人涎腺腺样囊性癌嗜神经侵袭的大体形态学研究:涎腺腺样囊性癌

　　[摘要]目的：探讨人涎腺腺样囊性癌嗜神经侵袭在大体形态学上的发生发展过程。方法：将人涎腺腺样囊性癌肺高转移癌Acc-M细胞系接种于5只裸鼠双侧臀部肌肉内，从荷瘤长出开始，解剖出荷瘤与神经以观察它们的关系，以后每隔5天在同一部位解剖一次,连续观察1个月，同时观察和对比各裸鼠神经受肿瘤侵袭后相应肢体的功能变化。结果：腺样囊性癌发生嗜神经侵袭的方式是，瘤组织细胞以神经干为中心以边生长边包裹边侵袭的方式进行的。结论：腺样囊性癌嗜神经侵袭是以一种特殊的方式进行的，这对临床诊断与治疗具有良好的指导意义。
　　[关键词]腺样囊性癌；坐骨神经；神经侵袭；裸鼠
　　[中图分类号]Q813.1[文献标识码]A[文章编号]1008-6455（2009）02-0205-03
　　
　　General morphology study of neural invasion withhuman salivary adonoid cystic carcinoma
　　SUN Mo-yi,TAN Ai-xing,LV Cheng-peng，JIA Wen-rong, LI Jian-hu，YANG Yao-wu
　　(Department of Oral and Maxillofacial Surgery, Stomatological College, the Fourth Military Medical University, Xi"an 710032, Shaanxi, China)
　　
　　Abstract:ObjectiveTo investigate development and grouth process of neural invasion with human salivary adonoid cystic carcinoma by general morphology study.MethodsHuman salivary adenoid cystic carcinoma line Acc-M cells were injected into intramusculary of both sides rump of five nude mice. since tumor can be seen at first, dissection of nude mice to observe their relation between tumor and nerve one time per five days, successive observation have been done for one month, at the same time, function change of all limbs with invaded nerve were observed and compared.ResultsNeurotropism of ACC working at the way of wraping nerve while which be grewing, and neural invasion is specific biological behaviour of adonoid cystic carcinoma. Conclusionneural invasion with adonoid cystic carcinoma were doing at a specific style, it have a good instruction sense in the clinical diagnosis and therapy.
　　Key words: adonoid cystic carcinoma; sciatic nerve; neural invasion; nude mouse
　　
　　腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma，ACC)有沿神经侵袭的生物学特性。近年来人们发现，这一特性是影响该肿瘤患者复发和生存的重要预后因素[1]。ACC对神经的侵袭机理非常复杂，目前仍处在探索之中，本实验采用ACC-M细胞接种于裸鼠的坐骨神经附近，在不同时期观察肿瘤生长及与外周神经的关系，从大体形态学上进一步了解ACC神经侵袭的特征性生物学形为，为探讨其嗜神经侵袭的机理及防治方法奠定基础。
　　
　　1材料和方法
　　1.1细胞株：人涎腺腺样囊性癌肺高转移癌Acc-M细胞株由第四军医大学口腔医学院生物教研室提供，RPMI+15%小牛血清37℃培养。
　　1.2实验动物：4周龄雄性BABL/C nu/nu裸小鼠，由上海科学院实验动物中心提供，共5只，SPF条件下饲养。
