一次性使用卫生用品生产环境卫生要求检测、消毒效果检测评价、环氧乙烷残留量测试方法

　附 录 A （规范性附录）

　生产环境卫生要求检测方法 A.1 空气采样与测试方法 A.1.1 样品采集 室内面积不超过30m2 ，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1m；室内面积超过30m2 ，设东、西、南、北、中5点，周围4点距墙1m。生产企业也可以根据实际生产线的布局自行增加培养基放置位置。

　空气采样器法：可选择六级撞击式空气采样器或其他经验证的空气采样器。采样时，将采样器置于室内中央0.8m～1.5m高度，按采样器使用说明书操作，每次采样时间不应超过30min。

　平皿暴露法：采样时，将含营养琼脂培养基的平皿（直径9cm）置采样点（0.8m～1.5m高度），打开平皿盖，扣放于平皿旁，使平皿在空气中暴露5min后盖上平皿盖，及时送检。

　空气采样首选空气采样器法。

　A.1.2 菌落总数检测 在采样前将准备好的营养琼脂培养基置36℃±1℃培养18h～24h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。

　将已采集的培养皿在4h内送实验室，于36℃±1℃ 培养48h观察结果，计数平皿上菌落数。

　平皿暴露法按平均每皿的菌落数报告：CFU/皿·5min。

　空气采样器法菌落总数计算见式（A.1）：

　1000 t vnY

　................................... (A.1) 式中：

　Y——空气中菌落总数，单位为每立方米菌落形成单位（CFU/m3 ）；

　n——各平皿上菌落数（CFU）； v——采样速率（L/min）；

　t ——采样时间，单位为分钟（min）； 1000——换算系数。

　A.2 工作台表面与工人手表面采样与测试方法 A.2.1 样品采集 A.2.1.1 工作台：将经灭菌的内径为5cm×5cm的灭菌规格板放在被检物体表面，用一浸有灭菌生理盐水的棉签在其内横竖往返涂抹各5次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水（或相应中和剂）的采样管内送检。

　A.2.1.2 工人手：被检人五指并拢，用一浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指根到指端来回涂擦 2次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水（或相应中和剂）的采样管内送检。

　A.2.2 菌落总数检测 将已采集的样品在4h内送实验室，每支采样管充分混匀后取1.0mL样液，放入灭菌平皿内，倾注营养琼脂培养基，每个样品平行接种两块平皿，置36℃±1℃培养48h，计数平皿上菌落数。

　工作台表面菌落总数计算见式(A.2)：

　1001 SYY

　..................................... (A.2) 式中：

　Y 1 ——工作台表面菌落总数，单位为每平方厘米菌落形成单位（CFU/ cm2 ）；

　Y 0 ——平皿上平均菌落数，单位为菌落形成单位（CFU）； S ——采样面积，单位为平方厘米（cm2

　）； 10——稀释倍数。

　工人手菌落总数计算见式(A.3)：

　100 2 Y Y

　..................................... (A.3) 式中：

　Y 2 ——工人手表面菌落总数，单位为每只手菌落形成单位（CFU/只手）； Y 0 ——平皿上平均菌落数，单位为菌落形成单位（CFU）；

　10——稀释倍数。

　附 录 B （规范性附录）

　消毒效果检测评价方法 B.1 环氧乙烷消毒 B.1.1 环氧乙烷消毒效果评价用生物指示菌为枯草杆菌黑色变种（ATCC 9372）芽孢。在菌量为 5.0×105

　CFU/片～5.0×10 6

　CFU/片、环氧乙烷浓度为600mg/L±30mg/L、作用温度为54℃±1℃、相对湿度为60%±10%条件下，其杀灭90%微生物所需时间D值应为2.6 min～5.8 min，存活时间≥7.5 min，杀灭时间≤58 min。

　B.1.2 每次测试至少布放10片生物指示剂，放置于最难杀灭处。消毒完毕，取出指示菌片接种营养肉汤培养液作定性检测或接种营养琼脂培养基作定量检测，将未处理阳性对照菌片作相同接种，两者均置36℃±1℃培养。阳性对照应在24h内有菌生长。定性培养样品如连续观察7d（或按使用说明书中的培养时间）全部无菌生长，可报告生物指示剂培养结果为阴性，消毒合格。定量培养样品与阳性对照相比杀灭对数值≥3.00也可报告为消毒合格。

　B.2 电离辐射消毒 B.2.1 电离辐射消毒效果评价用生物指示菌为短小杆菌E601（ATCC 27142）芽孢，在菌量为5.0×105

　CFU/片～5.0×10 6

　CFU/片时，其杀灭90%微生物所需剂量D10 值应为1.7 kGy。

　B.2.2 每次测试至少选5箱产品，每箱布放3片生物指示剂，置于最小剂量处。消毒完毕，取出指示菌片接种营养肉汤培养液作定性检测或接种营养琼脂培养基作定量检测，将未处理阳性对照菌片作相同接种，两者均置36℃±1℃培养。阳性对照应在24h内有菌生长。定性培养样品如连续观察7d（或按使用说明书中的培养时间）全部无菌生长，可报告生物指示剂培养阴性，消毒合格。定量培养样品与阳性对照相比杀灭对数值≥3.00也可报告消毒合格。

