M-CSF与TNF-α在子痫前期患者胎盘中的表达及意义分析

马德红，王春春

(上海市长宁区妇幼保健院妇产科，上海 201700)

子痫前期(preeclampsia，PE)是女性疾病中较为严重的类型，属于妊娠期高血压疾病，是导致孕产妇和围生儿死亡的主要原因之一，且该疾病的发病机制尚不明确[1]。Armaly等[2]研究显示，全球妊娠女性中，PE占2%～8%，统计结果为每年近6万孕产妇因PE死亡。PE的发病机制一直是临床产科研究的重点和难点问题，尚未有研究完全阐明[3]。但有关研究已明确了一些潜在原因，这些原因包括全身炎症反应、内皮细胞、血管功能障碍等[4]。肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor-α，TNF-α)已被临床广泛作为各种研究的炎症因子，在诸多疾病中都呈现过度表达[5]。巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulatory factor，M-CSF)作为炎症刺激物，可刺激其靶细胞释放TNF-α等炎性细胞因子，当孕妇的血液循环中进入这些因子，则可使患者出现炎症过度反应，从而导致患者出现功能障碍和内皮细胞损害，即为胎盘缺血和缺氧[6-7]。这也体现了PE的发生及发展过程中可能有M-CSF和TNF-α的参与。故本文旨在探讨M-CSF与TNF-α在PE患者胎盘中的表达及意义分析。

1.1 一般资料

收集上海市长宁区妇幼保健院妇产科2019年8月到2021年8的子痫前期患者50例为实验组[分为早发型PE组(n=23)和晚发型PE组(n=27)]和31例正常孕妇为正常妊娠组。其中早发型PE组平均年龄(30.33±4.52)岁，平均胎龄(31.05±4.53)周；
晚发型PE组平均年龄(29.33±3.89)岁，平均胎龄(30.79±4.33)；
正常妊娠组平均年龄(28.12±3.48)岁，平均胎龄(29.22±3.68)周，3组产妇的胎龄和年龄均具可比性(P>0.05)。

纳入标准[8]：①临床资料完整者；
②无多胎妊娠者；
③产妇羊水过多、胎儿畸形者；
④无糖尿病、高血压、心血管疾病等者；
排除标准：①合并其他妊娠并发症、自身免疫系统疾病及凝血功能障碍者；
②合并恶性心律失常者。本次研究经伦理委员会批准同意且研究对象知情并签署同意书,伦理编号：2019-0811。

1.2 观察指标

①血液中M-CSF与TNF-α 的检测：于即将分娩前抽取研究对象空腹静脉血5 mL，分别注入干燥试管中待检。采用ELISA法进行检查，严格按照试剂盒(M-CSF购于北京博奥森科技有限公司，TNF-α 购于美国Protein公司)说明进行样品处理及评定。

②评定M-CSF与TNF-α 表达结果：选择免疫组化SP法检测，在显微镜进行，根据染色强度和染色细胞所占面积积分之和进行评定，0分为不染色；
1分为轻度染色，染色程度高于北京色；
2分为中度染色，色彩多为棕黄色颗粒；
3分为重度染色，色彩大多为深棕黄色颗粒且着色均匀。阳性细胞根据所占百分比评估，0分无阳性细胞；
1分<25%；
2分25%～50%；
3分>50%。阴性为0～1分；
阳性为>1分。

1.3 统计学分析

2.1 不同组别M-CSF与TNF-α的平均灰度值对比

早发型PE组和晚发型PE组的M-CSF平均灰度值均高于正常妊娠组(均P<0.05)，且早发型PE组高于晚发型PE组(P<0.05)；
早发型PE组和晚发型PE组的TNF-a平均灰度值均低于正常妊娠组(均P<0.05)，且晚发型PE组低于早发型PE组(P<0.05)。见表1。

表1 不同组别M-CSF与TNF-α 的平均灰度值对比

2.2 各组胎盘组织中M-CSF的免疫组化染色情况

M-CSF主要表达于绒毛滋养细胞的胞浆及血管内皮细胞；
当绒毛膜滋养细胞及U型二管细胞呈现棕黄色或棕褐色，则评定为阳性表达，典型图例见图1。

注：A：正常妊娠组；
B：晚发型PE组；
C：早发型PE组

2.3 各组胎盘组织中M-CSF的表达情况

早发型PE组、晚发型PE组和正常妊娠组的 M-CSF阳性表达率分别为82.61%(19/23)、62.96%(17/27)、29.03%(9/31)，正常妊娠组中M-CSF的阳性表达率低于早发型PE组和晚发型PE组，其中早发型PE组的 M-CSF阳性表达率占比率最高，组间对比差异存在统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 各组胎盘组织中 M-CSF的表达情况

2.4 各组胎盘组织中TNF-α的免疫组化染色情况

TNF-α阳性颗粒为棕褐色或棕黄色，主要表达于胎盘绒毛滋养细胞的胞浆、胞膜及血管内皮细胞，当滋养细胞的胞浆、血管内皮细胞及胞膜呈现棕黄色或棕褐色，则评定为阳性表达，其随着病情的严重程度其表达会增强。典型图例见图2。

注：A：正常妊娠组；
B：晚发型PE组；
C：早发型PE组

2.5 各组胎盘组织中TNF-α的表达情况

早发型PE组、晚发型PE组和正常妊娠组的TNF-α阳性表达率分别为91.30%(21/23)、66.67%(18/27)、32.26%(10/31)，正常妊娠组在胎盘组织中TNF-α的阳性表达率低于早发型PE组和晚发型PE组，其中早发型PE组的TTNF-α阳性表达率占比最高，组间对比差异存在统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 各组胎盘组织中TNF-α的表达情况

