【针刺足三里对小鼠皮肤光老化的影响】 针刺足三里对小鼠耐缺氧

　　[摘要]目的:研究针刺足三里对紫外线照射引起的无毛小鼠皮肤光老化模型皮肤组织丙二醛(MDA)含量、超氧化 　　物歧化酶(SOD)活力的影响。方法:实验选取2月龄健康昆明种无毛小鼠32只,雌雄各半,体重18～22g。随机分成4组:正常对照组、模型组、针刺组、电针组,每组8只。用紫外线灯管模拟紫外线照射,造成无毛小鼠皮肤光老化,造模同时针刺小鼠足三里,采用生化分析方法测定SOD活性及MDA含量。结果:与对照组比较,模型组无毛小鼠皮肤组织SOD活性明显降低(P 　　1.2.4造模方法:40W UVB 灯管4根(光谱集中在297nm ),UVA灯管2根(光谱集中在365nm)(灯管购于北京电光源研究所)并列穿插安装到自制模拟日光箱中。将无毛小鼠分别放入自制照射盒中,将鼠盒分别放于照射箱的左前、左后、右前、右后位置,距离灯源20cm处,每次照射前轮换鼠盒位置,灯管预热10min。开始第一天照射1h,2天后改为2h ,1周后改为3h,并保持该剂量直至结束。照射以5天为一个周期,间隔2天,再开始下一个周期。累计照射UVA 304.5J/cm2,UVB 6.3J/cm2,达到文献记载紫外线辐照强度,照射时间总计为一个月。
　　1.2.5取材:造模一个月后,断颈处死全部小鼠,立即取下背部照射处全层皮肤(不含皮下脂肪),面积为2cm×3cm。冷冻于-70℃冰箱内保存待测。
　　1.3 指标测定:每个小鼠皮肤组织标本取0.5g,在冰生理盐水中漂洗,除去血液,用滤纸拭干,皮肤组织SOD活性的测定采用黄嘌呤氧化酶法,皮肤丙二醛含量分别采用硫代巴比妥酸法。各项指标的具体测定原理、指标测定前各试剂的配制方法以及每项指标蛋白含量的测定方法等均按照试剂盒说明书进行测定。用BECKMAN DU-600核酸蛋白分析仪测定每项指标的吸光值,并根据试剂盒说明书提供的公式计算所需数据。
　　1.4 统计学处理:所有数据均通过SPSS11.0软件进行处理,各组实验参数以x±s 表示。组间差异按方差分析进行显著性检验,并用最小显著差法(LSD法)作两两比较。
　　
　　2结果
　　
　　2.1 皮肤组织SOD活性测定:与正常对照组相比,模型组的SOD活性明显低于正常对照组,且有显著性差异,说明紫外线照射可使无毛小鼠皮肤组织SOD活性明显受到抑制;针刺组和电针组与正常对照组相比均有显著性差异。针刺组和电针组与模型组比较,SOD活性明显提高,且有显著性差异。说明针刺能够使小鼠皮肤组织中SOD活性升高(见表1)。
　　
　　2.2 皮肤组织MDA含量测定:与正常对照组相比,模型组的MDA含量明显高于正常对照组,且有显著性差异,说明紫外线照射可使无毛小鼠皮肤组织MDA含量明显增加。针刺组和电针组与模型组比较,无毛小鼠皮肤组织MDA含量降低,且有显著性差异。说明针刺能够使小鼠皮肤组织中MDA含量降低(见表2)。
　　
　　3讨论
　　
　　衰老(senescence)是一种多环节的生物学过程,使机体在退化时期功能下降和紊乱的综合表现。简而言之,衰老就是体内各脏器细胞功能减低的现象[1]。皮肤衰老的形成与多种因素有关,随着当今医学模式的转变及人们保健意识的加强,运用中医学的理论采取一系列行之有效的方法对延缓皮肤衰老有一定积极作用。针灸从古至今一直是保健抗衰老的常用方法,而其中胃经的足三里为常用穴位。
