怎么延缓面部衰老 [北虫草提取物延缓皮肤衰老的实验研究]

　　[摘要]目的：研究北虫草提取物对延缓D-半乳糖所致小鼠皮肤组织衰老的作用。方法：昆明种3月龄小鼠72只，雌雄各半，随机分为高剂量组、中剂量组、低剂量组、模型对照组、正常对照组和阳性对照组。各给药组、模型组和阳性组每日颈背部皮下注射D-半乳糖，连续注射42天造成亚急性衰老模型，正常组注射相同剂量生理盐水。各给药组造模的同时皮肤涂布给药，42天后取背部皮肤检测。结果：北虫草提取物能够增加衰老小鼠的含水量和SOD活力，降低皮肤中MDA含量。结论：北虫草提取物具有延缓皮肤衰老的作用。
　　[关键词]北虫草提取物；延缓；皮肤衰老；动物实验
　　[中图分类号]R332[文献标识码]A[文章编号]1008-6455（2011）04-0612-03
　　
　　Experimental study on anti-skin-aging action of Cordyceps extract
　　HUANG Guo-xin,YAN Qin-hui,ZHANG Zhong-min,LV Zai-kun,REN Wei,SU Zi-ren,ZHAO Xue-jun
　　（R&D Center of Herbal Cosmetics,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510006,Guangdong,China）
　　
　　Abstract:ObjectiveWeresearched the role to delay aging whichtake in the skin of mice duing to D-galactose about the extractive of Cordyeps militaris.Methods72 healthy Kunming mice of three months were randomly divided into 6 groups-control group, high dose group, middle dose group, low dose group, model control group,normal control group and positive control group. Daily giving subcutaneous injection of D-galactose on the nape back for 42 days to make the subacute senile mouse model at each medical group, model group and positive group,normal control group gave the same doses of normal saline water injection. At the same time,each medical group were coated for medicine on the skin,and we getted the unhairing skin on back to determination after 42 days.ResultsThe extractive ofCordyepsmilitariscan remarkably improve skin water contents and SOD activity, and decrease significantly MDA content. ConclusionThe extractive ofCordyepsmilitaris can delay skin aging.
　　Key words： extractive of Cordyeps militaris; delay ;skin aging; animal experiments
　　
　　随着人们对延缓皮肤衰老的关注，各种预防和延缓皮肤衰老的有效途径和方法不断被提出和总结。中草药因其独特机理和优良的美容效果现已被广泛应用于各类抗衰老的产品中。
　　北虫草[Cordyceps militaris(L.)Link]，又称北冬虫夏草、蛹虫草，为子囊菌亚门核菌纲球壳目麦角菌科虫草属，与冬虫夏草同属异种。《中华药海》记载：“蛹草，性味甘、平，入肺、肾二经。” 《全国中草药汇编》记载：“蛹虫草(北虫草)的子实体及蛹体也可作为冬虫夏草入药。”北虫草中含有虫草素、虫草酸、虫草多糖以及丰富的蛋白质、18种氨基酸、17种微量元素、12种维生素等营养物质，其中维生素A、B1、B2、B6、B12、C、D、E等含量高于菇类。目前，口服北虫草已被证实有良好的滋肺补肾、止血化痰、降血压、抗菌等功效，但对其采用经皮给药方式，用于评价其延缓皮肤衰老的实验研究，则少见报道[1-3]。因此，本课题对北虫草提取物延缓皮肤衰老的作用进行了研究，以期为其在抗衰老产品的开发运用提供实验依据。
　　
　　1材料和方法
　　1.1 实验材料
　　1.1.1 动物：昆明小鼠，体重（20±2）g，SPF级，由广州中医药大学实验动物中心提供，实验动物质量合格证明号0062558。
　　1.1.2 药品：北虫草提取物，由广州中医药大学新药开发研究中心提供，含量为1g/ml；维生素E由广州星群药业股份有限公司生产，批号：Ge50008；D-半乳糖由上海市晶纯试剂有限公司生产，批号：18565；生理盐水由佛山双鹤药业有限责任公司生产，批号：0909204D；考马斯亮蓝试剂盒，南京建成生物工程研究所提供，批号：20100812；超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒，南京建成生物工程研究所提供，批号：20100805；丙二醛（MDA）试剂盒，南京建成生物工程研究所提供，批号：20100804。
