脚踝创伤性关节炎【血管紧张素Ⅱ对创伤愈合中成纤维细胞增殖影响的研究】

　　[摘要]目的：探讨血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）对创面愈合中成纤维细胞增殖的影响及不同浓度AngⅡ对创面作用的差异。方法：采用不同浓度AngⅡ作用于小鼠新鲜创面，应用流式细胞仪检测相同面积创面中S（DNA合成期）期成纤维细胞所占的比例。结果：与对照组相比，AngⅡ可有效促进创面中成纤维细胞的增殖，从而促进创面肉芽组织生长，使创面愈合加快。结论：AngⅡ可促使局部创面成纤维细胞增殖，从而加快创面愈合,且呈浓度依赖性。
　　[关键词]成纤维细胞；血管紧张素Ⅱ；创面愈合
　　[中图分类号]R619 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2011）04-0602-03
　　
　　Effects of angiotensin Ⅱ on proliferation of fibroblast in wound healing
　　HAN Xi-li,LI Hong-guang,ZHANG Bao-lin
　　(The First Hospital of Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,Shanxi,China )
　　
　　Abstract:Objective To study the effects of angiotensinⅡ（AngⅡ）on accelerating proliferation of fibroblast in wound healing and the difference of AngⅡ of different concentrations in different wounds. Methods AngⅡ of different magnitude concentrations effect on the fresh wounds of mice, then the flow cytometry detects the proportion of S（ DNA synthesis）phase fibroblasts of wounds in the same area.ResultsCompared with the control group, AngⅡ can effectively promote the proliferation of fibroblasts in wound healing, thus contribute to the growth of granulation, so that the wounds heal much faster. Conclusion AngⅡ can promote the fibroblast"s proliferation, thus speeding up the rate of wound healing,and the wounds healed with AngⅡ dose-dependently.
　　Key words:fibroblasts; angiotensin Ⅱ; wound healing
　　
　　创伤修复过程由细胞、细胞因子、细胞外基质等共同参与完成，并在机体调控下呈现高度有序性、完整性和网络性。创伤愈合的主要病理表现为瘢痕修复，而瘢痕的主要成分是增殖的成纤维细胞和细胞外基质的积聚，其机制尚未完全阐明。目前研究证明，细胞因子在创伤愈合中起着重要作用。AngⅡ是肾素一血管紧张素系统(rennin-angiotensin system，RAS)主要的生物活性肽。多年来，人们都习惯认为AngⅡ只是一种血管活性物质。然而，近年来已有越来越多的研究显示AngⅡ 还是一种多效应生长因子影响细胞的增殖、分化和凋亡，并在组织损伤修复和纤维化中起重要作用[1]。因此，我们推测AngⅡ可作用于局部创面而促进创面的愈合。通过观察在创伤愈合过程中高剂量组、中剂量组、低剂量组以及对照组皮肤全层缺损致伤模型伤口愈合的情况，利用荧光染料碘化吡啶（propidium iodide，PI）作为DNA的鉴定标志物，应用流式细胞仪检测合成器细胞所占比例，研究不同浓度的AngⅡ对创伤愈合过程中成纤维细胞增殖的影响，为AngⅡ作为一种促进创面的愈合药应用于临床提供理论依据。
　　
　　1材料和方法
　　1.1 实验用动物：SD雄性大鼠10只，体重175～200g，由山西医科大学生理教研室动物中心提供。
　　1.2 实验材料及主要仪器：血管紧张素Ⅱ、碘化吡啶（PI）、胰蛋白酶、脱氧核糖核酸酶（Ribonuclease，RNase）： 美国Sigma公司；磷酸缓冲盐溶液（Phosphate buffer solution，PBS）：北京中山生物公司；流式细胞仪；普通光学显微镜；低温离心机。
　　1.3动物全层皮肤缺损模型制备：所有实验鼠单笼喂养，自由饮水与摄食。实验当日禁食，麻醉后背部净毛；碘伏消毒，在脊柱两侧各旁1.0cm处以专用打孔器致伤，4个圆形创面，每个创面直径1.5cm，深至皮下。
　　1.4 动物分组与给药：将10只SD大鼠共40个创面，每只四个创面随机应用：①NS阴性对照组；②1×10-9mol/ml AngⅡ（低剂量）组；③1×10-8mol/ml AngⅡ（中剂量）组；④1×10-7 mol/ml AngⅡ（高剂量）组。每个创面按分组分别滴加相应浓度物质0.2ml，粘性媒介羧甲基纤维素、无菌纱布包扎，此后换药1次/日，直至伤后第5天的取样分析。
　　1.5 全层皮肤组织细胞周期及DNA含量分析：伤后第5天于每个创面边缘（创面与正常组织交界处）取1.0cm×1.0cm大小皮肤组织，去除皮下脂肪，剪碎，经筛网过滤、胰蛋白酶消化，加入PBS缓冲液，制成单细胞悬液。酒精固定,4℃下过夜，光学显微镜下将细胞浓度稀释到约106个/ml。加入RNase在37℃温箱30min，避光加入DNA特异性染料PI于0℃～4℃下避光染色1h，经流式细胞仪测每个样品中S期细胞所占比例。
　　1.6 统计学分析：采用SPSS13.0统计软件进行分析，所有数据用x±s表示, P 　　AngⅡ是RAS中最重要的效应肽，被认为是一个应激激素，在维持血压和水电解质平衡中起重要作用。近年来研究发现局部组织中存在AngⅡ，它在组织损伤修复及纤维化中发挥重要作用[5-7]。AngⅡ1型受体(AngiotensinⅡtype 1 respector,AT1R)组织分布广泛，且在整个生命期均有表达，在靶器官，AT1调节AngⅡ的绝大部分作用，如细胞生长、细胞外基质沉积等。2型受体(AngiotensinⅡtype 2 respector, AT2R)在胚胎期广泛表达，出生后迅速下降，维持在一个很低的水平，在某些病理情况下(如血管损伤、皮肤损伤等) AT2R的表达明显升高。最近国外学者报道了独立于血浆源性的Ang系统，即皮肤组织存在AngⅡ及其受体，皮肤的角质形成细胞能够合成AngⅡ[1]。国内最近也报道了人皮肤角质形成细胞表达血管紧张素转化酶(Angiotensin-con verting enzyme，ACE)，在增生性瘢痕中ACE的表达强度和AngⅡ产生明显增加[8]，提示AngⅡ可能在创伤愈合过程中发挥作用，然而AngⅡ局部应用促进创面愈合中成纤维细胞的分裂、增殖未见文献报道。
　　本研究采用流式细胞仪测定法证实AngⅡ局部应用可促进创面中成纤维细胞的分裂、增殖而达到愈合目的，且随AngⅡ浓度的升高，处于S期的成纤维细胞所占比例越大，峰值出现也越早。本研究有可能为AngⅡ在临床创面愈合的应用提供理论依据。但AngⅡ最适浓度及应用时间还不清楚，仍需进一步深入研究。
　　
　　[参考文献]
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　　[收稿日期]2010-10-26 [修回日期]2011-02-10
　　编辑/张惠娟