　　脾胃为气血生化之源,后天之本,阳明胃经多气多血,善调气血,且胃经对于脾胃具有良好的双相调节作用,从而调节整体的气血阴阳使其达到平衡的状态。而人体是一个有机整体,所谓“皮之不存,毛将焉附”,“有诸内必形诸外”,机体的衰老必然导致皮肤的老化,皮肤衰老不仅是机体衰老的一部分,也是对脏腑气血虚衰的一个外在反映。通过调整经络气血阴阳达到抗衰老的目的,而“色随气华”。经络通畅,气血充而不滞,阴平阳秘,必然可达“外濡腠理”之功。使面色悦泽濡润,以达美容颜,悦肌肤,抗皮肤衰老之效。足三里穴为临床上常用的要穴,古云“三里功多数不清”。此穴除用于临床治疗外,对于防病和抗衰老亦存重要的影响[2-3]。金元时代的李东垣就提倡“以胃合三里穴推而扬之以伸元气”,认为刺激足三里穴有补益脾胃、振奋元气之功。因此针刺按摩足三里不仅具有抗整体衰老的作用,对于皮肤的衰老也是很有效的。
　　机体在正常代谢中,不可避免地产生许多自由基,这是一种强氧化剂,对机体起破坏作用,引发机体衰老。但因体内同时存在着自由基防御系统,如超氧化物歧化酶,保护机体免受损伤[4]。年老时自由基防御系统下降,谷胱甘肽过氧化物酶等活性减弱,引起大量不饱和脂肪酸氧化,造成生物膜破坏,DNA突变,蛋白质变性等细胞广泛性损伤,从而促进机体衰老。而针刺能显著提高谷胱甘肽过氧化物酶活性,抑制脂质过氧化。因此证明针刺具有抗氧化作用,增强酶的活性,消除自由基,抑制脂质过氧化这一途径而实现的。本实验结果使自由基损伤学说得到验证,皮肤呈现光老化外观,与紫外线照射引起自由基产生过多,抗氧化酶活性降低密切相关[5]。减少自由基的产生和清除老化代谢产物,提高抗氧化酶活性确实是目前延缓皮肤光老化的有效方法。因此,用中医的方法清除自由基对抗光老化,正以其高效无副作用优势成为中医学一个十分活跃的研究领域。从本次实验的结果来看,针刺足三里能够通过提高SOD活性达到清除自由基的目的,从而抗皮肤的光老化。其机制可能因为足三里穴位本身即是具有强身,保健抗衰老作用穴位,通过针的刺激,可达到清除体内过多的自由基,延缓衰老的作用。
　　此外,本实验分组中加入了电针与手针的对照比较,是为了检验这两种常用针刺方法作用效果的异同。实验中电针组小鼠连接的韩氏电针仪,我们选用的波形为随机变化的疏密脉冲波(频率为2～100Hz交替),电压l～3V,以动物肢体微颤为度,是由于这种波形电脉冲的频率随时发生不规律的变化, 机体不易产生电刺激适应现象[6]。结果发现,电针组与手针组小鼠各项指标均无显著性差异,说明手针和电针这两种干预手段的作用效果接近。
　　本研究以自由基学说和针灸理论为基础,通过实验表明针灸足三里穴能够使光老化小鼠皮肤组织中的丙二醛(MDA)含量减少,超氧化物歧化酶(SOD)活力增强,从而说明针刺足三里穴能够改善皮肤组织新陈代谢,对皮肤衰老具有一定的拮抗作用。
　　综上,我们认为针刺足三里可通过激发机体的内在调节能力,从而起到延缓衰老,具有防护紫外线引起的皮肤光老化作用,且从抗自由基角度分析,其抗光老化的作用机制可能是通过提高SOD活性减少自由基代谢产物的堆积以及其本身具有清除自由基的协同作用而发挥的。
　　
　　[参考文献]
　　[1]王诗晗,吴景东.皮肤衰老中医机理探讨[J].辽宁中医杂志,2003,30(10):800.
　　[2]陈 波,刘明军.针灸抗自由基氧化延缓衰老现代研究概况袁万清[J].吉林中医药,2004,24:112.
　　[3]崔九孟.足三里穴防病、抗衰老作用的研究[J].中国针灸,2002,1(104):5.
　　[4]刘庆中,刘一凡,郑灏泳.针刺对SAM-P/10小鼠脑组织CAT/G SH-PX活性的影响[J].针灸临床杂志,2001,17(4):51-53.
　　[5]周鸿波.皮肤老化及其免疫学、自由基损伤学说的研究进展[J].辽宁中医杂志,2004,3(3):123.
　　[6]顾训杰.电针刺激穴位增强小白鼠体力作用的观察 [J].针灸临床杂志,1998,14(12):9-10.
　　
　　[收稿日期]2009-10-15 [修回日期]2009-12-20
　　编辑/李阳利