【甲氧滴滴涕对小鼠卵母细胞体外受精和胚胎发育的影响】

　　[摘要] 目的 研究MXC对小鼠卵母细胞体外受精和早期胚胎发育的影响。方法 1)将7.25和14.5μg/mL MXC组核成熟的小鼠卵母细胞行体外受精，观察卵母细胞的受精能力。2)将受精卵吸出培养，每日在显微镜下观察胚胎发育情况，分析受精卵的2-细胞形成率、8-细胞形成率、桑椹胚率、囊胚率和胚胎孵化率。3)选择形态较好的囊胚进行胚胎细胞染色计数。结论 虽然甲氧滴滴涕对体外成熟的小鼠卵母细胞的受精率、2-细胞形成率的影响不明显，但是却能显著降低囊胚的形成率和鼠胚孵化率，尤其是鼠胚孵化率下降明显，这可能是造成不明原因的流产和不良妊娠结局的原因之一。
　　[关键词] 甲氧滴滴涕 卵母细胞 体外受精 生殖发育毒性
　　[中图分类号] R321.2[文献标识码] A[文章编号] 1005-0515（2011）-08-052-01
　　甲氧滴滴涕(methoxychlor,MXC)作为滴滴涕的替代物曾广泛应用于农业肥料、家用杀虫喷雾剂、人体和动物的杀寄生虫的药物中，动物实验研究发现MXC具有不孕、流产、诱导卵泡闭锁等生殖毒性。因此，研究MXC对生殖细胞的影响具有重要意义。我们的研究以昆明白小鼠未成熟卵母细胞为研究对象，观察甲氧滴滴涕(MXC)对小鼠未成熟卵母细胞在体外成熟后的进一步发育的毒性作用，为研究MXC对生殖的影响提供依据。
　　1 材料
　　1.1 实验对象 选用6周龄性成熟健康昆明雌性和雄性小鼠，二级动物，体质量为(25±3)g，由第四军医大学实验动物中心提供。小鼠放在自动控制光照和温度的饲养室内进行饲养。
　　1.2 主要试剂 MXC(批号:49054,纯度99%,SIGMA公司)，孕马血清促性腺激素(PMSG,杭州第二激素制品厂)，人绒毛膜促性腺激素(Hcg,杭州第二激素制品厂)，M2培养液(SIGMA公司)，二甲基亚砜(DMSO,美国Amresco公司)，CZB胚胎培养液(美国SIGMA公司)，Hoechst33342(美国SIGMA公司)。
　　2 方法
　　2.1 未成熟卵母细胞的获取 选取动情前期雌鼠注射PMSG5IU，44-48h后处死小鼠，取出卵巢置于M2培养液中，针刺法采集卵丘-卵母细胞复合体（Cumulus-oocyte complexs,COC）。玻璃微吸管收集外围至少包绕2层卵丘细胞的未成熟卵母细胞。
　　2.2 未成熟卵母细胞体外培养方法 实验组分别用含7.25，14.5μg/mL MXC的M2培养液，对照组直接用M2 培养液培养。采用微滴培养体系，每滴培养10-15枚左右的卵母细胞。培养24h时观察第一极体(The first polar body,PBI)的形成情况，出现PBI则视为细胞核成熟。
　　2.3 结果评价 受精率、2-细胞形成率、8-细胞形成率、桑椹胚形成率、囊胚形成率以及囊胚从透明带中孵化率的比较。
　　3 结果 MXC对小鼠体外受精及受精后胚胎发育的影响。
　　表1MXC对小鼠体外受精及受精后胚胎发育的影响
　　注：同一列各组之间字母完全不同者表示差异极显著P0.05)。提示7.25和14.5μg/mL MXC对体外成熟小鼠卵母细胞受精率的影响不显著。
　　4 讨论 综上所述，虽然甲氧滴滴涕对体外成熟的小鼠卵母细胞的受精率影响不明显，但是却能显著降低囊胚的形成率，这可能是造成不明原因的流产和不良妊娠结局的原因之一。
　　参考文献
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