新疆部分地区马盖塔病血清流行病学调查

仇相书，陈川威，王 琛，侯金利，史 宁，朱翔宇，鲁会军，金宁一*

(1.西北农林科技大学 动物医学学院，陕西 杨凌 712100；
2.军事科学院 军事医学研究院 军事兽医研究所，吉林 长春 130122；
3.海南省五指山市动物疫病预防控制中心，海南 五指山 572200；
4.巴州动物疾病控制与诊断中心，新疆 库尔勒 841000；
5.山东省招远市辛庄畜牧兽医站，山东 招远 265400；
6.吉林农业大学 动物医学学院，吉林 长春 130122)

盖塔病毒(Getah virus，GETV)是披膜病毒科(Togaviridae)甲病毒属(Alphavirus)成员，能引起多种动物非特异性发热，无菌性脑膜炎和流产。自1955年首次从马来西亚雪背库蚊(Culexgelidus)中分离到GETV-MM2021以来[1]，在中国、日本、韩国、蒙古、俄罗斯、澳大利亚和印度等众多国家和地区陆续报道临床病例或分离、检测到该病毒，截至目前已报道共231株GETV的部分基因或全基因组序列[2]。盖塔病由GETV引起，主要经蚊虫等节肢动物传播。蚊子在我国数量大、种类多、分布广，容易加剧GETV的传播。作为一种“新发蚊媒传染病”，盖塔病在我国流行问题日益突出，对动物安全和公共卫生构成了严重威胁。据报道在2006年之前，仅在我国6个省发现了GETV[3]，但到2018年，受GETV影响的省份数量急剧增加到15个[4]。研究人员陆续在人及猪、马、牛、袋鼠、狐狸、鸟类等多种动物血清中均检测到GETV抗体[5-7]，其中，猪和马被认为是GETV增殖和传播的重要宿主，感染后可表现出相对明显的临床症状。病猪可出现发热、腹泻、震颤，严重时导致母猪生殖障碍和胎儿死亡[8]；
病马的临床症状包括体温升高、荨麻样皮疹和后肢水肿等[9]。

GETV血清流行病学研究显示，印度马匹GETV抗体阳性率为17%(10%～28%)[10]，韩国为39%[11]，中国香港为24%[12]。在日本，GETV流行后，马感染率从7.5%剧增至93%，野猪感染率为47.8%[13]。GETV在马群中的流行及危害日益严重，关于我国马群感染GETV的研究鲜有报道。1979年LI等[14]从海南省采集的马血清样本中检出GETV抗体，其阳性率为25%(4/16)；
2017年李元元[15]对云南省采集的256份马血清进行GETV中和抗体检测，阳性率为47.7%；
2018年LU等[16]从广东省某赛马场的1匹发热马血液中鉴定出GETV毒株，且该毒株与2017年我国分离的猪源GETV株基因同源性最高。

目前，我国尚无正式生产应用的GETV诊断试剂盒及其相关疫苗，这对了解盖塔病的传播和流行规律造成很大困难。GETV感染会使感染动物体内产生抗GETV中和抗体，通过血清中和试验检测血清中和抗体的方法，可以了解动物群体自然感染情况。本研究对新疆部分地区马匹开展GETV血清流行病学调查，以期获知这些地区马群中盖塔病的流行特征和流行规律，对加强盖塔病的防控提供依据。

1.1 样品马血清采自新疆维吾尔自治区4个地区，包括克拉玛依市、阿克苏地区、昌吉回族自治州和伊犁哈萨克自治州；
2个品种：纯血马与伊利马；
3个年龄段：小于1岁龄(<1岁龄)、1～3岁龄、大于3岁龄(>3岁龄)；
2种饲养方式：散养场与规模场。采血方式为颈静脉采血，每匹10 mL，共采集294份马血清。

1.2 细胞、病毒、细胞培养基非洲绿猴肾细胞(Vero)、GETV毒株SD17/09(GenBank登录号：MH106780.1)由本实验室保存。细胞维持液(含2%新生胎牛血清的DMEM)、无血清DMEM购自北京索莱宝科技有限公司。

