细菌室采样及检查原则

　细菌室采样及检查原则

　采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测：送检时间不得超过 6h，若样品保存于 0～4℃条件时。送检时间不得超过 24h。

　1、空气采样及检查方法 1.1、采样时间 选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。

　1.2、采祥高度 与地面垂直高度 80～150cm。

　1.3、布点方法 室内面积≤30M 2 ，设一条对角线上取 3 点，即中心一点、两端各距墙 lm 处各取一点；室内面积>30m 2 ，设东、西、南、北、中 5 点，其中东、西、南、北点均距墙 1m。

　1.4、采样方法 用 9cm 直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min 后立即送检培养。

　1.5、结果计算 空气细菌菌落总数(cfu/m 3 )＝ 50000NAT

　式中：

　A 一平板面积，cm 2 ；

　T 一平板暴露时间，min；

　N 一平均菌落数，cfu/平皿。

　2、物体表面采样及检查方法 2.1、采样时间 选择消毒处理后 4h 内进行采样。

　2.2、采样面积 被采表面<100cm 2 ，取全部表面；采表面≥l00cm 2 ，取 100cm 2 。

　2.3、采样方法 用 5×5cm 2 的标准灭菌规格板：放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水平样液的棉拭子 1 支，在规格权内横竖往返各涂抹 5 次；并随之转动棉拭于。连续采样 4 个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭于放入装 10ml 采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。

　2.4、结果计算 物 体 表 面 细 菌 菌 落 总 数 (cfu/cm 2 ) ＝平皿上菌落的平均数×采样液稀释倍数采样面积（cm 2 ）

　3、医护人员手采样及检查方法 3.1、采样时间 在接触病人、从事医疗活动前进行采样。

　3.2、采样面积及方法被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉试子一支在双手指曲面从指根到指端来回涂擦各两次(一只手涂擦面积 30cm 2 )，并随之转动采样棉试子，剪去手接触部位；将棉试子放入装有10ml采样液的试管内。采样面积按平方厘米(cm 2 )计算。

　3. 3、细菌菌落总数检查 3.4、结果计算 手 细 菌 菌 落 总 数 (cfu/cm 2 ) ＝平皿上菌落的平均数×采样液稀释倍数30×2

　3.5、正确洗手 （1）、选用质量好的洗手液，保护手被皮肤。

　（2）、用质量好的消毒液。

　（3）、选用合适的洗手设备。

　正确洗手步骤：

　（1）、收下饰物及手表，用自来水淋湿双手。

　（2）、取无菌皂液或洁净肥皂于手上。

　（3）、用力擦搓掌心、指缝、手背、手指关节、指腹、指尖、拇指 10～15 分钟。

　（4）、流动水冲洗 （5）、用擦手纸巾包住龙头将水关闭，或用肘、

　脚等关闭水龙头。

　（6）、用擦手巾擦干双手或用烘器烘干。

　洗手后，细菌菌落数应符合手质控标准。

　4、医疗用品采样及检查方法 4.1、采样时间：在消毒或无菌处理后存放有效期内采样； 4.2、采样量和采样方法 （1）、破坏性方法取样：如输液器、输血器、注射针等，剪碎取一定量于培养基内培养，35℃，48 小时培养。

　（2）、不能用破坏性方法取样：可用浸有无菌生理盐水采样棉拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面<100cm 2 ，取全部；被采表面≥100cm 2 ，取 100cm 2于培养基里 35℃，48 小时培养。

　4.3、质控标准：

　(1)、进入人体无菌组织，器官或接触破损皮肤粘膜的医疗用品必须无菌。

　(2)、接触粘膜的医疗用品，细菌落数应≤20cfu/g或 100cm 2 ，不得检出致病菌。(溶血性链球菌，沙门氏菌，金黄色葡萄球菌，绿脓杆菌等。) 5、使用中消毒剂与无菌器械保存液采集及检查方法

　5.1、采样时间 采取更换前使用中的消毒剂与无菌器械保存液。

　5.2、采样量及方法 在无菌条件下，用无菌吸管吸取 1ml 被检样液，加入 9ml 稀释液中混均，对于醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤即可；对于含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒剂，需在肉汤中加入 0.1％硫代硫酸钠；对于洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在肉汤中加入3％(W/V)吐温80和0.3％卵磷脂；对于醛类消毒剂，需在肉汤中加入 0.3％甘氨酸；对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂，需在肉汤中加入 3％(WN)吐温 80，以中和被检药液的残效作用。

　复方中和剂：

　(1)0.03M 磷酸缓冲液(PBS)：

　 磷酸氢二钠2.84g

　 磷酸二氢钾1.36g

　蒸 馏 水

　1000ml

　PH

　7.2～7.4 (2)复方中和剂：

　0.5％硫代硫

　酸钠

　 2％吐温 80

　 l％卵玲脂

　 l％甘氨酸

　 用PBS配制 消毒剂使用中污染菌量测定：被检消毒液混匀后，用无菌吸管取样 1ml 加至 9ml 含相应中各剂的稀释液中，取 0.5ml 接种平板培养于 36±1℃3 天和 28℃7 天，每次采样平行作 3 次样品计算每毫升消毒液在连续使用过程中污染微生物数量。

　每 毫 升 微 生 物 数 (cfu/m1) ＝两种温度下平皿上菌落数×稀释倍数0.5×2

　5.3、结果分析 平板上有菌生长，证明被检样液有残存活菌，若每个平板的落数在 10 个以下，仍可用于消毒处理(但不能用于灭菌)，若每个平板菌落数超过 10 个，说明每毫升被检样液含菌量己超过 100 个，即不宜再用。