亚硝基脲毒性_过氧化脲漂白剂的短期全身毒性研究

　　[摘要]目的：评价不同增稠载体过氧化脲（carbamide peroxide,CP）漂白剂的短期全身毒性，并与同类商品漂白剂进行比较。方法：将以卡波姆（carbopol）或聚乙烯吡咯烷酮（PVP）为增稠载体的10％CP和10%Opalescence(OP)漂白凝胶制备成20%的水溶液，实验组白鼠按5ml/kg经口途径给服，对照组按同等标准给服等量蒸馏水，持续7天，通过临床体征、食物利用率、体重相对增长率以及病理表现来评价受试材料的短期全身毒性。结果：实验组白鼠的食物利用率在给药周与对照组的差值在20％以上，说明受试材料对机体有毒，在观察周差值降到20％以下，对机体无毒；实验组和对照组的体重相对增长率在给药周和观察周均有显著差异（P＜0.05），各实验组间的体重相对增长率在给药周和观察周均无显著差异（P＞0.05）。结论：以Carbopol或PVP为增稠载体的10％CP漂白剂和OP10%漂白凝胶短期内应用对机体有毒，但无长期损害。
　　[关键词]漂白；过氧化脲；毒性研究
　　[中图分类号]R783 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2008）03-03
　　
　　The systemic toxicity study of carbamide peroxide bleaching agents
　　WANG Xiao-ling1,HE Hui-ming2,ZHAO Xin-yi3,WANG Zhong-yi2
　　(1.Department of Stomatology,Forced Police General Hospital,Beijing 100039,China;2.Department of Prosthodontics,the Fourth Military Medical University;3.Department of Dental Matericals,the Fourth Military Medical University)
　　
　　Abstract： ObjectiveTo evaluate short term systemic toxicity of CP bleaching agents with different carriers, and to compare the result with commercial bleaching gels of the same kinds.MethodsMaking 20% bleaching water solution by using 10% CP with Carbopol or PVP as carriers and 10% Opalescence(OP). Experiment rats were perfused the bleaching solution by 5ml/kg via oral route continually for seven days, control rats were perfused distilled water according to equal standard, then combine clinical signs, food utilization rate and pathology to evaluate the short term systemic toxicity of the lab rats. ResultsDuring experimental period there are greater than 20% difference of food utilization between experimental rat group and control group, this indicates the toxicity of bleaching solution, the difference decreased to less than 20% during observation period,there is no toxicity; there are significant difference of relative weight gaining rate between the two rat groups during the experimental time and observation period(P＞0.05). ConclusionOpalescence 10% bleaching gel and 10% CP bleaching agents with Carbopol pr PVP as thickening carriers can cause short term body toxicity but the effect does not last for longer term.
　　Key words: bleaching;carbamide peroxide(cp);toxicity study
　　
　　短期全身毒性实验作为常用体内评价的初步实验，即通过动物实验评价材料的毒性，在国内外生物材料评价标准中都有此立项。本实验即采用YY／T0244-1996中规定的短期全身毒性实验（经口途径）［1］对配制CP漂白剂的短期口服毒性进行评价，同时和国外同类产品做比较。
　　
　　1材料和方法
　　
　　1.1实验动物：40只大白鼠（第四军医大学实验动物中心提供），雌雄各半，体重130～150g。标准饮食、饮水。将大白鼠随机分为实验组和对照组，每组10只，雌雄各半。饲养时，每个笼内放同性别、服用同一材料的大白鼠5只，并标记。
　　1.2实验材料：以Carbopol或PVP为增稠载体的10％CP和Opalescence(OP)10%通过蒸馏水制备成20%的水溶液。
　　1.3 分散介质：蒸馏水。
　　1.4器具：天平（感量为0.01g），灌胃针头，5ml注射器。