因此，思想政治教育方法必须要跟随着事物发展的变化趋势，使之顺应历史的发展潮流，顺应时代的变迁，才能取得满意的效果。

1.3 样品采集与处理将采集的血样静置，析出血清后，6 000 r/min离心10 min，收集上层血清。将血清置于56℃水浴中灭活30 min，作为待检样品。

GPS控制测绘技术与其他测绘手段相比创新性较强，通过灵活精准的三维控制网即可发挥出GPS的优势，而这种网络又具有一个特点就是可以减少周围干扰物体对数据准确性的影响，避免误差的产生。这种测绘技术不仅能使用水准仪、经纬仪和测距仪获取被测高程、角度和距离，还能在定位系统的支持下在任何位置建立坐标，弥补了以往测绘技术的不足之处，满足了现代化测绘需求，是被测点的数据更为精准可靠。

截至目前，盖塔病在全世界范围内先后6次在马群中暴发，造成了巨大的经济损失。其中，5次发生在日本(1978年、1979年、1983年、2014年、2015年)，1次在印度(1990年)。BANNAI等[19]持续监测来源于日本北部茨城县与南部千叶市的猪、马GETV中和抗体情况，结果表明，茨城县猪中和抗体阳性率从2012年的0%增加至2015年的65.0%；
在千叶市，阳性率在2015年上升至48.0%。值得注意的是，2014-2015年盖塔病在这些地区赛马中暴发。系统发育分析表明，在此期间，从猪和马中分离到的GETV毒株之间有着密切的亲缘关系，表明GETV可以在特定地区猪和马之间同时传播。新疆是我国陆地面积最大的省级行政区和畜牧业大省之一。然而，关于GETV在国内家畜特别是在新疆地区马群中的流行，目前尚未见报道。

为了比较新疆不同地区、不同品种、不同年龄、不同饲养方式马GETV中和抗体效价的差异，本研究统计了不同效价的阳性血清数占对应总阳性血清数的百分比，中和抗体滴度范围包括低效价组(1∶10～1∶20)、中效价组(1∶40～1∶320)、高效价组(1∶640～1∶1 280)。

1.5 统计分析使用Excel 2007、SPSS 13.0进行数据录入分析。计数资料用率来描述，率的比较采用χ2检验；
计量资料用几何均数进行描述，几何均数的比较采用F检验(将阳性血清抗体滴度数值取倒数，进行对数转换后采用F检验[18]，多重比较采用Duncan法)。检验水准α=0.05或0.01。

Discriminating Vehicles with Dummy Axle Based on K-Means Clustering……………MA Zongpu, WANG Ting(4·48)

2.1 新疆部分地区马群GETV中和抗体水平对采集的马血清进行血清中和试验，结果显示，294份马血清样品中，检出阳性血清227份，中和抗体阳性率达77.2%，阳性血清中和抗体几何平均滴度(GMT)为1∶145.8。

2.5 不同饲养方式马群GETV感染情况对散养场和规模场马血清GETV中和抗体阳性率进行分析，结果表明这2种饲养方式中和抗体阳性率分别为56.9%和83.0%(χ2=19.520，P<0.01)，组间差异极显著；
阳性血清中和抗体GMT分别为1∶125.2和1∶166.3(F=1.547，P=0.215)，组间差异不显著(表4)；
规模场马阳性血清低效价占比率(5.8%)显著低于散养场(16.2%)，在阳性血清中效价占比率(74.2%)高于散养场(64.9%)，在阳性血清高效价占比率(20.0%)接近于散养场(18.9%)，结果见图4。

根据山西省地质工程勘察院现场前期实钻资料，地层情况大致为一碰即碎的松软泥砂地层，取心难度很大。现场主要使用了两种取心钻具，常规及超前单动双管钻具。常规单动双管钻具几乎无法获取岩心，超前单动双管钻具平均岩心采取率为33%。岩心丢失严重，严重影响岩心采取率及质量。笔者根据地层特点从岩心堵塞、冲蚀等方面进行了分析，具体如下：

