丁氟螨酯在枸杞上的储藏稳定性和残留消解研究

杨 静，吴 燕，刘 霞，陈 翔，赵子丹，苟春林

（宁夏农产品质量标准与检测技术研究所，宁夏回族自治区农产品质量安全标准研究与评价重点实验室，宁夏 银川 750002）

枸杞含有大量的营养物质，具有美容养颜、保肝明目等多种保健功效[1-3]。它作为宁夏的特色农产品，深受大众喜爱，但在生长过程中易受到病虫害侵染[4-7]。丁氟螨酯作为一种新型酰基杀螨剂，主要用于蔬菜、茶树、果树等农作物和花卉的螨类防治[8-11]，与现有的杀虫剂无交互抗性[12-17]，对幼虫时期的螨类活性更高[18]。目前，我国丁氟螨酯仅在番茄、草莓和柑橘上有登记信息[19]。近年来，丁氟螨酯在农作物上的检测方法已有报道。张鸿超等[20]采用QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱技术测定了黄瓜中丁氟螨酯等6 种典型农药；
赵来成[21]采用超高效液质联用仪测定了草莓中丁氟螨酯等4 种杀螨剂残留量。但目前，关于枸杞中丁氟螨酯及其代谢物2-三氟甲基苯甲酸残留分析方法的研究尚未见报道。本文建立了枸杞中丁氟螨酯及其代谢物2-三氟甲基苯甲酸的QuEChERS-超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱检测方法，为该农药在枸杞上的登记提供理论依据，以期为丁氟螨酯在枸杞上科学、合理、安全的使用提供保障。

1.1 材料与设备

1.1.1 材料与试剂

丁氟螨酯标准品（纯度94.9%），上海安谱实验科技股份有限公司；
2-三氟甲基苯甲酸（纯度99.2%），上海甄准生物科技有限公司；
甲醇（色谱纯），德国默克公司；
氯化钠和无水硫酸镁（分析纯），国药集团化学试剂有限公司；
乙腈（色谱纯），美国Fisher 公司；
甲酸（色谱纯），光复精细化工研究所；
乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）、石墨化炭黑（GCB）和十八烷基硅烷键合硅胶（C18），均购于上海安谱实验科技股份有限公司。

1.1.2 仪器与设备

Thermo Quantum Access 液相色谱串联质谱仪，美国Thermo 公司；
T25 型高速分散机，MS3 digital 型涡旋混合器，德国IKA 公司；
TDL-40C 型离心机，上海安亭仪器厂；
XS205 型、PL202-L 型电子天平，梅特勒托利多科技（中国）有限公司。

1.2 方法

1.2.1 样品的制备与保存

将田间枸杞鲜果除去青果、病果、烂果、果梗、叶子等杂质，充分混匀后分成两份，一份用四分法缩分，取300 g 样品，直接装入样品容器中，贴好标签于-18 ℃冰柜冷冻保存，室内检测时解冻后打成匀浆状，待测。另一份制成枸杞干果，方法为：每公斤新鲜枸杞中直接加入10～20 g 食用级碳酸钠或碳酸氢钠，混匀，在封闭容器内放置20～30 min 进行脱蜡，再晾晒制干，贴好标签后于-18 ℃冰柜冷冻保存，室内检测时加液氮粉碎成粉末状，待测。

1.2.2 标准溶液配制及标准曲线绘制

用甲醇将丁氟螨酯、2-三氟甲基苯甲酸标准品分别配制成质量浓度为1 000 mg/L 的标样储备液，分别移取单标储备液各0.1 mL 配制成10 mg/L 的混合标准储备液，于-18 ℃避光保存。上机测定0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L 系列的标准溶液，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

1.2.3 样品前处理

1.2.3.1 枸杞鲜果

将采集的枸杞鲜果用组织捣碎机匀浆。称取匀浆样品10.00 g 置于50 mL 具塞离心管中，加入20.0 mL乙腈后匀浆2 min，然后加入4.00 g 氯化钠，振摇约2 min，以4 000 r/min 离心6 min，吸取2 mL 上清液于盛有100 mg C18、100 mg MgSO4和5 mg GCB 的离心管中涡旋1 min，于4 000 r/min 离心5 min，上清液过0.22 μm 滤膜，待测。

1.2.3.2 枸杞干果

将另一份枸杞鲜果制干后，加液氮粉碎成粉末状。称取枸杞干果5.00 g 于50 mL 离心管中，加入10.00 mL 水，浸泡30 min 后加入20.0 mL 乙腈，匀浆2min，再加入4.00g 氯化钠，振摇约2min，以4 000r/min离心6min，吸取2mL 上清液于盛有100mg C18、100 mg MgSO4和5 mg GCB 的离心管中涡旋1 min，以4 000 r/min 离心5 min，上清液过0.22 μm 滤膜，待测。

1.2.4 添加回收试验

向枸杞鲜果和干果空白样品中分别添加0.01、0.1、1.0 mg/kg 3 个水平的丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸标准溶液，按照所建立的方法进行测定。

1.2.5 稳定性试验

分别称取枸杞鲜果空白样品10.00 g，枸杞干果空白样品5.00 g 于50 mL 离心管中，按照0.5 mg/kg的添加水平直接在空白样品中分别添加丁氟螨酯及其代谢物2-三氟甲基苯甲酸标准溶液，将离心管密封保存于-18 ℃冰箱中。

1.2.6 仪器条件

1.2.6.1 液相色谱条件

色谱柱：ZORBAX Eclipse plus C18（100 mm×2.1 mm,1.8 μm）；
柱温：45 ℃；
流动相：甲醇-0.1%甲酸水；
流速：0.30 mL/min；
进样量：2.0 μL。洗脱方式为梯度洗脱，洗脱条件见表1。