　　1.5 给服方法：用连有灌胃针头的注射器给服试样5ml/kg，给服材料前需禁食4～8h，禁食期间不禁水。对照组给服等量蒸馏水。连续给服7天后观察一周。
　　1.6 观察
　　1.6.1 每天观察动物的临床毒性体征。（见表1）
　　
　　1.6.2 每天称重并记录各动物体重及每组动物食物消耗量：①计算每周每组动物食物利用率（即每吃100g食物所增长的体重克数）。②计算每只动物体重相对增长率（体重增长数g/原始体重g×100），并将实验组与对照组每周体重相对增长率通过SPSS11.0软件采用Dunnett-t检验和SNK-q检验对结果进行统计分析。
　　1.6.3 病理解剖宏观观察动物重要脏器。观察有无充血、出血、水肿或其他变化。如有异常应进行常规组织病理切片观察。
　　1.7 结果评价：实验组动物食物利用率比对照组低20％或20％以上，或体重相对增长率低于对照组，且有统计学差异（P＜0.05），则认为该材料对机体有毒；有一只临床毒性体征为重度或死亡，应重复实验，结果仍如此，认为该材料对机体有毒；有2只或2只以上临床毒性体征为重度或死亡，3只或3只以上临床毒性体征为中度，5只或5只以上临床毒性体征为轻度，则认为该材料对机体有毒；临床毒性体征为中度和轻度的动物总数为4只或4只以上，认为该材料对机体有毒；有3只或3只以上组织病理观察与对照组相比有异常，认为该材料对机体有毒；有一只或两只组织病理观察与对照组相比有异常，应重复实验，如结果仍有异常，则认为该材料对机体有毒。
　　
　　2结果
　　
　　所有受试动物14天观察期内无一死亡。实验过程中未见动物出现明显运动机能减退、呼吸困难、腹泻、眼睑下垂、震颤、虚脱及其它毒性症状。实验组雄性及雌性大白鼠的食物利用率在给药周与对照组的差值在20％以上（如图1），说明受试漂白剂对机体有毒，在观察周与对照组的差值降到20％以下（如图2），对机体无毒；实验组和对照组的体重相对增长率（见表2）在给药周和观察周均有显著差异（P＜0.05），各实验组间的体重相对增长率在给药周和观察周均无显著差异（P＞0.05）。
　　肉眼观察：实验组仅OP10%组有2只动物的肝组织可见轻度血管扩张充血（如图3），其余未见异常变化。按评价标准不支持上述结果。说明受试漂白剂短期应用对机体有毒，但是短暂的，随着机体的代谢和修复，无长期损害。
　　
　　3讨论
　　
　　急性经口全身毒性实验是用于评价材料短期经口服用后对机体的毒性作用，漂白剂的应用部位是口腔，由于较长的作用时间，少部分可能通过消化道进入机体，所以设计经口途径来评价该材料的急性毒性适合临床使用要求。以往大多引用美国牙医协会（ADA）等标准的经口半数致死量实验（LD50），口服LD50实验一般需动物50～60只，分为5～6个实验组，不同实验组给予不同的提取液剂量，各组间剂量差距按等差或等比级数设计，以半数动物死亡的实验组的剂量作为半数致死剂量。这一实验方法对于确定毒性物质的半数致死剂量是必须的，但用于牙科材料生物相容性评价就显得机械、繁琐。
　　本实验根据我国医药行业标准YY/T0244-1996规定的口腔材料生物实验方法，即短期全身毒性实验（经口途径），采用胃内灌注直接给药，保证了给药剂量，可准确评价材料的毒性。实验过程中未见动物出现明显运动机能减退、呼吸困难、腹泻、眼睑下垂、震颤、虚脱及死亡。通过对食物利用率和体重相对增长率的分析结果表明，受试漂白剂有短期全身毒性。病理解剖宏观观察结果除OP10%组2只动物的肝组织可见轻度血管扩张充血外，其余动物脏器未见充血、出血、水肿或其它异常变化。按评价标准不支持上述结果。从而推断受试漂白剂短期应用对机体有毒，但是短暂的，随着机体代谢及防御系统的运行，对机体无长期损害[2]。
　　患者在长期应用漂白剂的过程中，可能会吞入少量的漂白剂，而漂白剂对机体的影响取决于过氧化物摄入的数量和浓度[3]。现在大多数学者的认识趋于一致，即短期微量摄取10％或以下的过氧化氢（HP）对人体不会有损害[4]。如果HP对机体有任何损害的话，也必须是在HP和组织充分接触，机体抗氧化能力丧失，自由基能够损伤正常细胞DNA，并且DNA自我修复能力丧失的前提下才能发生[5]。到目前为止，尚无漂白剂使用后对人胃肠道造成损害的报道。因此在我们目前的实验中，给服漂白剂后观察时间为1周，取材时未发现脏器有明显改变，也符合上述研究结果。
　　体外实验和动物体内实验的根本目的是为了预测和避免材料应用于人体后可能导致的不良反应。本实验的毒性评价仅为材料安全性检测的一部分，并且动物实验资料与人群效应之间存在着一定差异，所以还应进行其它一些实验，综合分析，更客观地、切合实际地做出评价，预测人体对该材料的反应。
　　
　　[参考文献]
　　[1]中国标准出版社第一编辑室.医疗器械标准汇编口腔材料卷[M]北京：中国标准出版社，2002：67-69.
　　[2]Dahl JE,Becher R.Acute toxicity of carbamide peroxide and a commercially available tooth-bleaching agent in rats[J].J Dent Res,1995,74(2):710-714.
　　[3]Dahl JE,Pallesen U.Tooth bleaching-A critical review of the biological aspects[J].Crit Rev Oral Biol Med,2003,14(4):292-304.
　　[4]Tam L.The safety of home bleaching techniques[J].J Can Dent Assoc,1999,65(8):453-455.
　　[5]Li Y. Peroxide-containing tooth whiteners: an update on safety[J]. Compend Contin Educ Dent Suppl,2000,(28):S4-9; quiz S48.
　　
　　[收稿日期]2007-12-04[修回日期]2008-01-03
　　编辑/何志斌