口蹄疫O型抗体检测LB-ELISA试剂盒

　 口蹄疫O型抗体检测LB-ELISA试剂盒

　【产品名称】

　通用名称：口蹄疫O型抗体检测LB-ELISA试剂盒

　英文名称：Liquid-phase Blocking ELISA Kit for Detecting FMDV Type O Antibodies

　【预期用途】

　本品采用酶联免疫液相阻断法检测猪、牛、羊血清中的口蹄疫O型抗体，适用于动物疫苗免疫抗体监测。

　【主要组成成份】

　序号 组份名称 1 FMDV-O包被板Q 2 FMDV-O酶结合物Q 3 FMDV-O抗体溶液Q 4 FMDV-O阴性对照Q 5 FMDV-O阳性对照Q 6 显色液A 7 显色液B 8 终止液 9 浓缩洗涤液(25×) 10 FMDV-O浓缩病毒抗原Q 11 自封袋 12 封板膜 13 说明书 14 加样槽 15 血清稀释板 【检验方法】

　在使用前，所有的试剂盒组份应恢复到18～26℃。试剂应轻轻旋转或振荡混匀。每个样品使用一个单独的吸头。

　1．抗原抗体（阴阳性对照及待检样品）反应：根据不同的需要，选择图1或图2中的一种布局在血清稀释板上操作。图1为抗体效价测定（定量）检测10份样品布局图；图2为抗体效价测定（定量）检测20份样品布局图。

　2. 将以上稀释后的溶液，从血清稀释板上按次序转移至包被板上的对应孔。

　3. 加入按比例稀释后的病毒抗原，振荡混匀，孵育。

　4. 洗板5次，拍干。

　5. 加抗体溶液，继续加酶结合物，振荡混匀，孵育。

　6. 重复步骤4。加入混合显色液，孵育。

　7. 每孔再加终止液终止反应，立即在450nm波长下读取OD值。

　图1 96孔板检测10份样品布局图 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A S1 1:16 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 1:32 1:4 B 1:32 1:64 1:8 C 1:64 1:128 空白 D 1:128 1:256 空白 E 1:256 1:512 病毒

　抗原

　对照 F 1:512 1:1024 G 1:1024 1:2048 H 1:2048 1:4096

　图2 96孔板检测20份样品布局图 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A S1 1:16 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 1:32 1:4 B 1:32 1:64 1:8 C 1:64 1:128 空白 D 1:128 1:256 空白 E S11 1:16 S12 S13 S14 S15 S16 S17 S18 S19 S20 1:512 病毒

　抗原

　对照 F 1:32 1:1024 G 1:64 1:2048 H 1:128 1:4096 【结果分析】

　试验成立判断

　病毒抗原对照OD值应在2.0±1.0范围内；

　阳性对照抗体效价应在1:1024±1滴度以内；

　阴性对照抗体效价应＜1:8。

　结果判定

　病毒抗原对照4孔，弃去最高和最低OD值，计算剩余2孔的平均OD值，再除以2，即得50%对照值，该值即为临界值，表示阻断50％反应的对照OD值。待检样品OD值＞临界值,判为阴性；待检样品OD值≤临界值，判为阳性。每份待检样品系列梯度稀释中，阳性孔的最高稀释倍数即为该待检样品的抗体效价。若临界值处于两个稀释孔OD值之间，抗体效价取相邻阳性孔和阴性孔稀释倍数的反对数中间值。如临界值处于1:64（反对数值为1.8）与1:128（反对数值为2.1）之间，则判定该份待检样品的抗体效价为1:90（反对数值为1.95）。

　抗体效价≥1:128，判为阳性；

　抗体效价≤1:64，判为阴性；

　抗体效价在1:64～1:128时，判为可疑。可疑待检样品需复测，复测抗体效价≥1:128，判为阳性，＜1:128判为阴性。

　三、ELISA抗体效价与免疫动物攻毒保护关系：

　牛、羊：抗体效价≥1:128，99%以上保护；抗体效价≤1:16，不保护；抗体效价在1:22～1:90之间，50%保护。

　猪：抗体效价≥1:64，99%以上保护；抗体效价＜1:4，不保护；抗体效价在1:4～1:45之间，50%保护。

　抗体效价计算对照表（反对数值）

　抗体效价 Log10(效价)

　对照计算 抗体效价 Log10(效价)

　对照计算 抗体效价 Log10(效价)

　对照计算 1:4 0.6 1:32 1.5 1:256 2.4 1:6 0.75 1:45 1.65 1:360 2.55 1:8 0.9 1:64 1.8 1:512 2.7 1:11 1.05 1:90 1.95 1:720 2.85 1:16 1.2 1:128 2.1 1:1024 3 1:22 1.35 1:180 2.25 1:1440 3.15 【注意事项】

　1. 为使您的实验获得正确结果，请您在实验前仔细阅读本说明书。

　2. 本试剂盒配备的浓缩洗涤液（25×）在低温放置下，可能有无机盐结晶，建议将浓缩洗涤液（25×）室温放置，如果室温过低有结晶，用前微热溶化。

　3. 所有试剂使用前恢复至室温(18～26℃)，以免温度过低影响抗原抗体反应。

　4. 实验前应用温度计检查温箱温度，温度过高或过低影响OD值高低。

　5. 包被板反应时严禁堆叠放置，应该平铺且板间有空隙，不要离温箱壁太近。

　6. 实验所用移液器及设备应定期校准。

　7. 采集的样品要新鲜，并且最好不要溶血。血清标本在2～8℃放置不要超过2天，室温不超过8小时，如需长时间放置应储存于-20℃。

　【储存条件与有效期】

　试剂盒2～8℃存放，浓缩病毒抗原-20℃存放；有效期：12个月。

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