2.6 M-CSF与TNF-α表达在PE胎盘组织中的相关性分析

Spearman相关性分析结果显示，M-CSF与TNF-α 的表达在PE胎盘组织中呈负相关(P<0.05)。见表4。

表4 M-CSF与TNF-α表达在PE胎盘组织中的相关性分析

PE是一种以炎症反应和内皮失调为特点的全身性疾病，主要是指产妇在20周后出现血压升高和蛋白尿，临床症状为恶心、呕吐、眼花等症状，严重甚至引起昏迷或抽搐。该疾病为分为早发型PE和晚发型PE两类[9]。其中早发型PE表现为子宫胎盘灌注异常、胎盘病变等；
晚发型PE表现为发生慢性炎症的频率更高。PE对孕妇产和胎儿发病率、早产的健康护理系统和宫内生长都造成了重大负担[10]。关于PE的发病机制的相关研究报道较多，但PE发生及发展的分子机制尚不明确，其临床治疗目的在于控制病情，正确延长孕周。因此，PE及早诊断及治疗尤为重要。相关研究显示[11]，内皮细胞活化/功能障碍是PE母体血管系统的主要病理生理特征，被认为是妊娠期间过度的炎症反应。

M-CSF通过子宫内膜、蜕膜和胎盘组织分泌和产生，其分泌量与滋养细胞浸入不足及血管转化不良息息相关[12]。Jayaram等[13]研究显示，M-CSF参与了调节多种生理和病理过程，如受精、妊娠及子痫前期、妇科肿瘤等某些炎症。据有关研究显示[14]，通过ELISA法对PE和正常妊娠血清和胎盘中M-CSF检测，发现M-CSF在PE血清和胎盘组织中的水平呈增高趋势，由此导致滋养细胞侵袭受限、子宫血管转化不良，致使胎盘灌注不足，胎盘缺氧和缺血，从而引发PE。TNF-α属于单核细胞产生的多肽细胞因子和巨噬细胞，具有潜在的细胞毒作用[15]。TNF-α主要来自单核巨噬细胞，是重要的生物活性因子，由脂肪组织中的巨噬细胞和脂肪细胞分泌，在体内外科直接杀伤肿瘤细胞。TNF-α在怀孕的整个过程中由胎盘的绒毛中产生，且胎盘内皮细胞的损伤及凋亡密切相关[16]。TNF-α是通过正常的子宫内膜和蜕膜产生的，大剂量的TNF-α可引起恶病质，TNF-α的生物学活性较为复杂，对免疫调控、感染及炎症反应均有涉及，肿瘤细胞生长的抑制，可对造血、心、肝、肾、肌肉等系统功能产生影响，也提示细胞因子在正常胎盘生理中占重要位置[17-18]。

通过收集50例PE和31例正常产妇的胎盘组织，分析对胎盘滋养细胞侵入和过度炎症的影响，了解PE的病理生理机制以被临床治疗参考。本研究结果显示，早发型PE组和晚发型PE组的M-CSF平均灰度值均高于正常妊娠组(均P<0.05)，且早发型PE组高于晚发型PE组(P<0.05)；
早发型PE组和晚发型PE组的TNF-a平均灰度值均低于正常妊娠组(均P<0.05)，且晚发型PE组低于早发型PE组(P<0.05)，与相关文献报道一致[19]。

利用免疫组化SP法检测M-CSF在3组胎盘组织中的表达情况，显微镜下显示，M-CSF主要表达于绒毛滋养细胞的胞浆及血管内皮细胞；
当绒毛膜滋养细胞及U型二管细胞呈现棕黄色或棕褐色；
早发型PE组、晚发型PE组和正常妊娠组的 M-CSF阳性表达率分别为82.61%(19/23)、62.96%(17/27)、29.03%(9/31)，正常妊娠组在胎盘组织中M-CSF的阳性表达率低于早发型PE组和晚发型PE组，且早发型PE组M-CSF在胎盘组织中 M-CSF的阳性表达率高于晚发型PE组，其中早发型PE组的M-CSF阳性表达率占比最高。以上结果进一步证实相关研究中的报道[20]，也提示了早发型PE组患者的病情更为严重。本研究结果显示，TNF-α阳性颗粒为棕褐色或棕黄色，TNF-α主要表达于胎盘绒毛滋养细胞的胞浆、胞膜及血管内皮细胞，当滋养细胞的胞浆、血管内皮细胞及胞膜呈现棕黄色或棕褐色，则评定为阳性表达；
早发型PE组、晚发型PE组和正常妊娠组的TNF-α阳性表达表达率分别为91.30%(21/23)、66.67%(18/27)、32.26%(10/31)，正常妊娠组在胎盘组织中TNF-α的阳性表达率低于早发型PE组和晚发型PE组，且早发型PE组在胎盘组织中TNF-α的阳性表达率高于晚发型PE组，其中早发型PE组的TNF-α阳性表达率占比最高。提示胎盘组织中的TNF-α水平与PE的严重程度密切相关，是评估PE患者病情的严重程度重要参考指标，对患者预后及治疗具有较高的参考价值。Spearman相关性分析结果显示，PE胎盘组织中M-CSF与TNF-α 的表达呈负相关。表明二者在PE的发展中起协同作用，且与病情严重程度相关。

综上所述，M-CSF表达升高与TNF-α 表达降低可能与PE的病情轻重有关，可能参与了PE的发生发展。但其具体的相互作用机制仍需进一步的体外实验及动物实验研究证实。