HPLC法测定参芍胶囊中人参皂甙Rg1,的含量

张颜增杨婷 王先友✉

1.开封市中心医院 药剂科,河南 开封 475002;2.河南大学 药学院,河南 开封475004

参芍胶囊为中国药典收载品种[1],是由人参茎叶总皂甙和白芍提取物等制成的复方制剂,具有活血化瘀、益气止痛的作用,常用于气虚血瘀所致的胸闷、胸痛、心悸、气短等症状[2]。质量标准中,以Rg1、Re和Rd 的总量为控制指标[1],未规定单独Rg1的含量。再者,药典中规定的流动相为乙腈-水系统,价格稍贵。而以甲醇-水系统等度洗脱,则操作相对方便。查阅相关资料,参芍胶囊中Rg1含量测定的相关报道较少[3]。人参为贵重药材,为有效控制该制剂的质量,参考其他药物中Rg1含量测定的方法[4-8],本研究建立用HPLC 法测定人参皂甙Rg1的含量,并对测定方法进行了方法学考察。结果表明,使用该法测定时,其线性关系良好、精密度好、准确度较高、稳定性好,可用于人参皂甙Rg1的含量控制。

1.1 仪器

高效液相色谱仪(LC-10AT 型,日本岛津);紫外检测器(SPD-10A 型,日本岛津);色谱工作站(N-2000双通道,浙江大学智达信息有限公司);色谱柱(Hypersil-ODS,4.6 mm×150 mm,5μm,大连依利特科学仪器有限公司);电子分析天平(AG135型,瑞士梅特勒-托利多公司)。

1.2 试剂

参芍胶囊(市售,批号:070521、070608、070818);人参皂甙Rg1对照品(纯度99.34%,供含量测定用。中国药品生物制品检定所,批号:0703-9914)。

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品储备溶液的制备

精密称取人参皂甙Rg1对照品65 mg,置于25 m L容量瓶中,用适量流动相溶解;稀释至刻度,摇匀。

2.1.2 供试品溶液的制备

准确称量参芍胶囊6 粒内容物的质量。混匀后,精密称取约1 g(相当于4粒),用适量流动相浸泡过夜;超声提取30 min,冷却至室温后定量转移至10 m L 容量瓶中,用流动相稀释至刻度,静置分层;取上清液微孔滤膜滤过,即得供试品溶液。

2.2 色谱条件

流动相为甲醇-水(体积比为50∶50),流速设置为1.0 m L/min,检测波长为203 nm,柱温设为室温,进样量设为10μL。在此色谱条件下得到人参皂甙Rg1对照品溶液及供试品溶液的HPLC图(见图1)。以人参皂苷Rg1峰计算,理论塔板数大于4 000,与其他峰的分离度大于8。

图1 人参皂甙Rg1 对照品溶液(A)及供试品溶液(B)的HPLC图

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系实验

准确量取Rg1对照品储备溶液1.00,2.00,4.00,6.00,8.00,10.00 m L,置于不同的容量瓶中(10 m L),用流动相定容;滤过后测定。以进样量X和峰面积Y进行线性回归,计算出的回归方程为:Y=231 896X+44 038(r=0.999 4)。实验结果表明,人参皂甙Rg1在2.6～26μg范围内具有良好的线性关系。

2.3.2 精密度实验

取1.0 mg/m L的对照品储备溶液,在上述色谱条件下重复进样6次,记录各次的峰面积,计算出其RSD=0.86%。结果表明,该方法具有较好的精密度。

2.3.3 重复性实验

取同一批样品,按第2.1.2节方法平行制备6份溶液,在上述色谱条件下进行测定,计算得峰面积的RSD 为1.0%。结果表明,该法重复性较好。

2.3.4 加样回收率实验

准确量取(适量)Rg1含量已知的样品6份,分别置于6个10 m L 容量瓶中。均精密加入人参皂甙Rg1对照品溶液适量,按第2.1.2节方法制备溶液,在上述色谱条件下进行测定,计算得平均回收率为99.84%,RSD=0.91% (n=6)。

2.3.5 稳定性实验

将第2.1.2节制备的供试品溶液分别于0,2,4,8,12,24 h 进样测定,测得6 次峰面积的RSD=0.87%。实验结果表明,供试品在24 h内稳定性良好。

2.3.6 样品的含量测定

取3批样品,按第2.1.2节方法制备供试品溶液,每个批号均3份。在上述色谱条件和方法测定,由标准曲线法计算人参皂甙Rg1的含量。结果如下:批号为0705的样品中人参皂甙Rg1的含量为(212.770±0.021)mg/粒,批号为0706的样品中人参皂甙Rg1的含量为(082.903±0.010)mg/粒,批号为0708 的样品中人参皂甙Rg1的含量为(182.883±0.013))mg/粒。

郭石等[4-5]用HPLC 法测定人参北芪片、保心宁片中人参皂甙Rg1含量时,其紫外光区的最大吸收峰在203 nm 处,本实验也选203 nm 为检测波长。中药复方制剂分析的关键之一是样品的前处理,其目的是完全提取待测成分,尽量减少其他组分的干扰[9]。人参皂甙Rg1可溶于醇,多次实验结果证实,采用流动相超声提取效果较理想。