慢性心力衰竭患者血清MCP-3，NRG-1β和CF6水平表达与疾病严重程度的相关性研究

杨 婷，赵茜茜，褚 杰，崔晓博(1.张家口市第一医院a.心内科；
b.感染科，河北张家口 075041；
. 张家口市第一医院东院区检验科，河北张家口 075041)

慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）是世界许多地区心脏病患者住院的主要原因，随着老龄化人口的增长，心力衰竭的发病率进一步上升，心脏的收缩和舒张功能发生障碍可引起心力衰竭，使静脉回血量无法充分排出心脏，导致静脉系统血液淤积，动脉系统血液灌溉不足，引起心脏循环障碍[1]。临床对于此病的治疗已取得重大进展，但5年病死率仍然较高，故临床寻找诊断此病的标志物具有重要意义。随着对慢性心力衰竭的不断研究发现，此病的发展与多种细胞因子异常表达有关，单 核 细 胞 趋 化 蛋 白-3（monocyte chemoattractant protein-3，MCP-3）表达于内皮细胞、单核细胞、巨噬细胞、肿瘤细胞，在炎症反应、血管发生等多种疾病中发挥作用[2]。神经调节蛋白1（neuregulin 1，NRG-1）是心脏内皮细胞表达的一种跨膜蛋白，该蛋白产生的β变体参与心肌细胞的分化、增殖、生长、生存及凋亡[3]。偶联因子6（coupling factor 6，CF6）可抑制前列环素及一氧化碳的合成或释放，

以循环激素样方式发挥收缩血管、升高血压等生物学效应[4]。临床关于MCP-3，NRG-1和CF6联合诊断慢性心力衰竭的相关研究较少，基于上述研究背景，在本文研究中进一步验证MCP-3，NRG-1和CF6在慢性心力衰竭中的表达，明确其是否参与疾病的发展，为临床上慢性心力衰竭的早期诊治提供参考。

1.1 研究对象 选取2020年8月～2021年8月张家口市第一医院收治的慢性心力衰竭患者120例作为慢性心力衰竭组。其中男性50例，女性70例，年 龄40～75（54.63±17.5）岁，BMI 21.98～26.35（24.25±0.81）kg/m2；
吸烟史65例，

饮酒史55例。纳入标准：①慢性心力衰竭患者符合《慢性心力衰竭心脏康复中国专家共识》[5]中对心力衰竭的诊断标准；
②患者呼吸困难，心源性水肿，肾功能不全，少尿，患者头晕，心、脑、肾等脏器缺血；
③知情本次研究；
④临床治疗完整。排除标准：①并发自身免疫疾病者、血液系统疾病与其他恶性肿瘤者；
②心、肝、肾功能不全者；
③近期手术者；
④急性感染者；
⑤扩张性心肌病者；
⑥肥厚性心肌病所致的心力衰竭者；
⑦妊娠期或有妊娠计划；
⑧具有出血性疾病及有出血倾向。另外选取健康人70例作为健康组，均无任何血管疾病及其他特殊疾病。其中男性30例，女性40例，年龄43～76（56.53±16.5）岁，BMI 23.02～25.96（24.49±1.47）kg/m2；
吸烟史40例，饮酒史30例。两组在一般资料中均衡可比（P＞0.05），两组研究对象及家属均知情同意本次研究，签署了知情同意书，且经过我院伦理委员会审核批准。

1.2 仪器与试剂 MCP-3 ELISA试剂盒（艾美捷科技有限公司提供，批号：KA3668），NRG-1β ELISA试剂盒（上海恒斐生物科技有限公司提供，批号：CSB-EQ027438HU），CF6 ELISA试剂盒[齐一生物科技（上海）有限公司提供，批号：K4919-100]。

1.3 方法

1.3.1 血清MCP-3，NRG-1β和CF6检测方法：采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测两组研究对象体内血清MCP-3，NRG-1β和CF6水平，采集两组空腹静脉血3 ml，以离心半径5cm，转速3 000r/min离心处理10min，分离上层血清，-80℃保存待检。按照试剂盒说明书进行操作。

1.3.2 心功能分级：根据慢性心力衰竭的症状严重程度进行心功能分级，Ⅰ级为轻度，患者日常活动不受限制，一般活动不会引起心力衰竭症状；
Ⅱ～Ⅲ级为中度，心力衰竭患者体力活动受到限制，低于平时的活动可引起心力衰竭的症状；
Ⅳ级为重度，心力衰竭患者不能从事任何体力活动，休息状态下会有心力衰竭的症状。

1.4 统计学分析 采用SPSS26.0统计软件进行分析处理。应用Kolmogorov-Smirnov检验数据是否符合正态分布，符合正态分布的计量资料采用均数±标准差（±s）描述，多组间比较采用方差齐性检验，两组间比较采用独立样本t检验；
MCP-3，NRG-1β和CF6之间相关性采用Pearson相关性分析。采 用GraphPad Prism 7做ROC曲 线，分 析MCP-3，NRG-1β和CF6及三项联合检测对慢性心力衰竭的诊断价值，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2.1 健康组、慢性心力衰竭组血清中MCP-3，NRG-1β，CF6表达水平对比 与健康组相比，慢性心力衰竭组MCP-3（0.52±0.05ng/L vs 0.10±0.01ng/L），NRG-1β（6.01±0.62ng/ml vs 3.25±0.32ng/ml），CF6（306.64±30.58pg/ml vs 201.62±21.36pg/ml）表达水平升高，差异具有统计学意义（t=69.400, 34.630, 24.860, 均P＜0.05）。