表1 液相色谱条件Table 1 Liquid chromatographi conditions

1.2.6.2 质谱（MS）条件

离子源：ESI+；
喷雾电压：3.5 kV；
鞘气：30 arb；
辅气：10 arb；
毛细管传输温度：350 ℃；
碰撞压力：0.199 5 Pa；
扫描模式：选择离子监测（SRM）。质谱条件见表2。

表2 质谱条件Table 2 MS parameters

1.2.7 数据处理

使用Excel 2010 软件分析试验数据。

2.1 方法验证

分别准确吸取质量浓度为0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L 的丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸标准溶液。在“1.2.6”检测条件下进行测定。图1 为0.1 mg/L 丁氟螨酯及其代谢物的色谱图。以丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸的质量浓度为横坐标（x），峰面积为纵坐标（y），制作标准曲线。得到丁氟螨酯线性方程：y=8×106x+217 058，r=0.998 7；
2-三氟甲基苯甲酸线性方程：y=2×106x+47 861，r=0.997 3。可见，丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸在0.01～1.0 mg/L 范围内相关系数均大于0.99，线性关系较好。

图1 0.1 mg/L 丁氟螨酯及其代谢物的色谱图Fig.1 Chromatograms of cyflumetofen and its metabolites(0.1 mg/L)

在不含目标化合物的枸杞鲜果和干果中分别添加0.1 mg/kg 的丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸标准溶液，结果见图2。根据添加回收率试验，丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸的方法定量限均为0.01 mg/kg。

图2 枸杞中丁氟螨酯及其代谢物的色谱图Fig.2 The chromatograms of cyflumetofen and its metabolite in Goji berries

2.2 方法回收率和精密度

在枸杞鲜果和干果中分别添加0.01、0.1、1.0 mg/kg 3 个质量分数水平的丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸标准品，按“1.2.3”中前处理方法对样品进行处理、测定，计算回收率和相对标准偏差，结果见表3。丁氟螨酯在枸杞鲜果中平均回收率在100.4%～102.7%之间，相对标准偏差在2.6%～11.6%之间，在枸杞干果中平均回收率在80.7%～103.2%之间，相对标准偏差在2.5%～7.1%之间。2-三氟甲基苯甲酸在枸杞鲜果中平均回收率在87.2%～110.0%之间，相对标准偏差在2.1%～6.2%之间，在枸杞干果中平均回收率在95.0%～111.1%之间，相对标准偏差在2.3%～6.1%之间。回收率和精密度均能够满足枸杞中丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸的检测要求，符合农药残留分析的要求[22-23]。

表3 枸杞中丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸的添加回收率及相对标准偏差(n=5)Table 3 Recovery rate and relative standard deviations of cyflumetofen and its metabolite in Goji berries(n=5)

2.3 丁氟螨酯及其代谢物在枸杞中的稳定性

样品制备后，对丁氟螨酯及其代谢物进行测定，取样间隔为0 d、1 个月、3 个月、6 个月、8 个月、12 个月、15 个月，检测结果如表4 所示。枸杞鲜果中丁氟螨酯的降解率为10%～23%，2-三氟甲基苯甲酸的降解率为2%～27%；
枸杞干果中丁氟螨酯的降解率为2%～26%，2-三氟甲基苯甲酸的降解率为3%～24%。每个取样间隔的储藏试验样品中丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸的降解率均小于30%，表明在储藏温度低于-18 ℃、储藏时间为15 个月的试验期间，丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸在枸杞鲜果、枸杞干果基质中均比较稳定。

表4 丁氟螨酯及其代谢物在枸杞中的降解率Table 4 The degradation rate of cyflumetofen and its metabolite in Goji berries单位：%

2.4 丁氟螨酯在枸杞上的消解动态

在宁夏和青海两地开展残留消解试验，将20%丁氟螨酯悬浮剂以1 000 倍液（有效成分：200 mg/kg）喷施于枸杞上，分别采集药后2 h 及3、5、10、14、21 d的枸杞样品，测定所采集样品中丁氟螨酯的残留量，结果如图3 所示。青海地区的丁氟螨酯残留量为0.089～1.400 mg/kg，消解动态方程为Ct=0.729 4 e-0.122t，半衰期为5.7 d；
宁夏地区的丁氟螨酯残留量为0.57～1.80 mg/kg，消解动态方程为Ct=1.472 8 e-0.042t，半衰期为16.5 d。消解动态的试验结果表明：丁氟螨酯在枸杞中的残留量随着储藏时间的延长而降低，且该农药残留量与时间呈指数关系，其消解动态曲线符合一级动态学方程Ct=C0e-kt。宁夏地区丁氟螨酯残留量比青海地区高，且降解速率也较慢，说明枸杞生长环境对丁氟螨酯的降解有一定影响。

图3 丁氟螨酯在枸杞上的消解动态曲线Fig.3 Digestion dynamic curve of cyflumetofen in Goji berries

本文建立了一种QuEChERS-超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱检测枸杞中丁氟螨酯及其代谢物的方法。在储藏温度-18 ℃、储藏时间为15 个月的试验期间，丁氟螨酯及其代谢物在枸杞基质中比较稳定。消解动态试验表明，环境对枸杞中丁氟螨酯的降解有一定影响。该方法操作简单快速，准确度和精密度均较高，可用于枸杞中丁氟螨酯及其代谢物的检测，也为其他农作物中丁氟螨酯及其代谢物的残留检测提供了参考依据。