血清ACTA、LXA4、Tau蛋白在HIE患儿预后评估中的价值

赵 倩， 胡红霞

（郑州大学第一附属医院检验科 河南省检验医学重点实验室，河南 郑州 450000）

缺氧缺血性脑病（hypoxic-ischemic encephalopathy，HIE）是由各种围生期因素引起的脑缺氧或缺血导致的脑损伤，可导致脑瘫、癫痫等严重后遗症，因此早期评估HIE患儿病情，对积极开展针对性治疗，改善患儿预后有重要作用[1]。有研究结果显示，激活素A（activin A，ACTA）具有抗炎活性和保护神经的作用，参与了组织损伤和炎症损伤的修复，在缺氧、缺血后的血管损伤中发挥了一定的调节作用[2]。脂氧素A4（AT-lipoxin A4，LXA4）被证实具有促炎症消退、保护脑神经的作用，参与了HIE的发生、发展[3]。Tau蛋白是一种微管相关蛋白，能加速HIE患儿神经细胞凋亡，是反映神经系统的损伤严重程度和判定预后的指标之一[4]。本研究拟探究HIE患儿血清ACTA、LXA4、Tau蛋白与新生儿神经行为测定（neonatal behavioral neurological assessment，NBNA）评分、炎症反应的关系，并分析各指标预测HIE患儿死亡风险的价值。

1.1 研究对象

选取2017年1月—2020年6月郑州大学第一附属医院新生儿科HIE患儿145例，其中男83例、女62例，胎龄（38.10±1.05）周，日龄（3.55±0.26）d。根据住院治疗的预后情况分组，其中118例患儿好转出院，纳入存活组；
27例患儿死亡，纳入死亡组。本研究经郑州大学第一附属医院伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：（1）符合HIE诊断标准[5]；
（2）自然受孕；
（3）单胎妊娠；
（4）患儿家属知晓本研究，并签署同意书。

排除标准：（1）先天性心脏病患儿；
（2）极低体质量儿或巨大儿；
（3）先天性神经系统发育畸形、脑膜炎患儿；
（4）非窒息及产伤引起的头颅血肿患儿；
（5）感染性疾病患儿；
（6）血液系统疾病患儿。

1.3 方法

1.3.1 临床资料 收集所有HIE患儿的临床资料，包括性别、日龄、胎龄、出生体质量、分娩方式、体温、心率、病情严重程度、脏器损伤数量、开始治疗日龄、NBNA评分等。

1.3.2 血清指标检测 采集所有患儿治疗前外周静脉血3 mL，离心分离血清。采用酶联免疫吸附试验测定血清ACTA、LXA4、Tau蛋白及白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha，TNF-α）、高迁移率族蛋白B1（high mobility group protein box 1，HMGB1）水平。ACTA、LXA4试剂盒均购自美国R&D公司，Tau蛋白试剂盒购自上海蓝基生物科技有限公司，IL-6、TNF-α、HMGB1试剂盒购自北京百奥莱博科技有限公司。严格按试剂盒说明书进行操作。

1.3.3 NBNA评分的评定方法[6]新生儿喂养1 h后，于安静、幽暗、温暖环境下进行NBNA评分，共20个项目，包括原始反射（3项）、行为能力（6项）、一般状态（3项）、主动和被动肌张力（8项），每项0～2分，总分0～40分，得分越高表示神经行为能力越好。

