溃疡性结肠炎患者NOD样受体蛋白3表达水平与凝血功能的相关性分析

刘楠楠

辽宁省健康产业集团阜新矿总医院消化内科，辽宁阜新 123000

溃疡性结肠炎是发生在结肠、直肠的与自身免疫有关的炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD），病理特征为结肠、直肠黏膜和黏膜下层炎症，临床表现为黏液脓血便、腹痛、腹泻等[1]。由于各种因素的影响，该病的发病人数逐渐增加，涉及的发病因素包括机体免疫功能失调、遗传易感性、肠道菌群紊乱等[2]。炎性小体是一种蛋白质复合物，其功能主要是识别不同的损伤信号NOD 样受体蛋白3（NOD-like receptor protein 3，NLRP3）是炎症小体的关键组成部分，目前研究比较多的为NLRP3[3]。NLRP3 的高表达可促进炎症因子的释放，引起炎症级联反应及组织损伤，在机体的肿瘤、炎症、纤维化的发生与发展中发挥重要作用[4]。溃疡性结肠炎患者可伴随有炎症和凝血机制的异常，机体呈高凝状态[5]。持续的高凝状态可能与溃疡性结肠炎患者的临床进展有关，也具有促进炎症发生发展的作用[6-7]。本文探讨与分析了溃疡性结肠炎患者NLRP3 表达水平与凝血功能的相关性，希望为阐明溃疡性结肠炎的发生机制提供参考。

1.1 一般资料

选取2019年1月至2020年10月在辽宁省健康产业集团阜新矿总医院诊治的溃疡性结肠炎患者95例作为病例组，选取同期进行结肠镜检查的健康人群95 例作为对照组。两组患者的性别、年龄、体重指数、血小板、总胆固醇、血尿酸等比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表1），具有可比性。所有研究对象均对本研究知情同意；
本研究经医院医学伦理委员会批准。纳入标准：①病例组患者均确诊为溃疡性结肠炎；
②对照组结肠镜检查正常，其他体检指标正常；
③所有纳入患者知情同意；
④年龄18～65 岁。排除标准：①无法耐受结肠镜检查者；
②合并严重心、脑、肝肾疾病者；
③妊娠及哺乳期妇女；
④合并自身免疫性疾病者；
⑤克罗恩病、缺血性肠病等疾病者；
⑥有癌变可能者；
⑦巨结肠、肠梗阻、肠穿孔者。

表1 两组一般资料的比较（±s）

表1 两组一般资料的比较（±s）

组别 例数 性别（例，男/女）年龄（岁） 体重指数（kg/m2） 血小板（×109/L） 总胆固醇（mmol/L） 血尿酸（μmol/L）病例组对照组χ2/t 值P 值95 96 48/47 50/45 0.084 0.772 49.28±4.68 49.57±3.33 0.314 0.789 22.47±1.47 22.19±1.11 0.298 0.814 228.76±45.29 229.09±50.17 0.333 0.776 3.78±0.65 3.81±0.77 0.087 0.934 271.09±34.27 270.76±45.17 0.177 0.872

1.2 方法

1.2.1 NLRP3 表达水平检测 收集病例组结肠黏膜正常及病灶组织，制成病理切片后，采用免疫组化法检测NLRP3 表达水平，使用Image-pro plus 图像分析软件，测定积分吸光度，记录平均值。兔抗人NLRP3 多克隆抗体购自Proteintech 公司，免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2.2 凝血功能检测 采集所有入选者的空腹静脉血2 ml 左右，抗凝后利用血凝计检测凝血功能相关指标，包括凝血酶原时间（prothrombin time，PT）、活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，APTT）与纤维蛋白原（fibrinogen，FIB），检测试剂盒都购自美国贝克曼库尔特公司。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0 统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t 检验；
计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验；
相关性分析采用Pearson 检验；
采用多元线性回归分析PT、APTT、FIB 对NLRP3 的影响。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2.1 两组NLRP3 表达水平的比较

病例组的NLRP3 表达水平为（27.15±2.17），高于对照组（15.63±3.33），差异有统计学意义（t=12.646，P＜0.001）。

2.2 两组凝血功能指标的比较

病例组的PT、APTT 长于对照组，FIB 值低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表2）。

