癌药耐药)由中国第三军医大学提供；RT-PCR试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司，按试剂盒说明书流程操作。MRP引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。�
　　1.2 方法�
　　1.2.1 细胞生长抑制作用检测:实验前2周将A549／R细胞置于无ADM的培养液中培养，将生长活力良好的A549细胞以每孔1×105的数目加入96孔板，实验组由高至低浓度加入As2O3溶液〔1.0 μmol／L(A组)，3.0μmol／L(B组)，6.0μmol／L (C组)〕，对照组则加入等体积1640培养液及0.2μg／m L顺铂对照组(D组)，孵育24、48、72h后，加入MTT液2μL继续培养4 h，吸弃孔内上清。每孔再加入二甲基亚枫(DMSO)200μL，振荡混匀后于全自动酶标仪测定每孔氏A492nm OD值，抑制率(%)=〔(对照孔 A值―实验孔 A值)／对照孔 A值〕× 100%。�
　　1.2.2 A549细胞MRP mRNA的表达情况的检测:采用RT-PCR方法，采用Trizol按试剂盒说明提取RNA，紫外分光光度计检测RNA纯度和浓度，电泳法检测其完整性。用紫外分光光度计检测RNA纯度及含量，按说明书进行RT-PCR，PCR条件为94℃预变性5min；94℃30s，55℃ 30s，72℃ 1min，共29个循环，72℃延伸10min，扩增产物大小为291bp；1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测，扩增产物辉度扫描，靶基因A值，根以目的基因的表达β-actin A的表达对MRP mRNA相对量。�
　　1.3 统计学分析:SPSS13.0统计软件包处理数据，实验数据以（±s）表示，多组间比较方差齐时应用F检验，方差不齐时用秩和检验。�
　　2 结果�
　　2.1 As2O3对细胞生长抑制作用的影响:As2O3对A549／R有一定的抑制作用，表现为抑制率随着As2O3浓度的越增高和时间的延长而增大，呈时间-剂量依赖关系。见表1。�
　　表1 As2O3对细胞生长抑制作用的影响�
　　
　　时间 A组 B组 C组 D组
　　 24h 6.3±1.5 9.7±2.5 6.3±1.5 9.7±3.1
　　48h 8.8±1.5 10.2±3.1 21.3±6.4 28.7±8.3
　　72h 9.8±2.4� 20.5±5.4�� 35.3±11.2�� 44.3±15.4��
　　 注：与D组相比，差异有统计学意义，�P［2］。As2O3早先用于急性早幼粒细胞白血病的治疗，但近来发现其能够逆转某些肿瘤化疗的相对耐药情况。MRP位于16号染色体伤，属于三磷腺苷依赖性跨膜转运蛋白，有研究表明，肺腺癌耐药细胞株A549／R细胞中的MRP过度表达可能是其耐药的主要机制之一，其通过将细胞毒药物排出和／或将药物分离成胞内的小隔离体而阻止药物与靶点结合［3］。本研究结果显示，As2O3可显著下调MRP的表达，且对A549／R有一定的抑制作用，其抑制率呈时间-剂量依赖关系。且从抑制MRP的表达看来，低浓度的As2O3具有一定的优势。综上所述，具有抑制肺癌肿瘤生长的作用，其机制可能与下调MRP表达有关。
　　参考文献�
　　［1］ 成静，冯觉平，王亚萍．三氧化二砷对人肺腺癌A549/R细胞多药耐药相关蛋白表达的影响［J］．医药导报，2007，26(5)：468-460.�
　　［2］ 马权，郑东庆，韩冰．三氧化二砷对人肺癌A549细胞凋亡及耐药基因表达影响的实验研究［J］．中国伤残医学，2011，19(2)：19-21�
　　［3］ 韩冰，石玉枝，霍建民，等．砷剂对肺腺癌细胞凋亡及LRP、C-myc基因表达的影响［J］．现代肿瘤医学，2009，17(11)：2048-2050.�
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　　作者单位：116085 大连医科大学中山学院