南药三桠苦研究进展

李静宇王继华张朝玉蔡时可陈世亮梅瑜

(1.广东省农作遗传改良重点实验室/广东省农业科学院作物研究所，广东 广州 510640；

2.广东省道地南药资源保护与利用工程中心，广东 广州 510640；
3.南雄市乡村振兴服务中心,广东 南雄 512400；
4.阳西县新农庄种养专业合作社，广东 阳江 529800)

三桠苦[Melicope pteleifolia(champ.ex Benth.)]，是芸香科蜜茱萸属的一种植物，也称三丫苦、三叉苦、小黄散等。三桠苦分布非常广泛，生长于广东、广西、海南、福建、台湾、贵州及云南南部等地，多生长于海拔2000m的较隐蔽潮湿的山谷或灌木丛中。三桠苦整株都有类似柑橘味的香气，是我国南方地区重要中草药。目前市场销售的三桠苦药材的主要产于广东和广西[1]。三桠苦的根、茎、枝和叶均可入药，最早记载三桠苦的书籍为《山草药指南》，其性苦寒，具有清热解毒、祛风除湿、消肿止痛等功效，主要用于治疗咽喉肿痛、风湿骨痛、感冒发热、咽喉炎、疟疾、黄疽型肝炎、湿疹、皮炎和疮疡等[2]。研究表明，三桠苦中含有生物碱类、黄酮类、挥发油等具有重要生物活性的化合物，有抑菌、抗炎、抗肿瘤、抗氧化等作用[3]。三桠苦在临床上具有广泛应用，目前已开发出感冒灵、三九胃泰、三金片等30多种药剂[4]，极具市场前景。本文综述了近年来生药学、化学成分、药理作用等方面的现状及研究进展，以期为三桠苦的深入研究和开发利用提供参考。

1.1 形态学

三桠苦为芸香科常绿灌木或小乔木,株高约1.5～6m,茎杆为圆柱状，树皮呈灰白色，有长圆形皮孔，嫩枝绿色，整株有微香。叶片为对生三叶，形状为长圆状且有披针形，长约6～12cm,宽约2～6cm,有纸质质感,先端钝尖,叶片边缘有小不规则波浪形，叶片上面呈褐绿色，下面色稍浅为黄绿色，有透明腺点，基部略偏斜，逐渐延伸成小而短的小叶柄；
叶柄长约3～10cm，叶柄部位呈膨大球状；
伞房状圆锥花序腋生。花小，颜色为黄白色；
蓇葖果常有2～3个，稀疏的为1～2个，外果皮暗黄褐色至红褐色，有乳点；
种子为卵状球形，具有黑色光泽[5]。三桠苦，广泛分布于我国南方各地，在自然状态下以种子繁殖为主，多见散生，生境特征差异性亦较为明显，生长于低海拔至中海拔的丘陵、平原、山地、溪边的疏林或灌木丛中，种质资源的遗传多样性较为丰富。

1.2 分子生药学

目前关于三桠苦分子生药学的研究较少。廖小庭等以三桠苦幼苗根、茎、叶混合样品为对象,进行转录组测序和组装，共获得67956条unigenes。在NR、Swiss-port、KOG、KEGG数据库中进行比对，总给获得参与生物过程、细胞组分和分子功能3个GO类别的47个小条目的注释信息,其中有9807条unigenes注释到130个KEGG代谢通路中,筛选到19个相关次生代谢通路,预测了56个植物转录因子家族;利用MISA软件发现了7748个SSRs,其中三碱基重复SSRs数量最丰富为4117个，为后续三桠苦功能基因的挖掘、次生代谢途径解析及其调控机制研究奠定了基础[6]。罗登花对广东省三桠苦种质资源进行收集和调查，为三桠苦药材质量控制，完成了13个不同居群三桠苦种质资源的DNA指纹图谱，并根据三桠苦种质资源亲缘优化建立了白鲜碱、茵芋碱和总黄酮的含量测定方法及茎HPLC指纹图谱方法；
并发现不同野生居群及不同部位三桠苦药材质量差异较大，根和茎的化学成分种类相似，可等同入药，而带叶嫩枝与根及茎的化学成分差异明显，应分开入药[7]。

