成纤维细胞名词解释 姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

　　[摘要]目的：观察姜黄素对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的作用，以寻找治疗人瘢痕疙瘩的有效药物。方法：体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞，分别应用MTT比色法和羟脯氨酸比色法检测姜黄素作用后细胞增殖及胶原合成的变化。结果：和对照组相比，姜黄素能够显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原合成（P＜0.01）。结论：姜黄素具有体外抗瘢痕疙瘩的作用，可能成为治疗瘢痕疙瘩的有效药物。
　　[关键词]姜黄素；瘢痕疙瘩；成纤维细胞；增殖；胶原合成
　　[中图分类号]Q813.1[文献标识码]A[文章编号]1008-6455（2007）11-1543-02
　　
　　Effect of curcumin on the proliferation of fibroblast and synthesis of collagen in keloid
　　HU Xiao-long,HU Da-hai,GUAN Hao,YANG Chong-zhi,HAN Yong-bin,JI Peng
　　（Department of Burn Surgery, Xijing Hospital, the Fourth Military University,Xi＇an710032,Shaanxi,China）
　　
　　Abstract:ObjectiveTo observe the effects of curcumin on the proliferation and collagen synthesis of the cultured keloid fibroblasts in vitro and seek the effective drug for human keloid.MethodsThe human keloid fibroblasts were cultured in vitro. The MTT test and hydroxyproline chromatometry were used to detect the effects of curcumin on the proliferation and collagen synthesis of the cultured keloid fibroblasts. ResultsWhen compared with the control groups, curcumin can markedly inhibit the proliferation and collagen synthesis of the cultured keloid fibroblasts（P＜0.01）. ConclusionCurcumin has anti-keloid effects in vitro and may be an effective drug for human keloid.
　　Key words: curcumin; keloid; fibroblast; proliferation; collagen synthesis
　　
　　瘢痕疙瘩是结缔组织过度增生和透明变性引起的良性皮肤肿瘤。瘢痕疙瘩罕见自然消退，其防治尚无有效方法。成纤维细胞是瘢痕形成的效应细胞，是研究的重点。姜黄素（curcumin）是从中药姜黄中提取的一种酚类色素，研究表明姜黄素具有广泛药理作用，如抗氧化、抗肿瘤、抗缺血、降血脂等。已有研究表明姜黄素具有抗肝、肾纤维化的作用[1-2]，但是其对瘢痕疙瘩作用方面的研究尚未见报道。本实验以体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞（keloid fibroblasts, KFB）为研究对象，探讨姜黄素对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的影响。
　　
　　1材料和方法
　　
　　1.1 主要试剂和仪器：姜黄素与MTT显色剂（Sigma公司，美国），二甲基亚砜（Amresco公司，美国），DMEM（Gibco公司，美国），小牛血清(杭州四季青)，羟脯氨酸试剂盒（南京建成生物工程研究所），DU800型分光光度计（Beckman Coulter，美国），IX71型倒置式显微镜（Olympus，日本），680型酶标仪（Bio-Rad，日本）。
　　1.2细胞培养和实验分组：瘢痕疙瘩的诊断参照1992年Darzi标准。入选标准还包括，2年内未接受药物注射、放疗或外科治疗，l个月内未予任何外用药治疗，无系统疾病者。标本均来源于我科瘢痕疙瘩患者手术标本（经患者知情同意），选取年轻患者、病程短且生长活跃的瘢痕疙瘩组织用于细胞培养。共收集5份标本，男3例，女2例；年龄16～36岁，平均(24±5.3)岁；病程1～4年。原代培养采用组织块贴壁法[3]进行，待细胞融合至70%～80%时，常规消化、传代。本实验取第3～6代生长状态良好的处于对数生长期的细胞用于实验。
