[血管钠肽对皮瓣碾压撕脱伤后血管内皮细胞通透性的影响] 皮瓣

　　[摘要]目的:观察血管钠肽对皮瓣碾压撕脱后血管内皮细胞通透性的影响。方法:39只SD大鼠用皮肤碾压撕脱伤模型机制作背部3cm×9cm 大小碾压撕脱皮瓣后随机分为生理盐水1ml/kg腹腔注射组,血管钠肽0.1mg/kg静脉注射组,地塞米松5mg/kg腹腔注射组,每组13只动物。各组给药时间点为术后2h、1天、2天和3天。大鼠的血清于术后12h、1天、2天和3天收集,用以体外内皮细胞通透性改变的检测。术后7天观察皮瓣成活面积。结果:各组皮瓣成活面积:生理盐水组37.42%±4.36%,血管钠肽组49.96%±2.32%,地塞米松组43.16%±4.13%;各组内皮细胞通透性改变:生理盐水组(6.65±0.09)μg/ml,血管钠肽组(5.50±0.11)μg/ml,地塞米松组(5.95±0.09)μg/ml。血管钠肽用药组术后7天皮瓣成活面积明显高于其它两组,内皮细胞通透性也较其它两组低,差异有统计学意义(P 　　1.1.2仪器:大鼠皮肤碾压撕脱伤模型机,西京医院全军整形外科研究所研制。荧光检测仪,日本日立公司。
　　1.1.3动物:SD大鼠39只,体重280～320g,购于第四军医大学实验动物中心。
　　1.2方法
　　1.2.1大鼠碾压撕脱皮瓣的制备[3]:1%戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠,剪除背部的毛发,75%酒精消毒,以鼠背中线为准,设计蒂位于尾侧,大小约为3cm×9cm的长方形任意皮瓣,切开皮肤至肉膜,从肉膜下掀起皮瓣。将制作好的大鼠背部任意皮瓣置于皮肤碾压撕脱伤模型机的电子天平上,开动电机,控制滑轮转速为50r/min,调节滑杆高度使得模型机作用于皮瓣的压力数值范围为2.0～2.5kg,推动滑动齿轮匀速碾压皮瓣,重复三次,以制作碾压撕脱皮瓣模型。
　　1.2.2实验分组:将大鼠随机分为3组,每组13只。组A(阴性对照)给予生理盐水1ml/kg 腹腔注射,组B给予血管钠肽0.1mg/kg 静脉注射,组C(阳性对照)给予地塞米松5mg/kg 腹腔注射。各组给药时间点为术后2h、1天、2天和3天。大鼠的血清于术后12h、1天、2天和 3天收集用以体外实验。
　　1.2.3皮瓣成活率计算:在皮瓣术后第7天,皮瓣成活区与坏死区已明确,用数码相机进行摄影,用Image-pro plus.v5.0图像分析系统,计算各组皮瓣成活率。
　　1.2.4脐静脉内皮细胞的培养与鉴定:参照文献方法[4],新鲜脐带取回后以细胞收集液冲洗至冲出液清亮。注入10～20ml预温至37℃的胶原酶溶液,置37℃孵箱内15～20min,用含20% 胎牛血清的RPMI-1640培养液约30ml冲洗,收集,500g×5min离心。加入RPMI-1640工作液(含20%胎牛血清,20ng/L血管内皮生长因子,2mmol/L L-谷氨酰胺, 100U/ml青霉素, 100μg/ml链霉素)重悬细胞,计数,将细胞接种于一次性塑料培养瓶,37℃、5%CO2空气常规培养。采用0.25%胰酶常规消化传代,细胞的鉴定采用VIII因子抗原检测法。
　　1.2.5体外内皮细胞通透性改变的检测:按照Nooteboom[5]所介绍的方法,大约按0.5ml完全培养基中含有105内皮细胞接种内皮细胞于Transwell Inserts双层小室的上室,同时1.5ml培养基加入下室。培养6天后在Transwell半透膜上形成融合的单层内皮细胞。换液后,200μl各组实验大鼠的血清与300μl完全培养液混合后加入上室,37℃孵育刺激过夜。将Transwell上室中的液体更换为罗丹明标记的右旋糖酐(250μg/ml) 0.5ml,于24h后取下室液体700μl,在荧光检测仪上测定(激发波长560nm,发射波长580nm)其荧光含量。
　　1.2.6 统计学处理:实验数据以x±s表示,用SPSS 11.0统计软件处理,采用方差分析,两两比较用SNK-q检验,P�0.05,有统计学差异。
　　
　　2结果
　　
　　2.1皮瓣成活率:各组皮瓣成活率如下:组A(37.42±4.36)%, 组B (49.96±2.32)%, 组C (43.16±4.13)%。血管钠肽组与生理盐水和地塞米松组比较,皮瓣成活率增加有显著性差异 (P 　　
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　　[收稿日期]2009-10-10 [修回日期]2009-12-16
　　编辑/张惠娟