表1 新疆不同地区马群盖塔中和抗体检测结果比较

图1 不同地区及不同抗体效价马阳性血清占比率对比

“以谣生利”，“谣”为“利”来，切断了两者之间的联系，“谣”自然就减少了。鉴于当前谣言已经严重扰乱经济秩序和社会秩序，必须从法律上明确造谣责任，让恶意造谣者付出应有代价。因造谣而产生的收入，不能“落袋为安”，对于这一问题也应该有所规范。就平台方来说，处理也不能“对号不对人”，应该把号背后的人列入黑名单，严格准入资格，不再为其提供造谣机会。

表2 不同品种马盖塔中和抗体检测结果比较

图2 不同品种及不同抗体效价马阳性血清占比率对比

本研究于2020年6月中旬至9月中旬从新疆4个地区(克拉玛依市、阿克苏地区、昌吉回族自治州和伊犁哈萨克自治州)采集马血清共294份，进行GETV中和抗体检测。检出阳性血清227份，阳性率达77.2%，远高于海南(25%)[14]和云南(47.7%)[15]，接近于GETV流行后的日本(93%)[13]；
结合较高的中和抗体GMT值(1∶145.8)，提示在上述地区马群中，GETV感染普遍存在，这些地区可能正处于盖塔病流行期或流行后期。

表3 不同年龄段马盖塔中和抗体检测结果比较

图3 不同年龄及不同抗体效价马阳性血清占比率对比

2.2 不同地区马群GETV感染情况对克拉玛依市、阿克苏地区、昌吉回族自治州和伊犁哈萨克自治州的马血清GETV中和抗体阳性率进行分析，结果表明，这4个地区中和抗体阳性率分别为72.2%，74.2%，79.2%，82.1%(χ2=2.667，P=0.448)，组间差异不显著；
阳性血清中和抗体GMT分别为1∶114.3，1∶135.7，1∶202.4，1∶144.0(F=1.948，P=0.123)，但昌吉回族自治州显著高于克拉玛依市(表1)；
此外，4个地区的阳性血清中和抗体效价均主要集中在中效价组，数量占比约为70.0%，组间构成比无显著性差异(图1)。

表4 不同饲养方式马盖塔中和抗体检测结果比较

图4 不同饲养方式及不同抗体效价马阳性血清占比率对比

1.4 中和抗体检测参照文献[17]的方法，使用“固定病毒-稀释血清”法检测待检马血清GETV中和抗体效价。使用DMEM将待检血清进行2-1～2-10倍比稀释，每个稀释度血清重复8个复孔，再分别与等体积的GETV病毒液(200 TCID50/100 μL/孔)混合，37℃，5% CO2孵育1 h。取混合液按100 μL/孔接种到含单层Vero细胞(约5×104个/孔)的96孔板，37℃，5% CO2继续培养72～96 h。同时设置GETV阳性对照和正常Vero细胞的阴性对照。96 h后观察细胞病变情况，按Reed-Muench方法计算并以完全抑制病毒生长的最高稀释倍数的倒数定义为中和抗体效价。

2.3 不同品种马群GETV感染情况对纯血马与伊犁马的血清GETV中和抗体阳性率进行分析，结果表明，2个品种马中和抗体阳性率分别为83.6%和71.9%(χ2=5.680，P=0.018)，组间差异显著；
阳性血清中和抗体GMT分别为1∶183.8和1∶121.9(F=6.372，P=0.012)，组间差异显著(表2)；
与地区因素类似，2个品种马阳性血清中和抗体效价均主要集中在中效价组，数量占比约为70.0%，组间构成比无显著性差异(图2)。

