THBS-1、PPBP联合CTP对缺血性脑卒中的诊断价值分析*

路 康，吴文锋，许 倩，常兴芳

河北省第八人民医院/河北省老年病医院检验科，河北石家庄 050011

缺血性脑卒中是临床最为常见的缺血性脑血管疾病，有高发病率、高致残率以及高致死率的特点，严重威胁患者的生命安全[1-2]。快速、有效地诊断缺血性脑卒中对患者的治疗及预后有重要意义。临床诊断缺血性脑卒中主要是根据患者的临床特点及影像学检查[3-4]。CT灌注成像(CTP)的原理是经静脉注入对比剂后对脑组织进行动态CT扫描，获得的数据经过处理，就可以得到脑组织的血流灌注状态。该方法已被证明具有良好的准确性，目前广泛被用于急诊诊断早期缺血性脑卒中[5-6]。近年来，蛋白标志物的检测为更准确地预防和诊断缺血性脑卒中提供了方法[7-8]。基于此，本研究对血小板反应蛋白1(THBS-1)、前血小板碱性蛋白(PPBP)检测联合CTP用于缺血性脑卒中诊断的价值进行探讨。

1.1一般资料 将本院2020年1月至2021年1月收治的缺血性脑卒中患者136例纳入研究作为研究组。另外，选取同期于本院体检的健康志愿者100例作为对照组。研究组：男75例、女性61例，年龄43～70岁、平均(56.5±10.8)岁。对照组：男56例、女44例，年龄44～68岁、平均(56.1±9.5)岁。所有患者一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。纳入标准：所有缺血性脑卒中患者均符合中华医学会中对缺血性脑卒中的诊断标准[9]；
所有患者均通过CT、核磁共振(MRI)等影像学检查确诊为缺血性脑卒中。排除标准：(1)合并心、肝、肾等器官功能不全者；
(2)有凝血功能障碍者；
(3)合并呼吸系统疾病者；
(4)依从性差，无法配合研究者。所有纳入研究者均对本研究知情同意。本研究经本院伦理委员会审批通过。

1.2方法

1.2.1标本采集 采用3.2%枸橼酸抗凝采血管抽取纳入研究者清晨空腹肘静脉血标本。静脉血标本于4 ℃、4 000 r/min的条件下离心10 min，收集上清液之后在冰上进行分装，随后于-80 ℃环境下保存备用。

1.2.2CTP检查 通过飞利浦Brilliance 64排多层螺旋CT进行CTP检查。患者取仰卧位，行头颅CT平扫，注射50 mL碘普罗胺(速率为5 mL/s)，延迟2 s后进行扫描，设置扫描层厚：0.625 mm，重建层厚：5 mm，螺距：0.8，视野：200 mm，扫描范围为垂体窝下缘向颅顶96 mm，扫描线与颅底平行，管电压：80 kV，管电流：120 mA，单次扫描时间：1.5 s，循环时间为3 s，间隔1.5 s，连续扫描18期。扫描后将容积数据传输至工作站通过CTP软件包进行分析处理，绘制时间-密度曲线，获取平均通过时间(MTT)、达峰时间(TTP)、脑血容量(CBV)、脑血流(CBF)。

1.2.3THBS-1、PPBP检测 从血浆中提取蛋白之后，采用Western blot对THBS-1、PPBP进行检测。每孔添加20 μg从血浆中提取的蛋白，加入蛋白缓冲液，随后进行10 min电泳，然后将电转膜浸泡在10%的牛奶中，在常温环境下封存90 min。加入稀释后的一抗孵育1 d，次日取出之后使用TBST冲洗，加入二抗放置60 min，然后开始清洗与显色。采用β-actin作为内参，对THBS-1、PPBP蛋白的相对表达水平进行检测。

2.1两组间CTP参数比较 与对照组相比，研究组MTT、TTP增加，CBV、CBF减少，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 两组CTP参数的比较

2.2不同严重程度缺血性脑卒中患者的CTP参数比较 与轻度组比较，中、重度组缺血性脑卒患者MTT、TTP增加，CBV、CBF减少，差异均有统计学意义(P<0.05)；
与中度组相比，重度组MTT、TTP增加，CBV、CBF减少，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同严重程度缺血性脑卒CTP参数对比

2.3两组间THBS-1、PPBP蛋白表达水平比较 与对照组比较，研究组THBS-1、PPBP蛋白相对表达水平升高(P<0.05)，见表3、图1。

表3 两组THBS-1、PPBP蛋白相对表达水平比较

注：A为对照组；
B为研究组。

2.4不同严重程度缺血性脑卒患者THBS-1、PPBP蛋白表达水平比较 与轻度组相比，中、重度组THBS-1、PPBP蛋白相对表达水平增加(P<0.05)；
与中度组相比，重度组THBS-1、PPB相对表达水平增加(P<0.05)。见表4。

