猪脾转移因子对猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（CH-1R株）免疫抗体的影响

陈上永 福建省寿宁县农业农村局 福建 寿宁 355500

转移因子（Transfer Factor，TF）是由T淋巴细胞释放的可透析小分子物质（分子量≤10 kD），是一种细胞因子，能够转移致敏信息，具有特异性和非特异性免疫功能，已用于人类医学中对免疫抑制疾病和无法治疗疾病的标准疗法[1-2]，于1979年引入到动物免疫和兽医临床治疗中，可提高动物的免疫功能，具有较大的应用价值和研究意义[3-7]。

本研究旨在明确TF对猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）活疫苗（CH-1R株）免疫抗体的影响，用具有自主知识产权的中国发明专利以猪脾脏为原料制备3批猪脾TF[8-11]，通过ELISA方法检测PRRS活疫苗（CH-1R株）单独免疫或与TF联合免疫后猪PRRS免疫抗体水平的变化情况，以明确本发明专利所制备的TF对PRRS活疫苗免疫效果的影响，为TF的临床应用和PRRS防控提供参考。

1.1 试验动物3～4周龄PRRS抗体阴性的健康杜长大仔猪，由福建某猪场提供。

1.2 TF制备 由福建农业职业技术学院动物疫病研究室制备3批猪脾TF，具体如下：按照具有自主知识产权发明专利方法[8-11]，选取经外观检查、外源病毒检验、原辅材料检查等均合格的猪脾脏，通过捣碎冻融、灭活、切向流过滤、滤膜除菌后制成3批猪脾TF，分别为：TF-1、TF-2、TF-3。经检验，所制备3批TF的多肽含量（2.85 mg/mL、2.78 mg/mL和2.98 mg/mL）、脱E受体法效力（15.8%、16.1%和17.3%）、核 糖 含 量 （62.2 μg/mL、59.5 μg/mL和58.8 μg/mL）、细菌内毒素含量（≤10 EU/mL）、pH值（6.91、6.95和6.94）、鉴别检验、外源病毒检验、支原体检验、安全检验等各项质量标准检验均合格。

1.3 试剂PRRS抗体检测ELISA试剂盒，购自美国IDEXX公司；
PRRS活疫苗（CH-1R株），购自国内某生物制品企业。

1.4 仪器 酶标仪为美国Thermo公司产品，型号Multiskan MK3。

1.5 试验分组与设计 选取50头PRRS抗体阴性的健康杜长大仔猪，随机分成5组，每组10头，分别为联合免疫组1、联合免疫组2、联合免疫组3、单独免疫组和空白组。其中，联合免疫组1、联合免疫组2、联合免疫组3分别采用TF-1、TF-2、TF-3稀释PRRS活疫苗（CH-1R株），进行颈部肌肉注射（联合免疫）；
单独免疫组采用生理盐水稀释PRRS活疫苗（CH-1R株），进行颈部肌肉注射（单独免疫），设立空白组（仅注射生理盐水），见表1。分别于免疫前3 d及免疫后第7 d、14 d、28 d、42 d和56 d采血，分离血清，采用ELISA方法测定PRRS免疫抗体水平。

表1 试验分组与设计

1.6 PRRS免疫抗体测定 按照ELISA方法进行PRRS抗体测定，操作按PRRS抗体检测ELISA试剂盒说明书进行，记录各组猪血清样本和ELISA试验对照的OD650nm，计算样本 （Sample）/阳性对照（Positive control）比率（S/P）。若S/P＜0.4，则PRRS抗体阴性；
若S/P≥0.4，则PRRS抗体阳性。

结果显示（见表2），免疫后第7 d的PRRS抗体阳性率，联合免疫组1、联合免疫组2及联合免疫组3（50%、60%及50%）高于单独免疫组（30%）。免疫后第14 d的PRRS抗体阳性率，联合免疫组1、联合免疫组2及联合免疫组3（90%、70%及80%）高于单独免疫组（50%）。免疫后第28 d的PRRS抗体阳性率，联合免疫组1、联合免疫组2及联合免疫组3（100%、100%及100%）高于单独免疫组（80%）。免疫后第42 d的PRRS抗体阳性率，联合免疫组1、联合免疫组2及联合免疫组3（100%、100%及100%）高于单独免疫组（70%）。免疫后第56 d的PRRS抗体阳性率，联合免疫组1、联合免疫组2及联合免疫组3（100%、100%及100%）高于单独免疫组（60%）。本试验中，空白组的PRRS抗体阳性率始终为0%。结果表明，联合免疫组的PRRS抗体阳性率比单独免疫组高20%～40%。

表2 免疫前后不同时间PRRS抗体水平

全球于1987年在美国首次发生PRRS。我国于1996年在北京地区首次暴发PRRS，并迅速传播至我国各省（自治区）猪群，导致我国畜牧业损失巨大，严重危害我国养猪业健康发展[12]。PRRS疫苗佐剂的研发是PRRS防控研究的热点，已有研究显示[13-15]，短肽佐剂对PRRS活疫苗（CH-1R株）的免疫保护力具有较好的增强作用，可将106.0TCID50PRRS活疫苗（CH-1R株）对3×105.0TCID50高致病性PRRS TJ-F5株的攻毒保护率提高40%。TF就是一种重要的短肽佐剂，是主要由多肽和核糖组成的分子量小于10 kD的小分子多肽混合物，具有较好的免疫增强作用[15-26]。本研究结果显示，TF可将PRRS活疫苗（CH-1R株）免疫猪的PRRS抗体阳性率提高20%～40%。表明TF可以提高PRRS活疫苗（CH-1R株）的免疫抗体水平。

致 谢感谢福建农业职业技术学院与派生特（福州）生物科技有限公司共建福建省动物保健与食品安全应用技术协同创新中心的余勋信教授、徐磊博士、刘毅发兽医师、钟云钦兽医师、蒋铃兽医师和谢杼絰兽医师对试验的指导和帮助。