　　姜黄素不溶于水，易溶于二甲基亚砜溶液中，将配好的姜黄素二甲基亚砜溶液（浓度为4mmol/L）以5％小牛血清的DMEM培养液调整至所需浓度。预试验结果表明，40μmol/L姜黄素所含二甲基亚砜的量未使KFB的生长受到抑制。实验分4组：第1组：空白对照组；第2组：姜黄素5μmol/L组；第3组：姜黄素10μmol/L组；第4组：姜黄素20μmol/L组。
　　1.3细胞增殖的测定：采用MTT法测定。调整消化所得细胞浓度为2×104/ml，每孔100μl接种于96孔板中，过夜后弃上清，加入含10%小牛血清的DMEM培养24h，细胞达70%-80%融合时，弃上清，再分别加入终浓度为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L姜黄素培养基200μl为实验组，加入含有等量溶剂的5％小牛血清DMEM培养基200μl为对照组，每组重复6孔。继续培养48h后加入MTT 20μl，37℃，5%CO2孵育4h，终止培养，吸弃上清，每孔加入150μl 二甲基亚砜，振荡10min，酶标仪于570nm测吸光度(A)值。
　　1.4细胞上清液中胶原含量的测定：采用羟脯氨酸比色法。将KFB以5×104/ml密度接种于24孔板，每孔1ml，置5%CO2、37℃恒温培养箱中培养48h后，弃10%小牛血清的DMEM培养基，以无血清DMEM同步化24h，弃去各孔培养液，实验组加入终浓度为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L姜黄素培养基，对照组加含有等量溶剂的5％小牛血清DMEM培养基，每孔1ml。培养48h后吸取上清液，严格按照羟脯氨酸试剂盒说明测定各管吸光度。实验重复3次。
　　1.5 统计学分析：采用SPSS11.0统计软件包进行统计学处理，实验数据以均数±标准差表示，采用完全随机设计资料的方差分析行LSD-t检验，P＜0.05为有统计学意义。
　　
　　2结果
　　
　　2.1 细胞增殖：应用MTT比色法测定KFB增殖活力，结果见表1。姜黄素在各实验浓度作用KFB 48h后，均有明显抑制作用，且具有浓度依赖性，与空白对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。
　　
　　2.2 细胞胶原合成：应用羟脯氨酸比色法检测KFB上清液中胶原的含量，结果见表2。姜黄素在各实验浓度作用KFB 48h后，上清液中胶原含量明显降低，且具有浓度依赖性，与空白对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。
　　
　　3讨论
　　
　　创伤愈合是人体组织修复的过程,而瘢痕超常形成是过度愈合或愈合紊乱的结果,成纤维细胞大量增殖和胶原蛋白过度合成是形成瘢痕疙瘩的主要原因。研究表明,任何非手术治疗瘢痕有效的方法，均应直接或间接针对抑制成纤维细胞增殖和调整胶原代谢异常这一重要环节。
　　姜黄素是从姜科姜黄属多年生的草本植物姜黄中提取的天然色素，为姜黄的主要活性成分。大量研究证明，姜黄素具抗氧化、促进创伤愈合、调节血管生成、抗肿瘤等多方面药理作用[4]。近年来研究表明姜黄素具抗纤维化作用。李银生等[5]研究表明姜黄素可抑制肺纤维化大鼠肺组织的胶原沉积,在延缓肺纤维化形成中起重要作用,其作用机制可能是通过抑制转化生长因子β1的表达来实现。刘剑毅等[6]研究表明姜黄素能够显著抑制体外人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成。本研究探讨姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响。结果发现，姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖过程有明显抑制作用，且细胞抑制情况与姜黄素浓度变化呈量效关系。而且姜黄素作用后瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成也相应降低。因此显示具有体外抗瘢痕疙瘩的效应，但用姜黄素治疗瘢痕疙瘩尚未见报道,其作用的具体机制与途径尚需进一步研究。
　　
　　[参考文献]
　　[1]平 键, 成扬, 徐列明,等.姜黄素激活PPARγ下调肝星状细胞α-SMA和Ⅰ型胶原的基因表达[J].中国中西医结合消化杂志, 2006,14(4): 215-218.
　　[2]张俊, 刘晓城, 周文祥,等.姜黄素对大鼠肾系膜细胞结缔组织生长因子表达的影响[J].华中科技大学学报(医学版), 2006,35(1): 99-102.
　　[3]陈晓栋, 王强, 张国成,等.血小板衍化生长因子受体蛋自在瘢痕疙瘩中的表达[J].中华皮肤科杂志, 2003,36(12): 687-689.
　　[4]Maheshwari RK, Singh AK, Gaddipati J,et al. Multiple biological activities of curcumin:a short review[J]. Life Sci,2006,78(18): 2081-2087.
　　[5]李银生, 牛建昭, 王继峰,等.姜黄素对肺纤维化大鼠肺组织胶原沉积及转化生长因子β1 表达的影响[J].中华中医药学刊, 2007,25(1): 55-57.
　　[6]刘剑毅, 李世荣, 姚恒,等.姜黄素体外抗人增生性瘢痕纤维化的实验研究[J].中国美容医学, 2006,15(10): 1110-1111.
　　
　　[收稿日期]2007-07-26[修回日期]2007-10-30
　　编辑/张惠娟