【枸杞多糖延缓小鼠皮肤衰老的实验研究】 多糖抗疲劳实验小鼠游泳多久

　　[摘要]目的：研究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides，LBP)对D－半乳糖拟衰老小鼠皮肤组织的延缓皮肤衰老作用。方法：80只2月龄昆明种小鼠随机分为四组：正常组(N)、衰老模型组(C)、低剂量LBP抗衰老组(L)和高剂量LBP抗衰老组(H)。衰老模型组与抗衰老用药组每日颈背皮下注射D－半乳糖溶液制造衰老模型。抗衰老用药组在注射D－半乳糖期间以LBP灌胃。42天后取小鼠背部皮肤检测。结果：衰老模型组、低、高剂量LBP抗衰老组小鼠皮肤含水量、表皮厚度、真皮厚度以及成纤维细胞数与正常对照组比较差异有显著性意义(P＜0.01)，组间两两比较差异有统计学意义。结论：D－半乳糖诱导的亚急性衰老模型是可靠的衰老实验动物模型，枸杞多糖能延缓皮肤衰老。
　　[关键词]枸杞多糖；皮肤衰老
　　[中图分类号]R322.99 [文献标识码]A　[文章编号]1008－6455(2007)06－0734－03
　　
　　皮肤位于体表，是最早显现机体衰老的组织。皮肤衰老不仅影响外貌，还与许多皮肤病有病因学联系，因此预防和延缓皮肤衰老已成为医学和美容的研究热点。枸杞多糖(Lycium barbarumpolysaccharides，LBP)是枸杞子的主要活性成分之一，具有免疫调节、抗肿瘤、防衰老等多种功能。有研究表明，枸杞多糖有抗氧化延缓皮肤衰老的作用。我们研究LBP对D－半乳糖拟衰老小鼠皮肤组织的延缓皮肤衰老作用，为开发研制枸杞多糖资源提供科学的实验依据。
　　
　　1　材料和方法
　　
　　1．1　实验材料
　　1．1．1　实验动物：清洁级昆明种小鼠80只，2个月龄，体重16～24g，雌雄各半。实验动物均由广东医学院实验动物中心提供。
　　1．1．2　主要实验仪器及试剂：OLYMPUS IMT－I型倒置相差显微镜(Japart)；LeicaRm－2135型石蜡切片机(Germany)；计算机图像数字化分析系统(德国LEICA公司)。枸杞多糖(永州大舜中药提取研究所惠赠)；D－半乳糖(北京拜尔迪生物技术有限公司)。
　　
　　1．2　实验方法
　　1．2．1　实验分组：80只2月龄昆明种小鼠随机分为四组，即正常组(N)，衰老模型组(C)，低剂量LBP抗衰老组(L)，高剂量LBP抗衰老组(H)。每组20只，自由进食和饮水。
　　1．2．2　实验动物模型：衰老模型组与抗衰老用药组每日颈背皮下注射D－半乳糖溶液，开始剂量为80mg/(kg・天)，7天；随后为120mg/(kg・天)，14天；140mg/(kg・天)，14天；最后注射180mg/(kg・天)，7天。正常组每日注射同体积的生理盐水。注射均按无菌操作要求进行。抗衰老用药组在注射D－半乳糖期间以LBP(低剂量LBP抗衰老组：10mg/kg；高剂量LBP抗衰老组：20mg/kg)1次/天灌胃。正常组与衰老模型组则以生理盐水代之。
　　1．2．3　检测皮肤含水量：颈背部皮肤去毛清洁后，切取1cm2皮肤，精密称其湿重，随即将其放入烘箱中，于80℃烘干12h，称其干重，按下面方法计算皮肤含水量百分率：
　　皮肤含水百分率：湿重－干重/湿重×100％/湿重
