Ki-67对晚期卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后复发转移的预测价值

韦奇秀，杨静梅，田永华，黄林娜

卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤，发病率仅次于乳腺癌、宫颈癌排名第三，并且全球卵巢癌发病率呈现逐年增加和年轻化趋势。由于缺乏有效的早期诊断和治疗方法，大多数卵巢癌患者确诊时已处于晚期，治疗效果差，5年生存率低[1]，相关文献报道，Ⅲ期卵巢癌患者5年总生存率低于45%，而Ⅳ期卵巢癌患者5年总生存率则低于15%[2]。目前肿瘤细胞减灭术是治疗晚期卵巢癌最有效的手段，主要目的是尽最大努力切除原发灶和转移灶，使残余病灶直径<2 cm，并且术后给予正规、足量的化疗,以达到满意的临床疗效。但即使实施满意的肿瘤细胞减灭术和正规有效的化疗，最终仍有很多卵巢癌患者会出现术后复发转移，肿瘤恶性程度高、侵袭转移能力强和化疗耐药是导致其术后5年复发转移率高和总生存率低的重要原因[3-4]。因此临床寻找用于预测晚期卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后复发转移的有效指标，对于指导术后治疗和降低复发转移率具有十分重要的意义。Ki-67是与恶性肿瘤细胞增殖相关的核抗原，高表达反映恶性肿瘤细胞增殖活性强和预后不佳。相关研究发现，Ki-67在卵巢癌中高表达，且其水平与淋巴结转移和临床分期密切相关[5]。本研究旨在探讨Ki-67对晚期卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后复发转移的预测价值，现报告如下。

1.1研究对象 纳入2016年1月—2017年1月在我院接受肿瘤细胞减灭术的109例晚期卵巢癌作为研究对象。纳入标准：经术后病理检查明确诊断为卵巢癌；
在我院首次诊断，并接受肿瘤细胞减灭术；
经术前影像学检查和术后病理学检查综合评估临床分期为Ⅲ～Ⅳ期。排除标准：伴有远处脏器转移者；
术前接受放化疗者；
患严重心肺肝肾疾病无法耐受手术治疗者。

1.2研究方法 病理标本采用免疫组织化学染色法检测。石蜡块标本连续切片，切片经多聚赖氨酸抗原修复，脱蜡，脱二甲苯，过氧化酶阻断溶液室温孵育，磷酸盐缓冲液浸泡冲洗，然后置于枸橼酸盐缓冲液中修复。10%山羊血清封闭，室温孵育，滴加Ki-67单抗(美国Santa Cruz公司)4 ℃过夜。滴加生物素标记二抗，再滴加辣根过氧化物酶标记链霉卵白素。DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片。检测系统MaxVisionTM2及DAB购于福州迈新公司。细胞核中出现黄色沉淀记为Ki-67阳性表达细胞，40倍镜下计数10个视野，Ki-67阳性细胞占细胞总数的百分数≥30%认为是Ki-67阳性表达。

收集患者年龄、体质量指数、病理分型、CA125、临床分期、淋巴结转移、腹膜转移、脉管浸润、分化程度及肿瘤大小等临床病理资料。所有患者术后随访5年，随访终点为肿瘤复发转移，记录患者无病生存期，无病生存期指从手术日起至随访5年内肿瘤复发转移的时间。

2.1Ki-67阳性表达情况 109例根据术后免疫组织化学染色结果，分为Ki-67阳性组57例(52.3%)和Ki-67阴性组52例(47.7%)。

2.2临床病理资料比较 2组癌抗原125(CA125)、临床分期、淋巴结转移、腹膜转移、脉管浸润、分化程度及肿瘤大小比较差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01)，见表1。

表1 晚期卵巢癌患者Ki-67表达与临床病理特征的关系

2.3影响晚期卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后复发转移的单因素Cox回归分析 以卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后复发转移为因变量，以临床病理指标为自变量，具体赋值：年龄，实际值；
体质量指数，实际值；
CA125，实际值；
病理分型，浆液性癌=1,黏液性癌=2,透明细胞癌=3,其他=4；
临床分期：Ⅲ期=0,Ⅳ期=1；
淋巴结转移，否=0,是=1；
腹膜转移，否=0,是=1；
脉管浸润，否=0,是=1；
分化程度，高中分化=0,低未分化=1；
肿瘤大小，实际值；
Ki-67表达，阴性=0,阳性=1。单因素Cox回归分析结果显示：CA125、临床分期、腹膜转移、脉管浸润、分化程度及Ki-67表达与晚期卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后复发转移存在一定相关性(P<0.05，P<0.01)。见表2。