表2 两组凝血功能指标的比较（±s）

表2 两组凝血功能指标的比较（±s）

注 PT：凝血酶原时间；
APTT：活化部分凝血活酶时间；
FIB：纤维蛋白原

组别 例数 PT（s） APTT（s） FIB（g/L）病例组对照组t 值P 值95 96 10.33±1.47 12.98±0.37 6.844＜0.05 28.34±2.74 30.76±0.77 5.972＜0.05 4.58±0.77 3.08±0.71 7.183＜0.05

2.3 NLRP3 与凝血功能指标的相关性分析

Pearson 分析显示，NLRP3 与FIB 呈正相关，与PT、APTT 呈负相关（P＜0.05）（表3）。

表3 溃疡性结肠炎患者NLRP3 表达水平与凝血功能的相关性（n=95）

2.4 凝血功能指标对NLRP3 表达水平的影响

多元线性回归分析显示，PT、APTT、FIB 为影响患者NLRP3 表达水平的因素（P＜0.05）（表4）。

表4 凝血功能指标对NLRP3 表达水平的影响

溃疡性结肠炎是一种慢性非特异性肠道炎症性疾病，近年来该病发病率在亚洲人群中呈明显增高趋势，病情常迁延不愈，反复发作，可严重影响患者的生活质量[8]。该病的发病机制迄今尚未完全阐明，其不仅是具有遗传易感性的个体，也是在各种内外在环境的刺激下，可发生一系列异常的免疫反应而引起的慢性肠道炎症反应，其中免疫功能失调在这个过程中发挥重要作用[9]。NLRP3 基因包含9 个外显子编码区，NLRP3 蛋白存在树突状细胞、T 和B 淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞中广泛存在。本研究显示病例组的NLRP3 表达水平高于对照组（P＜0.05）。从机制上分析，NLRP3 表达升高后可通过NF-κB 促进炎症因子的表达，引起机体发生严重的炎症反应，最终促进多种炎症反应性疾病的发生与发展[10]。同时结肠炎可导致机体溶酶体被破坏，可通过向胞质释放其内容物以激活NLRP3 炎症小体，进而促进炎症反应的发生，从而形成恶性循环[11]。

溃疡性结肠炎患者的血液多呈高凝状态，仅表现为病变区肠黏膜下的血栓的出现，也有毛细血管微血栓的存在[12]。本研究显示病例组的PT、APTT 值高于对照组，FIB 值低于对照组（P＜0.05）。从机制上分析，凝血功能异常可促使肠黏膜毛细血管微小血栓形成，机体血液的粘滞性增加，可使得肠黏膜血液血流缓慢，从而导致肠黏膜组织损伤，使肠黏膜组织缺血坏死溃疡形成，诱发结肠炎的发生[13-14]。而结肠炎可促使机体释放大量的炎症因子，激活机体的凝血机制，增高了血液的黏滞度，引起血液纤维蛋白原的增加，加重了结肠炎患者的病情发展。当前也有研究显示活动期溃疡性结肠炎患者存在着血浆纤维蛋白原和多种凝血因子的改变、血小板数量的增多和异常的血小板聚集，从而导致血液凝固机制的紊乱[15]。

作为炎症反应的核心，NLRP3 的初级活化可导致炎症级联反应，可为组织损伤的发生提供适宜的条件。不过组织损伤到一定程度也会诱发NLRP3 的次级活化，进而抑制相关疾病的发生与发展。已有研究显示NLRP3 在结肠炎发病中具有促炎性反应的作用，对机体的髓过氧化物酶释放和肠道菌群构成都有一定的影响[16]。Pearson 分析显示NLRP3 与FIB 呈正相关，与PT、APTT 呈负相关（P＜0.05）；
多元线性回归分析显示PT、APTT、FIB 为影响患者NLRP3 表达水平的重要因素（P＜0.05）。从机制上分析，NLRP3 可诱导Caspase-1 的自我剪切，调控机体的自身免疫应答反应，也能够调控白介素-1β 的产生。并且NLRP3 的激活也与血小板活化存在相关性，NLRP3 炎症小体的过度激活是导致机体凝血功能异常，而后者也可促进NLRP3 的过量释放。如果能进一步研究NLRP3 与凝血功能指标之间的具体作用方式，将有望成为溃疡性结肠炎治疗的新靶点。

综上所述，溃疡性结肠炎患者多表现为NLRP3高表达水平，伴随有凝血功能异常，PT、APTT、FIB 为影响患者NLRP3 表达水平的重要因素。