　　1.2 实验方法
　　1.2.1 分组：健康昆明种3月龄小鼠72只，雌雄各半，体重18～22g，随机分为北虫草提取物高剂量组、北虫草提取物中剂量组、北虫草提取物低剂量组、模型对照组、正常对照组、阳性对照组，每组12只（n=12）。
　　1.2.2 造模方法：每日颈背部皮下注射12.5%D-半乳糖1000mg/kg，连续注射42天制造亚急性衰老模型[2]，正常对照组注射相同剂量生理盐水。
　　1.2.3 给药方法：造模的同时给药；用8%硫化钠酒精溶液脱毛法背部脱毛（2cm×3cm），分别给以北虫草提取物高剂量组20g/kg，北虫草提取物中剂量组10g/kg，北虫草提取物低剂量组5g/kg，VE阳性对照组50mg/粒/只，模型对照组和正常对照组给生理盐水10ml/kg，皮肤涂布给药，连续给药42天。实验过程中，每天记录小鼠表征和活动情况。末次给药1h后颈椎脱臼处死小鼠，取1cm2左右的皮肤供测定皮肤含水量之用；再取背部皮肤约0.2g作皮肤组织匀浆，用于测定皮肤生化指标。
　　1.2.4 8%硫化钠酒精溶液的配制方法[4]：称取硫化纳8g, 加温水60ml,待全溶解后再加入体积分数为75%的酒精40ml, 制成硫化钠酒精溶液。
　　1.2.5 皮肤含水量测定方法：颈背部皮肤去毛清洁后，切取lcm2皮肤，精密称其湿重，随即将其放入烘箱中，于80℃烘干12h，称其干重，计算。皮肤含水百分率=（湿重-干重）/湿重×100%。
　　1.2.6 10%皮肤匀浆的制备方法：取脱毛背部皮肤组织0.2g左右，经预冷生理盐水漂洗，除去皮下脂肪和其它结缔组织，滤纸拭干，称重，量取该组织块9倍重量预冷生理盐水，先取2/3量倒入装有组织块烧杯中，剪碎组织块后倒入匀浆管中，将剩余l/3生理盐水冲洗烧杯壁，用内切式组织匀浆机制成10%组织匀浆(在冰水中进行) ，反复冻融3次，使细胞完全破碎，内容物全部游离在液相中。
　　1.2.7 皮肤匀浆生化指标的测定方法：参照南京建成考马斯亮蓝试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒说明书方法和MDA试剂盒说明书方法测定超氧化物歧化酶（SOD）活力和皮肤中丙二醛（MDA）的含量。
　　1.3 统计学处理：采用SPSS13.0统计软件进行统计描述，所得数据用均数±标准差表示，多个样本均数的比较采用单因素方差分析（One-Way ANOVA），当总体方差齐时选择LSD法分析；当方差不齐时选择Dunnet C法分析。
　　
　　2结果
　　2.1 皮肤含水量实验结果表明，衰老模型组皮肤含水量正常组相比，具有显著的统计学差异（P＜0.01），提示造模成功；给药高、中剂量组与模型组相比，具有统计学差异(P＜0.05)，说明北虫草提取物有保持皮肤组织水分的作用；给药高、中剂量组与正常组相比，高剂量与阳性对照组相比，均无统计学差异(P＞0.05)，提示高剂量北虫草提取物与阳性药VE效果相当，能够使衰老皮肤的水分含量恢复到正常水平。结果见表1。
　　2.2 皮肤生化指标含量测定结果(表2)
　　2.2.1 在SOD活力的测定中，衰老模型组与正常对照组相比，差异具有显著统计学意义(P＜0.01)，说明模型组皮肤组织中SOD活力显著下降，提示衰老模型造模成功。阳性组、给药高剂量组、中剂量组与正常对照组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)；且与模型对照组相比，差异具有统计学意义(P＜0.05)，说明给药高、中剂量组能提高衰老皮肤组织中SOD的活力，使其恢复至正常水平。给药高、中剂量组与阳性对照组相比,无统计学差异（P＞0.05）, 提示给药高、中剂量组与阳性药VE效果相当。
　　2.2.2 在MDA含量的测定中，衰老模型组与正常对照组相比，差异具有显著统计学意义(P＜0.01)，说明模型组皮肤组织中MDA含量显著升高，提示衰老模型造模成功。阳性组、给药高、中、低剂量组与正常对照组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）；且阳性组、给药高剂量组与模型组相比，差异具有显著统计学意义（P＜0.01）；中、低剂量组与模型组相比，差异具有统计学意义（P＜0.05），说明各给药组均能提高降低皮肤组织中MDA的活力，使其恢复至到常水平。各给药组和阳性组相比，差异有统计学意义（P＞0.05），提示给药高、中、低剂量组与阳性药VE效果相当。
　　
　　3讨论
　　皮肤组织中水分含量以及SOD活力和MDA含量是判定受试动物皮肤衰老程度的一个特殊而敏感的指标。D-半乳糖所致的小鼠皮肤亚急性衰老模型，是根据衰老代谢学说而研制的衰老模型，研究已证明D-半乳糖诱导的亚急性衰老模型是可靠的衰老实验动物模型。因此，本课题采用D-半乳糖造成小鼠皮肤亚急性衰老模型[5-6]。
　　实验结果表明，北虫草提取物能明显提高衰老小鼠皮肤中水分含量和SOD活力，降低衰老小鼠皮肤组织中MDA含量，且与公认的抗氧化剂维生素E相比，有相同的抗衰老作用。
　　中医药理论认为，“肺主皮毛”，“肾主水”；虫草具有“补肺益肾”之功。而从实验结果来看，北虫草提取物具有延缓皮肤衰老、提高皮肤含水量的作用，正反映了我国传统医药理论对于北虫草功效的正确认识，同时也在一定程度上说明了中药采用经皮给药的方式，可以起到和内服相同的结果。
　　
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　　[收稿日期]2011-01-29[修回日期]2011-03-14
　　编辑/张惠娟