2.4 不同年龄马群GETV感染情况对<1岁龄、1～3岁龄、>3岁龄马血清GETV中和抗体阳性率进行分析，结果表明，这3个年龄段马中和抗体阳性率分别为20.0%，45.5%，80.6%(χ2=26.274，P<0.01)，阳性血清中和抗体GMT分别为1∶86.5，1∶34.8，1∶153.1(F=3.823，P=0.023)，>3岁龄组GMP显著高于其他2组(表3)；
>3岁龄组马阳性血清低效价占比率(5.9%)显著低于其他2组(50%，60%)，相反，在马阳性血清低效价与高效价占比率(73.6%，20.5%)高于其他2组(50%，0%；
40%，0%)，结果见图3。

目前，各类大学都对各自的教学进行改革以适应不断发展的社会需求和人对知识掌握的需求。但是所有的改革都不可能是尽善尽美的，在课堂教学改革的过程中也会出现一些不尽人意的方面。

各地区中和抗体阳性率最高的地区是伊犁哈萨克自治州，为82.1%，最低的地区是克拉玛依市，为72.2%；
阳性血清中和抗体GMT最高的地区是昌吉回族自治州，达1∶202.4，大约是最低地区(克拉玛依市)的2倍。虽然4个地区之间的中和抗体阳性率和阳性血清中和抗体效价构成比并没有显著性差异(P>0.05)，但昌吉地区马群中和抗体GMT均高于其他3个地区，表明该地区GETV感染程度最为严重。

不同品种马中和抗体阳性率及阳性血清中和抗体GMT差异均具有统计学意义，纯血马为83.6%和1∶167.5，显著高于伊利马的71.9%和1∶132.7(P<0.05)。鉴于2个品种马为混合饲养，其生活环境、饲养条件基本一致，因此，推测不同品系马对GETV的易感性不同，纯血马高于伊犁马，这可能是由于纯血马引种来源于GETV流行地区(如日本)所致。为了更好地改良马匹品种，近几年我国从澳大利亚、爱尔兰、日本等多个国家引进纯血马。我国对进口马的检疫参照《关于中国从美国输入马的检疫和卫生要求议定书》，检测项目包括非洲马瘟、日本脑炎、马鼻疽、马媾疫等，但目前并未将盖塔病纳入检测范围内[20]。因此，在引进外来马时，应加强对盖塔病的检测。

与品种情况类似，>3岁龄的马血清阳性率和中和阳性血清抗体GMT分别为80.6%和1∶153.1，均显著高于其他2个年龄段(P<0.05)。此外，>3岁龄组的中、高效价血清阳性率显著高于其他2个年龄组，提示中和抗体水平随着年龄增长而呈现递增趋势，可能与成年马被携带GETV的蚊虫反复叮咬、频繁接触感染病马有关。然而，由于采集样本容量的限制，<1岁龄、1～3岁龄的马血清均只有10份和11份，远低于>3岁龄马血清的273份，这给估计<1岁龄、1～3岁龄马的血清阳性率和GMT值带来了较大误差。

本研究发现，在所调查的多数规模场里，普遍存在养殖密度过大、畜舍通风差、蚊虫易滋生和叮咬马匹的现象，虽然规模场和散养场马阳性血清效价构成比差异不明显，但这很可能是规模场马血清阳性率和中和抗体GMT(83.0%；
1∶166.3)显著高于散养场(56.9%；
1∶125.2)的原因。

新疆是我国马匹养殖数量最多的地区，马匹存栏数约86万匹，占全国存栏总数的10%以上，新疆马产业发展在全国一直占据着重要的地位[21]。本研究首次对新疆克拉玛依市、阿克苏地区、昌吉回族自治州和伊犁哈萨克自治州4个地区，开展了盖塔病血清流行病学调查，结果表明，这些地区马群GETV感染普遍存在，且阳性马血清中和抗体水平较高，这可能与品种、年龄以及养殖环境密切相关。为了进一步了解盖塔病在新疆地区的流行规律，应加强对新疆地区，特别是对新疆地区引种马和规模化养殖场马盖塔病的持续监测。本研究为新疆地区马盖塔病的防控工作及马产业的健康发展提供了依据。