表4 不同严重程度缺血性脑卒THBS-1、PPBP蛋白相对表达水平比较

2.5CTP参数及THBS-1、PPBP蛋白表达水平与缺血性脑卒中病情严重程度的关系 MTT、TTP、THBS-1、PPBP均与缺血性脑卒中病情严重程度呈正相关(r>0，P<0.05)，而CBV、CBF与缺血性脑卒中病情严重程度呈负相关(r<0，P<0.05)，见表5。

表5 MTT、TTP、CBV、CBF、THBS-1、PPBP与缺血性脑卒中病情严重程度的相关性

2.6CTP参数与THBS-1、PPBP蛋白表达水平的相关性 MTT、TTP与THBS-1、PPB均呈正相关(r>0，P<0.05)，CBV、CBF与PCBV、CBF均呈负相关(r<0，P<0.05)，见表6。

表6 CTP参数与THBS-1、PPBP蛋白表达水平的相关性(r)

2.7THBS-1、PPBP、MTT、TTP、CBV、CBF联合用于缺血性脑卒诊断的ROC曲线分析 与THBS-1、PPBP、MTT、TTP、CBV、CBF单项诊断相比，六项联合对缺血性脑卒中的诊断价值更高，差异有统计学意义(P<0.05)，见表7、图2。

表7 THBS-1、PPBP、MTT、TTP、CBV、CBF联合对缺血性脑卒中的诊断价值分析

图2 THBS-1、PPBP、MTT、TTP、CBV、CBF单独和联合用于缺血性脑卒中诊断的ROC曲线

缺血性脑卒中的发生严重威胁患者身心健康及生命安全，给患者家庭带来经济负担[10-11]。随着人口老龄化的加快，缺血性脑卒中的危害越来越明显。因此，研究缺血性脑卒中的防治有重大价值[12]。

随着医学影像技术的进步，CTP、CT血管造影、CT平扫等手段在脑卒中诊断中的应用越来越广泛[13]。CTP可对脑卒中患者脑灌注状态、梗死面积进行检查，与MRI检查结果具有较高的一致性。有研究显示，缺血性脑卒中发生后，患者脑血流量会明显下降，CBV、CBF水平随之降低，进而导致MTT、TTP延长，并且与缺血性脑卒中严重程度有关[14-16]。造成参数变化的可能原因：早期主干供血动脉出现栓塞时，代偿机制开始发挥作用，侧支循环开始供给，由于侧支循环代偿血流路线较长,导致血流到达组织的时间延长[17-18]。CTP可在短时间内完成对全脑血管、灌注情况的评价[19]。本研究结果显示：缺血性脑卒中患者CBV、CBF减少，MTT、TTP增加，随着病情严重程度的增加，CBV、CBF减少，MTT、TTP增加，表明缺血性脑卒中患者CTP参数存在异常，而且与病情严重程度相关，提示CBV、CBF、MTT、TTP可作为缺血性脑卒中诊断的有效参数。

THBS-1作为一种多功能细胞外基质蛋白，广泛表达于人体组织细胞。THBS-1能够与特定结构域的多个不同蛋白多糖、细胞表面受体相互作用，从而发挥出不同的生物学效应。THBS-1作为一种有效的血管生成调节因子，能够抑制内皮细胞的迁移及细胞外基质中血管内皮生长因子的释放。有研究发现，THBS-1参与了血小板的聚集以及受限血管处血栓生成[20]。赵新玲等[10]报道，急性缺血性脑卒中患者THBS-1表达异常升高，对THBS-1进行检测有助于对急性缺血性脑卒中进行诊断及预后评估，本研究的结果与该报道一致。

PPBP属于CXC趋化因子家族的血小板衍生生长因子，能够调节N-甲基-D-天冬氨酸受体的功能，从而减轻大脑中动脉梗死后的脑损伤。PPBP还与多种疾病的病理生理机制相关，如诱导炎症应答、促进动脉粥样硬化斑块的形成[21-22]。本研究结果中，缺血性脑卒中患者PPBP表达异常升高，与缺血性脑卒中的严重程度密切相关，对其进行检测有助于对缺血性脑卒中进行准确诊断。

虽然本研究结果表明THBS-1、PPBP蛋白表达水平与CTP参数相关，可用于缺血性脑卒中的诊断，但本研究纳入研究的样本量较少，有一定的局限性，在数据统计时可能存在一定的偏倚，因此本研究的结果还需后续研究进一步证实。

综上所述，CTP、THBS-1、PPBP有助于缺血性脑卒中的诊断，CTP参数与THBS-1、PPBP蛋白表达水平相关，可用于患者疾病情况的评估，值得临床推广。