15%调环酸钙·烯效唑悬浮剂高效液相色谱分析

范 娅，王鹏思，牛洺鑫，宋霜雨，张宇铸，张继伟，冯文英，张 博

(中化化工科学技术研究总院有限公司，北京 100083)

调环酸钙(prohexadione calcium)和烯效唑(uniconazole)作为植物生长调节剂，可以抑制植物营养生长，促进植物光合作用，显著提高作物产量[1]。调环酸钙的分析方法主要采用高效液相色谱法，郑先福、李岩等分别报道了调环酸钙原药和5%调环酸钙泡腾片剂法分析方法[2-3]。烯效唑的分析方法比较 常见的有液相色谱法和气相色谱法，丁明伟等对2种方法进行了对比[4]。调环酸钙在水中的溶解度为174 mg/L (20 ℃)，微溶于其他有机溶剂，而烯效唑在水中的溶解度为8.41 mg/L (25 ℃)，甲醇中溶解度为88 g/kg (25 ℃)，溶于丙酮、乙酸乙酯等多种有机溶剂[5]。基于两者的理化性质差异，为了让2者都充分溶解且有响应，调环酸钙和烯效唑的复配制剂多数采用逐项检测各个有效成分含量的方法，其检测效率较低。有关2种活性组分一次性分离检测方法尚未见报道。基于此，本文采用高效液相色谱法开展了同时分离检测15%调环酸钙·烯效唑悬浮剂中有效成分的方法研究，以期为调环酸钙和烯效唑复配农药产品质量控制提供技术支撑。

1.1 试剂

调环酸钙标样(质量分数94.5%，山东中科睿谱技术有限公司)；
烯效唑标样(质量分数99.3%，上海市农药研究所)；
15%调环酸钙·烯效唑悬浮剂(中化化工科学技术研究总院有限公司)；
蒸馏水(广州屈臣氏食品饮料有限公司)；
甲醇，色谱纯(赛默飞世尔科技有限公司)；
磷酸，分析纯(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；
溶液A为甲醇-0.3%磷酸水溶液(60∶40，体积比)。

1.2 仪器

LC-20型高效液相色谱仪配有DAD检测器(日本岛津公司)；
微孔滤膜(孔径约0.45 μm)(天津市津腾实验设备有限公司)；
电子天平(ME204E/02、MS-105) (梅特勒托利多科技有限公司)；
VGT-1730QT型小型超声波清洗器(广东固特超声股份有限公司)。

1.3 色谱操作条件

色谱柱为Inert Sustain AQ-C18色谱柱(4.6 mm× 150 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0.3%磷酸溶液，采用梯度洗脱程序：甲醇-0.3%磷酸溶液(55∶45，体积比)保持8.0 min，8.1～18.0 min 甲醇-0.3%磷酸溶液(80∶20，体积比)，18.1～26 min甲醇-0.3%磷酸溶液(55∶45，体积比)。柱温：30 ℃；
流速：1.0 mL/min；
检测波长：260 nm；
进样体积：5.0 μL。在上述色谱条件下，调环酸钙和烯效唑的保留时间分别约为5.1、15.9 min。混合标样及样品的典型高效液相色谱图见图1和图2。

1.4 测定步骤

1.4.1 标样溶液的配制

在同一100 mL容量瓶中，加入0.05 g调环酸钙标样和0.10 g烯效唑标样(均精确至0.000 1 g)，用溶液A溶解，超声，冷却后定容，摇匀，过滤，备用。

1.4.2 试样溶液的配制

在100 mL容量瓶中称取约1.0 g (精确至0.000 1 g)试样，用溶液A稀释至刻度，在超声波中超声振荡5 min，取出，恢复至室温，过滤，备用。

1.4.3 测定

在1.3节色谱条件下，待仪器稳定后，连续进数针标样溶液并计算，直至相邻2针调环酸钙(或烯效唑)的峰面积相对变化小于1.5%后，方可进样，进样顺序按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液进行。