三桠苦包含的主要功能活性成分为生物碱类、黄酮类、挥发油等化合物。国内外很多学者对三桠苦中化学成分进行鉴定和分离。从乙醇提取物中分离鉴定出3，7，3′-三甲氧基槲皮素、3-异戊烯基伞形花内酯、7-去甲基软木花椒素、β-谷甾醇、3，7-二甲氧基山柰酚、吴茱萸春、芝麻素、p-O-香叶基香豆、2,4,6-三羟基苯乙酮-3,5-二-C-β-D-葡萄糖苷、2,4,6-三羟基苯乙酮-3,5-二-C-β(6′-O-E-对香豆酰基)-D-葡萄糖苷、2,4,6-三羟基苯乙酮-3,5-二-C-β(6′-O-Z-对香豆酰基)-D-葡萄糖苷[8]。高幼衡等第1次从三桠苦中分离出赤式-3-(1′,2′,3′-三羟基)异戊基-7-羟基香豆素，也第1次从三桠苦中分离到β胡萝卜苷[9]。李斯达等首次从三桠苦中分离得到11个化合物，分别鉴定为大黄素甲醚、豆甾-3,5-二烯-7-酮、β-谷甾酮、(24R)-乙基-3β,5α,6β-三羟基胆甾烷、dihydroxanthyletin、正二十烷酸甲酯、大黄素、(+)-marmesin、udicoumarin C、3-(2′,3′-二羟基)异戊基-7-羟基香豆素、4-甲基喹啉酮[10]。彭德乾等利用硅胶柱层析分离纯化三桠苦无水乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物，解谱鉴定出6个首次在三桠苦枝叶中鉴定到的单体化合物，分别是异吴茱萸酮酚、异吴茱萸酮酚甲醚、3,5-二羟基-4-乙氧基-6-乙酰基-7-甲氧基-2,2-二甲基苯并二氢吡喃、(cis)-3,4,5-三羟基-6-乙酰基-7-甲氧基-2,2-二甲基色烷和(trans)-3,4-二羟基-5-甲氧基-6-乙酰基-7-甲氧基-2,2-二甲基色烷和对羟基苯甲酸丁酯[11]。朱盛华等从三桠苦乙醇提取物的醋酸乙酯部位首次分离出4个化合物，山奈酚-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、异鼠李素-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷和山奈酚-3-O-β-D-葡萄吡喃糖苷[12]。罗桂花等采用响应面法探索从三叉苦中提取总黄酮的最佳工艺条件，发现乙醇体积分数90%，液料比10mL·g-1，提取时间30min，提取率达到2.99%[13]。

杨树娟等研究比较了我国南方不同产地、不同季节、不同部位中的6种成分分布情况，发现其分布差异很大，云南景谷和金平产三桠苦叶中吴茱萸春含量较高，而芝麻素仅在云南西双版纳三桠苦叶中检测到[14]。臧彬如等采用高效液相色谱(HPLC)法对广西地区12种不同产地和9种炮制品的三桠苦茎中的吴茱萸春碱成分的含量进行了分析，发现不同炮制品吴茱萸春碱含量:蜜炙>炒黄>烘干>酒炙>晒干>盐炙>炒焦>醋炙>阴干;不同产地吴茱萸春碱含量:S9>S10>S7>S2>S12>S3>S8>S6>S5>S4>S1>S11[15]。李洪福等利用HPLC法，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，洗脱液为乙腈-醋酸水，测定三桠苦中异吴茱萸酮酚含量，设定体积流量为1.0mL·min-1，柱温30℃，检测波长为230nm，测定含量为29.5～442.8μg，该方法的平均回收率为103.9%，RSD=0.90%[16]。张军峰等采用微波消解技术ICP-MS法测定了三桠苦组织中的微量元素的含量，此法各元素的检出范围为0.007～0.883mg·L-1，回收率为81.1%～115.1%，发现三桠苦植物的根、茎、叶中含有较高的Mg、Mn、Fe等微量元素，具有一定的药用价值[17]。

3.1 降尿酸

胡向阳等的研究给予三桠苦治疗组口服广东三桠苦叶膜分离提取物有较好降低尿酸作用，1个月的治疗期间肝、肾功能正常，其治疗高尿酸药效值得关注[18]。

3.2 抗炎作用

林紫微等发现三桠苦水提物中、高剂量能抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀，中剂量对大鼠足肿胀有明显的抑制作用，在炎症发生4h后效果最明显。水提物中、高剂量对大鼠血清中肿瘤坏死因子TNF和白细胞介素IL-1β的表达有抑制作用，TNF-α较模型组降低显著，得出结论海南三桠苦水提物可能通过抑制TNF-α和IL-1β的生成发挥抗炎作用[19]。Yuya Kakumu等基于分子网络的发现了三桠苦中的抗炎色烯二聚体[20]。班晓敏等发现，紫外线结合三叉苦贴敷散对小儿疱疹性咽峡炎有较好的辅助治疗效果[21]。