　　1．2．4　制作皮肤病理切片，观察皮肤组织结构：按常规组织切片HE染色法制作皮肤组织病理切片，镜下分析不同处理组皮肤内部组织学变化特点，计算机图像数字化分析系统定量分析小鼠表皮厚度、真度厚度。
　　1．2．5　成纤维细胞计数：高倍视野下对HE染色切片上成纤维细胞计数，每例观测3个高倍视野，计算每例切片成纤维细胞数/HPF，求出各组均值。
　　
　　2　统计学处理
　　
　　使用SPSS13.0统计软件进行统计描述，多个样本均数的比较采用单因素方差分析(One－WayANOVA)，当总体方差齐同时选择LSD法分析；当方差不齐时，选择Dunnet C法分析。
　　
　　3　结果
　　
　　3．1　皮肤含水量及成纤维细胞计数：衰老模型组小鼠皮肤含水量及成纤维细胞数较正常对照组明显减少，枸杞多糖可以提高皮肤组织含水量及成纤维细胞数。组间两两比较，P＜0.01，差异具有显著性意义(见表1)。
　　
　　3．2　皮肤表皮、真皮厚度和病理切片结构变化：衰老模型组小鼠皮肤表皮、真皮厚度均较正常对照组明显减少，枸杞多糖可以提高皮肤表皮及真皮厚度。组间两两比较，P＜0.01，差异具有显著性意义(见表2、图1～4)。
　　
　　
　　
　　
　　4　讨论
　　
　　在进行衰老研究时，通常需要依据某一公认的衰老学说，制造最接近临床衰老症状的动物模型，以用于抗衰老药物的筛选和研究。因此，建立成功的衰老动物模型，对于揭示衰老机制和研究抗衰老药物的作用机理有着十分重要的意义。衰老的代谢学说认为，新陈代谢是生命的本质，也是生命活动的基础，衰老是机体代谢障碍的结果，糖代谢在三大物质代谢中具有很重要的意义，糖代谢紊乱必然会引起心、肝、肾、脑等重要器官代谢异常，最终出现衰老。因此，在一定时间内，连续给动物注射大剂量的D－半乳糖，使机体细胞内半乳糖浓度增高，在醛糖还原酶的催化下，还原成半乳糖醇，这种物质不能被细胞进一步代谢而堆积在细胞内，影响正常渗透压，导致细胞肿胀、功能障碍、代谢紊乱，最终导致衰老的发生。
　　Christopher等人在1979年首先提出了半乳糖性白内障发生机理，是新陈代谢异常在晶体方面产生的病理变化。随后，国内学者利用大剂量D－半乳糖造成动物的糖代谢障碍，进而影响蛋白质代谢和脂类物质代谢，致使动物不仅出现老年性白内障，而且还出现晶体病变以外的其它组织、细胞一系列退行性变化，也符合人类自然衰老时所出现的症状。国内学者应用大、小鼠成功建立了D－半乳糖诱发的亚急性衰老模型，并探讨了其发病机理。进入20世纪90年代后，D－半乳糖致亚急性衰老模型的研究、应用日盛。本实验亦证实D－半乳糖诱导的亚急性衰老模型是可靠的衰老实验动物模型。
　　增龄使皮肤呈现渐进性老化，角质层变薄，皮肤水合能力下降，水分丧失增加，皮肤细织细胞水分减少，细胞皱缩、老化、组织缺水、萎缩，出现组织学结构和形态学改变而使皮肤出现细小皱纹。本实验研究结果证实，枸杞多糖能够增加皮肤组织的含水量，这正是其能改善皮肤老化状态的机制之一。随着年龄的增长，表皮细胞的分裂增值能力下降，细胞更新的速度将会减慢，表皮突变浅变平；真皮表现为真皮密度降低，相对细胞和血管数目减少。长期暴露于各种氧化应激和损伤DNA的因子中可导致人成纤维细胞的早衰。本研究表明，枸杞多糖具有改善皮肤组织学形态及结构的功能。