1.4.4 计算

将2针试样溶液中调环酸钙(或烯效唑)峰面积以及其前后2针标样溶液中调环酸钙(或烯效唑)峰面积分别计算平均值。试样中调环酸钙(或烯效唑)的质量分数ω1(%)按下式计算：

式中：A2为试样溶液中调环酸钙(或烯效唑)面积的平均值；
m1为调环酸钙(或烯效唑)标样的质量，g；
ω为标样中调环酸钙(或烯效唑)的含量，%；
A1为标样溶液中调环酸钙(或烯效唑)峰面积的平均值；
m2为试样的质量，g。

2.1 检测波长的选择

采用岛津LC-20自带的DAD检测器，在190～ 400 nm的波长范围内进行紫外扫描，得到调环酸钙和烯效唑的紫外吸收光谱图(图3)。考虑溶剂和杂质的干扰，检测波长选定为260 nm。

2.2 样品溶剂的选择

调环酸钙易溶于水，微溶于有机溶剂；
而烯效唑则相反。依据两者理化性质，样品在配制过程中溶剂使用甲醇和磷酸水的混合溶液。经过多次调整甲醇和磷酸水溶液的配比，选定溶剂为甲醇∶0.3%磷酸水溶液=60∶40 (体积比)。

2.3 流动相的选择

采用Inert Sustain AQ-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)进行分析。依据调环酸钙和烯效唑的理化性质，采用甲醇-0.3%磷酸水体系和乙腈-0.3%磷酸水体系作为流动相。在等度洗脱条件下，筛选不同配比的流动相进行试验，当流动相中有机相比例低时，采集时间过长；
而有机相比例高时，样品中目标峰又无法与杂质峰分离，因此采用梯度洗脱程序。而甲醇成本相对较低，故选择甲醇-0.3%磷酸水体系作为流动相。经多次调整比例及采集时间，选择1.3节所示梯度洗脱程序，流速为1.0 mL/min。此条件下，调环酸钙和烯效唑均能较好分离，基线平稳，峰形尖锐且对称，保留时间适当。

2.4 方法的线性相关性测定

在1.3节色谱条件下，按1.4.1节中方法配制多个不同质量浓度的标样溶液进行测定，以调环酸钙(烯效唑)浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图(图4、图5)，分别得到调环酸钙和烯效唑线性回归方程：调环酸钙，y=8 741.7x+ 18 709，相关系数R2为0.999 7；
烯效唑，y=13 273x+ 433 292，相关系数R2为0.999 1，说明两者线性关系均较为良好。

2.5 方法的精密度测定

在1.3节色谱条件下，从同一个15%调环酸钙·烯效唑悬浮剂试样中称取5个平行试样，进行分析测试，计算调环酸钙和烯效唑的标准偏差和变异系数，试验结果见表1。可见，调环酸钙的标准偏差为0.013%、变异系数为0.25%，烯效唑的标准偏差为0.011%、变异系数为0.11%，说明该方法的精密度高，重现性良好，可满足该复配产品的分析要求。

表1 15%调环酸钙·烯效唑悬浮剂的精密度试验

2.6 方法的准确度测定

将除原药以外的所有助剂和填料等混和均匀，并严格按配方的比例要求，制作制剂空白。在制剂空白中加入与制剂标称值相同量的有效成分，制得5个新的制剂样品[6]。在上述色谱条件下，测定试样中调环酸钙和烯效唑的质量，回收率结果见表2。可见，调环酸钙和烯效唑的平均回收率分别为100.33%和100.25%。

表2 15%调环酸钙·烯效唑悬浮剂的准确度试验

采用反相高效液相色谱法建立了同时测定15%调环酸钙·烯效唑悬浮剂中有效成分的定性定量方法。该方法可使调环酸钙和烯效唑2种有效成分得到有效分离，且线性关系良好，表现出较高的精密度和准确度，适于对调环酸钙与烯效唑复配制剂产品质量的定性定量分析。