3.3 抗肿瘤

褚晨亮等研究岭南中药三桠苦生物碱及其抗肿瘤活性成分，从三桠苦中分离鉴定出8个生物碱类化合物作为研究对象，利用CCK-8法分析8个生物碱的体外抗肿瘤活性并借助分子对接技术探讨其作用机制。4-dihydro-3-hydroxy-5-methoxy-2,2-dimethypyrano(2,3-b)-quinoline、R-(+)-platydesmin结果发现对人肝癌细胞HepG-2和胃癌细胞BGC均具有较高的抑制活性，通过分子对接技术，发现这2个生物碱与肿瘤细胞的细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)作用，初步阐释了其抗肿瘤活性机制[22]。

3.4 抑菌作用

赵亚萍等采用煎煮法，提取三桠苦等5味中草药组配的9个组合制剂中的活性成分，并通过测定抑菌率、抑菌圈大小、最小抑菌浓度和最小杀菌浓度等指标，评价其在体外对大肠杆菌的抑菌效果。筛选能较好抑制大肠杆菌的复方制剂为三桠苦20g，白英20g，刺五加20g，半枝莲20g和三桠苦15g，白英20g，刺五加10g，龙葵20g，半枝莲10g[23]。廖建良等研究三桠苦叶提取液抑菌活性，发现其对细菌具有较强抑制作用，最低抑制浓度(MIC)在0.125～0.5g·mL-1，对试验真菌无抑菌作用；
并且其抗菌活性在碱性条件下作用相对较强，具有热稳定性[24]。高英等考查三桠苦茎提取物体内外抗菌活性，在体外，三桠苦茎总提取物对金黄色葡萄球菌具有明显抑制作用；
在体内，三桠苦茎总提取物及其分段样品对金黄色葡萄球菌感染小鼠具有明显保护作用[25]。

3.5 代谢作用

胡向阳等观察三桠苦叶提取物对NAFLD大鼠小肠脂肪代谢的作用。采用高脂饮食法制备NAFLD大鼠模型，利用三桠苦叶提取物进行试验。检测各组大鼠血清和肝组织TC、TG及肝指数变化，定量PCR测定大鼠小肠组织CD36、Occludin和ZO-1的表达水平，与模型组比较，三桠苦提取物组小肠组织CD36表达降低，Occludin和ZO-1表达有不同程度的升高。与非诺贝特组比较，三桠苦提取物组肝组织TC含量升高，小肠组织CD36表达降低，表明三桠苦叶提取物对NAFLD大鼠小肠脂肪代谢有一定作用[26]。

3.6 抗氧化作用

毕和平等研究三桠苦根、茎和叶水提物的抗氧化作用，利用化学发光法检测其对超氧阴离子自由基、羟自由基和过氧化氢的清除作用，发现3个部位水提物都对其具有明显的清除作用，清除效率和水提物的浓度有关。表明三桠苦有作为抗氧化剂被开发利用的潜力[27]。

三桠苦作为原料开发的中成药广泛应用其中，在感冒药中应用最多，目前已开发出三九感冒灵、复方伤风胶囊、复方感冒颗粒、消结安胶囊、感冒灵、三九胃泰颗粒和三金片等30多种药品[4]。

三桠苦是我国南方地区大宗中成药的原料，其含有丰富的功能活性成分，如生物碱类、黄酮类、挥发油等，具有清热解毒、祛风除湿、消肿止痛、抑菌抗炎、抗肿瘤和降尿酸的功效，因此三桠苦具有非常广阔的应用前景。虽然已有一些国内外科学家对三桠苦化学成分和药理作用等进行了深入的研究，但仍然存在以下问题：三桠苦药材品种混乱，质量标准不统一，使用存在较大分歧；
三桠苦道地性的研究和探讨相对薄弱；
对三桠苦的药理作用的研究还比较零散不深入和系统；
三桠苦的产品开发取得了一定成效，但其推广和成果转化效率较低。

因此，在未来开展三桠苦研究时，建议开展以下几方面工作：对各种来源的三桠苦进行系统性研究，开展新品种选育，建立药用三桠苦种植、质量等标准进行推广；
结合三桠苦的质量标准对三桠苦的道地性进行研究和探讨；
加强三桠苦药效方面基础理论研究，为三桠苦临床应用和推广奠定基础；
加强三桠苦功效成分的提取工艺研究，助力三桠苦产品开发和推广。