2.2 MCP-3，NRG-1β和CF6与慢性心力衰竭严重程度的关系分析 见表1。随着慢性心力衰竭严重程度的加重，MCP-3，NRG-1β和CF6的升高加剧，重度、中度慢性心力衰竭患者MCP-3，NRG-1β，CF6水平高于轻度慢性心力衰竭患者，差异具有统计学意义（t=27.877，8.852，10.078；
31.552，6.348，2.908，均P＜0.05)；
重度慢性心力衰竭患者MCP-3，NRG-1β，CF6水平高于中度慢性心力衰竭患者，差异具有统计学意义（t=17.380，3.464，8.684，均P＜0.05)。

表1 MCP-3，NRG-1β和CF6与慢性心力衰竭严重程度的关系分析（±s）

表1 MCP-3，NRG-1β和CF6与慢性心力衰竭严重程度的关系分析（±s）

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2.3 ROC曲 线 分 析MCP-3，NRG-1β和CF6对慢性心力衰竭的诊断价值 见表2，图1。ROC曲线显示，与MCP-3，NRG-1β，CF6单项诊断相比，三项联合检测对慢性心力衰竭的诊断价值较高（P=0.001）。以正确诊断指数最大对应的MCP-3，NRG-1β，CF6值作为最佳诊断分界点，分界点MCP-3值为0.15 ng/ml，NRG-1β值为4.55 ng/L，CF6值为225.54 pg/ml。

表2 ROC曲线分析MCP-3，NRG-1β，CF6对慢性心力衰竭的诊断价值

图1 MCP-3，NRG-1β和CF6诊断慢性心力衰竭的ROC曲线

2.4 MCP-3，NRG-1β和CF6之间相关性分析 相关性分析显示，MCP-3与NRG-1β正相关（r=0.593，P=0.001），MCP-3与CF6正相关（r=0.516,P= 0.001）；
NRG-1β与CF6正相关（r=0.549,P=0.001)。

慢性心力衰竭是由于心肌损伤后机体的心肌结构变化导致心脏泵血功能低下，是各种心脏病的终末阶段。慢性心力衰竭会改变血液动力学，释放炎症因子，激活神经内分泌系统，并导致内皮功能的异常及心肌缺血、损伤与坏死[6-8]。

MCP-3作为多种细胞的强力趋化因子，在多种炎性疾病的发生发展中具有重要作用，细胞通过分泌多种血管形成调节因子，促进新血管形成[9]；
MCP-3是一类由细胞产生的具有多种生物学功能的碱性蛋白，作用于内皮细胞，可促进细胞的增殖和迁移，正向调控血管的生成[10-12]。趋化因子上调可多方面影响心肌功能，其浓度升高可引起淋巴细胞、中性粒细胞与单核细胞浸润，浸润的细胞活化后可以分泌更多的趋化因子，形成一个循环，浓度升高的趋化因子可以促使白细胞释放氧自由基，对心肌功能产生负面影响。本文研究发现，MCP-3与慢性心力衰竭者病情严重程度有关，表明MCP-3的表达水平可影响患者的疾病严重程度。其原因可能为MCP-3趋化更多免疫细胞，引起组织纤维化，造成心力衰竭心肌重构。

NRG-1β为表皮生长因子家族成员之一，是一种可以在细胞表面激活或加工跨膜蛋白，并可调节多种不同的细胞，还可促血管生成。NRG-1在缺血损伤中可促进血管生成、逆转心肌重构及减少氧化应激作用[13-15]。研究发现[16-17]，NRG-1β可促进心肌细胞收缩功能分子的表达，改善心肌细胞的内在组分构成，提高心肌细胞功能的潜在能力。本文研究显示，NRG-1β在患者体内表达与患者病情相关，其原因可能为患者病情的加重使体内神经-内分泌系统被激活，使NRG-1β进入血液，加重病情。NRG-1β可作为新的生物标志用于心力衰竭的诊断与评估患者的严重程度。

CF6是线粒体ATP合酶柄区的一个亚单位，是一种血管活性物质，在体内各组织与血管内皮细胞膜中均有分布，在心肌中含量最高[17-18]。研究发现[19-20]，CF6为唯一的前列环素内源性阻滞剂，在高血压、冠心病、糖尿病等血管疾病中显著升高，并与血管性假血友病因子等内皮损伤标志物水平明显相关。慢性心力衰竭患者心肌和内皮细胞严重受损，并伴有神经体液因子的激活。CF6在体内的释放受多种因素影响，当机体出现血管内皮损伤与心肌缺血时，体内细胞出现坏死，CF6受到刺激进入血液。本文结果显示，血浆CF6与慢性心力衰竭患者相关，在慢性心力衰竭患者体内表达升高，且随着病情的加重逐渐升高，其原因可能为慢性心力衰竭患者存在心肌缺血损伤、心肌细胞坏死凋亡与炎症因子释放，上述反应可导致心肌细胞释放CF6进入血液循环，共同导致CF6水平升高，此研究结果与李丽等[21]研究结果一致，此结果提示CF6为内皮损伤的标志，参与慢性心力衰竭的发展，可用于慢性心力衰竭的诊断。综上所述，本文研究发现，慢性心力衰竭患者血清MCP-3，NRG-1β和CF6水平与患者的疾病严重程度有关，临床可根据上述指标早期评估此病。但本次研究未深入分析其MCP-3，NRG-1β和CF6具体作用机制，且所纳入的样本量较少，因此本文还需后续研究大样本多中心地分析MCP-3，NRG-1β和CF6与慢性心力衰竭的关系，以期望造福于更多的患者。