　　1.3细胞悬液：取体外培养指数生长期Acc-M细胞经0.125%胰酶消化，吹打成单细胞悬液，经苔盼蓝染色确定活细胞数达90%以上，细胞经1 000r/min离心，共5min,弃去上清，加入PBS液吹打成单细胞悬液后再离心，共三次，最后加入无血清培养液将细胞数稀释调整成5×106/ml。
　　1.4实验方法：用乙醚麻醉裸小鼠，在无菌条件下取制备好的单细胞悬液注射于裸小鼠双侧坐骨神经(膝盖至尾巴根部连线的中1/3)附近，各注射0.2ml，自荷瘤长出开始，以后每隔五天在同一部位解剖一次进行连续观察1个月，同时观察和对比各裸鼠神经受肿瘤侵袭后相应肢体功能变化情况。最后比较受肿瘤完全侵袭的神经与正常神经的离体状况。
　　1.5 神经受侵袭的标准：侵袭标准为光镜下有肿瘤细胞侵入坐骨神经束膜内，同时观察神经受侵袭后的功能表现。功能障碍标准为受侵袭神经所支配的肌肉出现瘫痪，肢体瘫痪表现为肢体不能正常自主运动，同时五个小爪自然并拢下垂无抓力。
　　
　　
　　2结果
　　2.1 荷瘤的形成：通过连续对接种后的裸鼠进行密切观察，于第9天可见有2只裸鼠双侧及2只裸鼠单侧臀部长出荷瘤，第10天见剩下那只裸鼠双侧臀部长出荷瘤，其中1只的另一侧始终未发现长出荷瘤。于30天时发现有一只出现单侧肢体运动功能障碍。
　　2.2 荷瘤的成长对神经的侵袭过程：见表1，图1。
　　2.3 受侵袭神经的离体状况：切除受肿瘤完全侵袭的神经，与正常离体神经相比，见神经外膜大部分被破坏，色暗红而失出光泽，弹性明显减退，卷曲，粘性增加。见图2。
　　
　　3讨论
　　ACC的浸润性极强，术后局部复发与其嗜神经侵袭密切相关，故临床治疗难点之一就是ACC侵袭中的嗜神经性，因而探讨ACC嗜神经侵袭的机制具有重要的临床意义。多年来研究嗜神经侵袭性肿瘤的特性以关注癌细胞对于神经组织特异性的趋化移动、粘附为主，来解释嗜神经性侵袭[2-3]。本实验通过对Acc-M接种于臀部肌肉内坐骨神经附近，切除发生神经侵袭并出现功能障碍的荷瘤，以从组织学形态上来研究ACC嗜神经侵袭的机制。
　　肉眼观荷瘤块是沿神经的长轴方向呈膨胀性生长，并为多个瘤结节融合而成。从而可以推理出，移植瘤对神经的侵袭是在神经的周围瘤细胞先形成一小瘤结节，先向神经靠近和粘附，瘤结节在生长的同时，其周边沿神经又长出小的突起，在神经的背或腹侧融合，对神经形成包裹，然后沿神经长轴向近远两端发展，同时向周围肌肉组织内长出新的瘤结节突起，从而完成肿瘤对神经及周围组织的侵袭过程。
　　从以上结果不难分析出受肿瘤完全侵袭的神经外观表现，由于外周神经长时间受肿瘤组织包裹和挤压，一方面神经失出了正常的血液供给而缺氧变性；另一方面肿瘤细胞侵袭和破坏了周围神经的保护屏障，从而失出了正常的组织保护和支持，最终致周围神经萎缩而丧失功能。
　　之所以选择坐骨神经做为本实验的研究对象，坐骨神经为裸鼠体内最粗的运动神经之一，能较好地模拟ACC在头颈部对神经的侵袭所致相应的肌肉瘫痪，能真实可靠地反映ACC对神经侵袭的程度和过程，坐骨神经位于肌肉内，全长约为 2.3cm，5号针头进针约 0.3cm，肿瘤种植时只需将细胞悬液注入肌肉内即可，范围较大且较容易掌握。此外，本实验从肿瘤生长与神经关系进一步证实了ACC的嗜神经性。
　　在本实验中发现ACC以神经为中心向近远端呈连续性侵袭，ACC不但是一个主动的神经侵袭过程，而且是一个与神经互相作用的结果。本实验是我们研究ACC神经侵袭机制及防治方法的良好模型。
　　
　　[参考文献]
　　[1]Chummun S,McI ean NR，Kelly CG,el a1．Adenoid cystic carcinoma of the head and neck[J]．Br J Plast Surg,2001,54(6)：476-480．
　　[2]Iwamoto S,Burrows R, Agoff S, et al.The p75 neurotrophin receptor, relative to other Schwann cell and melanoma markers, is abundantly expressed in spindled melanomas[J]. Am J Dermatopathol,2001,23：288-294．
　　[3]Okada Y, Takeyama H, Sato M, et al. Experimental implication of celiac ganglionotropic invasion of pancreatic cancer cells bearing c-ret proto-oncogene with reference to glial cell line derived neurotropic factor(GDNF) [J]. Int J Cancer,1999,81(1):67-73．
　　
　　[收稿日期]2008-12-18
　　编辑/张惠娟