1.3.4 病情严重程度的评估方法[7]根据患儿神经症状的动态观察结果评估HIE病情严重程度。（1）轻度：患儿兴奋抑制交替，肌张力正常或稍高，有/无肌阵挛，瞳孔正常/扩大，原始反应正常、无中枢性呼吸衰竭，脑电图正常。（2）中度：患儿嗜睡，肌张力及原始反射减弱，常有惊厥，有中枢性呼吸衰竭，瞳孔缩小，脑电图表现为低电压。（3）重度：患儿昏迷，肌张力表现为松软或间歇性伸肌张力增强，原始反射消失，伴有惊厥和明显中枢性呼吸衰竭，瞳孔不对称或扩大、对光反射迟钝，脑电图呈现暴发抑制等异常。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0软件进行统计分析。呈正态分布的计量资料以±s表示，2个组之间比较采用独立样本t检验。计数资料以例或率表示，组间比较采用χ2检验，等级资料比较采用Ridit检验。采用Pearson相关分析评估各项指标之间的相关性。采用Logistic回归分析评估血清ACTA、LXA4、Tau蛋白与死亡的关系。采用Logistic回归分析对各项指标进行综合回归分析，依据回归系数β，归一化加权计算并建立各项指标的联合检测模型，采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线评估各项指标单项检测和联合检测判断HIE预后的效能。以P<0.05为差异有统计学意义。

2.1 HIE患儿临床资料

存活组与死亡组之间脏器损伤数量、开始治疗日龄、NBNA评分、病情严重程度差异均有统计学意义（P<0.05），其他临床资料2个组之间差异均无统计学意义（P>0.05）。见表1。

表1 存活组与死亡组临床资料比较

2.2 存活组与死亡组血清ACTA、LXA4、Tau蛋白、炎症反应指标水平比较

死亡组血清ACTA、Tau蛋白、IL-6、TNF-α、HMGB1水平均高于存活组（P<0.05），血清LXA4水平低于存活组（P<0.05）。见表2。

表2 存活组与死亡组各项指标比较

2.3 ACTA、LXA4、Tau蛋白与NBNA评分的相关性

Pearson相关分析结果显示，ACTA、Tau蛋白与NBNA评分呈负相关（r值分别为-0.630、-0.748，P<0.05），LXA4与NBNA评分呈正相关（r=0.626，P<0.05）。

2.4 ACTA、LXA4、Tau蛋白与IL-6、TNF-α、HMGB1的相关性

Pearson相关性分析结果显示，ACTA与IL-6、TNF-α、HMGB1均呈正相关（r值分别为0.577、0.599、0.504，P<0.05），Tau蛋白与IL-6、TNF-α、HMGB1均呈正相关（r值分别为0.653、0.738、0.656，P<0.05），LXA4与IL-6、TNF-α、HMGB1均呈负相关（r值分别为-0.611、-0.628、-0.627，P<0.05）。

2.5 血清ACTA、LXA4、Tau蛋白水平与HIE患儿死亡的关系

Logistic回归分析结果显示，调整脏器损伤数量、开始治疗日龄、病情严重程度、NBNA评分、炎症反应指标等混杂因素后，血清ACTA、LXA4、Tau蛋白均是HIE患儿死亡的影响因素[比值比（odds ratio，OR）值分别为6.133、0.547、8.260，95%可信区间（c o n f i d e n c e i n t e r v a l，C I）分别为4.126～9.115、0.347～0.862、4.803～14.206]。见表3。

表3 血清ACTA、LXA4、Tau蛋白与HIE患儿死亡的关系

2.6 ACTA、LXA4、Tau蛋白判断HIE患儿死亡的效能

血清ACTA、LXA4、Tau蛋白联合检测模型为：Logit（P）=-4.325+1.814×ACTA-0.603×LXA4+2.111×Tau蛋白。ROC曲线分析结果显示，血清ACTA、LXA4和Tau蛋白单项检测和联合检测模型判断HIE患儿死亡的曲线下面积（area under curve，AUC）分别为0.774、0.778、0.840和0.871。见表4、图1。