　B.3 压力蒸汽消毒 按GB 15981的规定执行。

　附 录 C （规范性附录）

　产品环氧乙烷残留量测试方法 C.1 测试目的 确定产品消毒后启用时间，当新产品或原材料、消毒工艺改变可能影响产品理化性能时应予测试。

　C.2 样品采集 于环氧乙烷消毒后，立即从同一消毒批号的3个运输包装中随机抽取一定量最小销售包装样品，采样量至少应满足实验所需（平行测试2次）规定的量，并留一定量样品在需要复测时备用。

　分别于环氧乙烷消毒后24h及以后每隔数天进行残留量测定，直至残留量降至6.2.1所规定的标准值以下。

　C.3 仪器与试剂 C.3.1 仪器 C.3.1.1 气相色谱仪，配有火焰离子化检测器（FID）。

　C.3.1.2 分析天平，精确到0.1mg。

　C.3.1.3 机械振荡器。

　C.3.1.4 冰箱：能使样品保存在2℃～8℃之间。

　C.3.1.5 气体调节器：用于开、关环氧乙烷气瓶。

　C.3.1.6 气密性注射器：容量为1.0mL、10mL、50mL、100mL，用于标准气体配制及把标准气体注入液相色谱。

　C.3.1.7 微量注射器：容量为10μL，用于向气相色谱仪中注入浸提溶液。

　C.3.1.8 平底螺盖瓶：体积能够容纳样品及浸提溶液，具有聚四氟乙烯（PTFE）衬垫的硅橡胶塞，用于样品浸提。

　C.3.2 试剂 C.3.2.1 环氧乙烷：装在适当的气瓶中的有证标准气体。

　C.3.2.2 水：纯度适合于气相色谱。

　C.3.2.3 载气和辅助气体。

　C.3.2.4 载气：高纯氮气（99.999%）。

　C.3.2.5 辅助气体：氢气、空气。

　C.4 操作步骤 C.4.1 标准配制

　用100mL气密性注射器抽取环氧乙烷饱和气（重复放空2次，以排除原有空气），塞上橡皮头，用10mL气密性注射器抽取上述100mL气密性注射器中纯环氧乙烷标准气10mL，用空气稀释到100mL （可将10mL标准气注入到已有90mL氮气的带橡皮塞头的气密性注射器中来完成）。用同样的方法根据需要再逐级稀释，配制4～5个浓度的标准气体。根据环氧乙烷的纯度、稀释倍数和室温，计算出环氧乙烷标准气体的配制浓度。

　稀释后标准气体浓度计算公式见式（C.1）：

　t kpc  27327310 4 . 2210 4436 .............................. (C.1) 式中：

　c——标准气体浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； p——纯度； k——稀释倍数； t——室温，单位为摄氏度（℃）； 44——环氧乙烷相对分子质量，单位为克每摩尔（g/mol）； 273——绝对温度换算常数； 22.4——气体常数，单位为升每摩尔（L/mol）。

　C.4.2 样品处理 至少取2个最小包装产品，将其剪碎，随机精确称取0.5g～2g，放入适当体积的平底螺盖瓶中，加入2mL～5mL去离子水，确保样品完全浸没于浸提溶液中，加盖密封后充分摇匀，放置4h或振荡30min待用。如被检样品为吸水树脂材料产品，可适当增加去离子水量，以确保至少可吸出2mL样品浸提溶液。如果检测不能马上进行，则将浸提溶液从样品中分离出来，密封于有聚四氟乙烯衬垫的瓶中盖紧。任何盛有标准溶液或浸提液的管瓶，其顶端空间应少于总体积的10%，浸提溶液可在（5±3）℃的冰箱中暂时贮存，并于浸提当天检测。

　C.4.3 分析 待仪器稳定后，在同样条件下，环氧乙烷标准气体各进样1.0mL，待分析样品（样品浸提溶液）各进样1μL，每一样液平行作2次测定。

　根据保留时间定性，根据峰面积（或峰高）进行定量计算，取平均值。

　C.4.4 仪器操作参考条件 色谱柱：极性石英毛细管色谱柱（固定相为聚乙二醇），或其他等效色谱柱。

　柱温：90℃。

　进样口温度：220℃。

　载气：高纯氮气。

　载气流量：5.0mL/min。

　检测器温度：230℃。

　氢气流量：40mL/min。

　空气流量：400mL/min。

　C.4.5 计算 以所进环氧乙烷标准气的微克(μg)数对所得峰面积(或峰高)作环氧乙烷工作曲线。

　以样品中环氧乙烷对应的峰面积（或峰高）在工作曲线上求得环氧乙烷的量A（μg），并以式（C.2）求得产品中环氧乙烷的残留量。

　进萃VVmAX

　.................................... (C.2) 式中：

　X——产品中环氧乙烷残留量，单位为微克每克（μg/g）； A——从工作曲线中所查得之环氧乙烷量，单位为微克（μg）； m——所取样品量，单位为克（g）； V 萃

　——萃取液体积，单位为毫升（mL）； V 进

　——进样量，单位为毫升（mL）。