表2 影响晚期卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后复发转移的单因素Cox回归分析

2.4影响晚期卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后复发转移的多因素Cox回归分析 以患者术后复发转移为因变量，纳入单因素分析中有统计学意义的自变量行多因素Cox回归分析，结果显示：CA125、临床分期、腹膜转移及Ki-67表达为晚期卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后复发转移的独立危险因素(P<0.05，P<0.01)，其中Ki-67阳性表达患者肿瘤细胞减灭术后复发转移的风险是Ki-67阴性表达患者的3.896倍。见表3。

表3 影响晚期卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后复发转移的多因素Cox回归分析

2.5Ki-67阳性和阴性组患者术后无病生存率比较 109例晚期卵巢癌术后1、3、5年无病生存率分别为62.3%、26.7%、17.5%；
Ki-67阴性组术后1、3、5年无病生存率明显高于Ki-67阳性组(84.3%、37.5%、37.5% vs 54.5%、22.3%、12.3%，P<0.01)。见图1。

图1 Ki-67阳性和阴性表达的晚期卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后5年无病生存率比较

2.6预测晚期卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后复发转移的决策曲线 以CA125、临床分期、腹膜转移及Ki-67表达预测晚期卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后复发转移的净获益为纵坐标，高风险阈值为横坐标，对4个独立预测指标进行决策曲线分析，结果显示：在大多数合理阈值范围内，4个独立预测指标预测晚期卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后复发转移均具有良好的净获益，并且联合预测的总体净获益高于单一指标预测，见图2。

图2 预测晚期卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后复发转移的决策曲线

卵巢癌发病隐匿，多数患者确诊时病情已发展至晚期，对于晚期卵巢癌患者给予肿瘤细胞减灭术联合术后化疗，可以有效抑制病情进展，甚至可以使肿瘤完全消失，但是仍有很多患者会出现术后复发转移[6-9]，因此对于晚期卵巢癌患者在实施肿瘤细胞减灭术联合术后化疗后，还应寻找准确有效的预后评估指标，用于指导术后治疗，加强术后监测及早期发现复发征象，这是整个治疗过程中极为重要的一环[10-12]。

Ki-67是一种与细胞增殖相关的核抗原，是反映恶性肿瘤细胞增殖活性和侵袭转移能力的重要分子标志物，与恶性肿瘤增殖、分化、侵袭转移及预后关系密切[13-15]。刘雪芬等[16]研究发现，Ki-67在上皮性卵巢癌中高表达，并且与卵巢癌增殖活性、淋巴结转移及腹膜转移密切相关，Ki-67增殖指数可作为卵巢癌术后淋巴结转移和腹膜转移发生可能性的预测分子。相关文献证实，Ki-67阳性的乳腺癌患者临床分期明显高于Ki-67阴性患者，其术后复发转移率也明显高于Ki-67阴性患者[17-19]。而本研究也发现，晚期卵巢癌患者Ki-67表达状态与患者血清CA125水平、临床分期、腹膜转移、脉管浸润、分化程度及肿瘤大小存在一定相关性，提示Ki-67阳性表达的晚期卵巢癌患者本身具有较高的恶性程度和增殖活性，其术后复发转移风险大，预后不佳，这也正好可以解释我们多因素Cox回归分析结果：CA125、临床分期、腹膜转移及Ki-67表达为晚期卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后复发转移的独立危险因素，其中Ki-67阳性表达患者肿瘤细胞减灭术后复发转移的风险是Ki-67阴性表达患者的3.896倍。

此外，本研究生存曲线和决策曲线均提示，4个独立预测指标用于预测晚期卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后复发转移均具有良好的净获益和临床价值，并且4个指标的联合预测价值最高。提示Ki-67和CA125表达水平及临床分期和腹膜转移情况的评估有助于晚期卵巢癌术后复发转移风险的早期预测，同时可能对指导卵巢癌预后的判断甚至术后治疗和随访起到非常重要的作用。