表4 血清ACTA、LXA4、Tau蛋白对HIE患儿死亡的预测价值

图1 血清ACTA、LXA4、Tau蛋白单项检测及联合检测模型判断HIE患儿死亡的ROC曲线

HIE的发生、发展涉及脑血流动力学变化、炎症反应、神经元凋亡等多种因素，多种细胞因子参与其进展过程。本研究结果显示，HIE死亡患儿治疗前血清ACTA、Tau蛋白水平高于存活患儿（P<0.05），提示血清ACTA、Tau蛋白水平可能与HIE患儿疾病进展有关。ACTA是一种糖蛋白激素，属于转化生长因子β超家族成员，其受体在新生儿及早产儿脑组织中广泛存在，在组织损伤及炎症修复中发挥重要作用[8]。LU等[9]的研究结果显示，ACTA在炎性反应启动阶段具有关键性作用，其水平升高可促进其他炎性递质增加，从而影响早产儿神经系统的发育及损伤修复。Tau蛋白是维持微管稳定性的重要蛋白，主要在神经元的轴突部位延续微管的延长[10]。在伴HIE的早产儿急性期，血清Tau蛋白水平与脑组织损伤程度呈正相关，因此Tau蛋白可用于评估患儿疾病严重程度及神经发育情况[11]。由此可见，HIE患儿存在脑部缺血缺氧，引发细胞膜损伤，导致细胞膜通透性增强，ACTA、Tau蛋白穿过血脑屏障后被释放至血液中，引起血清ACTA、Tau蛋白水平升高。本研究Pearson相关分析结果显示，血清ACTA、Tau蛋白与HIE患儿NBNA评分呈负相关（P<0.05），与血清IL-6、TNF-α、HMGB1均呈正相关（P<0.05）。NBNA评分是临床评估新生儿神经行为能力的常用指标，其分值与新生儿神经行为能力呈正相关[12]。IL-6、TNF-α、HMGB1均是与HIE发生、发展密切相关的炎症因子，其中IL-6、TNF-α可启动或扩大炎症反应，促进缺血缺氧导致的神经损伤，HMGB1通过招募相关炎症因子启动机体免疫炎症反应，加重HIE患儿神经损伤[13]。由此可见，血清ACTA、Tau蛋白水平升高可在一定程度上反映HIE患儿神经损伤及炎症反应的程度，有助于了解患儿病情。本研究结果还显示，HIE死亡患儿治疗前血清LXA4水平低于存活患儿，且血清LXA4与NBNA评分呈正相关（P<0.05），与IL-6、TNF-α、HMGB1呈负相关（P<0.05），提示血清LXA4也可能与HIE的发生、发展有关。LXA4是一类含有三羟四烯的花生四烯酸产物，可通过反调节机制抑制中性粒细胞、嗜酸性粒细胞等的活化，从而抑制炎症反应，同时还能促进巨噬细胞对凋亡中性粒细胞的吞噬作用，发挥促进炎症消退的作用[14]。HIE患儿体内存在炎症反应，LXA4可通过上述作用机制抑制炎症反应，随着炎症反应的加重，LXA4的消耗量逐渐增多，导致血清LXA4水平降低。

本研究Logistic回归分析结果显示，调整脏器损伤数量、开始治疗日龄、病情严重程度、NBNA评分、炎症反应指标等混杂因素后，ACTA、LXA4、Tau蛋白是HIE患儿死亡的影响因素（OR值分别为6.133、0.547、8.260，95%CI分别为4.126～9.115、0.347～0.862、4.803～14.206）。提示ACTA和Tau蛋白水平越高、LXA4水平越低，HIE患儿的炎症反应越剧烈，对神经细胞、组织细胞的损伤越大，死亡风险越高。ROC曲线分析结果显示，ACTA、LXA4和Tau蛋白单项检测和联合检测模型判断HIE患儿死亡的AUC分别为0.774、0.778、0.840和0.871。提示血清ACTA、LXA4、Tau蛋白或可用于预测患儿预后。

综上所述，HIE患儿血清ACTA、LXA4、Tau蛋白与NBNA评分及炎症反应密切相关，在患儿预后评估中也有一定的作用。但本研究未设置健康对照，研究结果可能存在一定的偏差，因此结论尚需大样本量的临床研究进一步验证。