白术对急性胃黏膜损伤的保护作用及机制研究

徐丽芳，李 鹏

（1. 江西中医药大学附属医院药学部，江西 南昌 330000 ；
2. 江西中医药大学中医学院，江西 南昌 330006）

胃黏膜损伤是临床上常见的消化道疾病之一，其发病因素多种多样，发病率逐年增高。中医认为胃黏膜损伤属于“胃脘痛”“痞证”“胃痈”等范畴，其病因可分为外邪客胃、饮食伤胃、七情内伤、脾胃虚弱、瘀血阻络等几个方面[1]。临床上胃黏膜损伤患者多存在脾虚，兼夹有湿、热、瘀，故多选择健脾益胃的中药组方来治疗。白术性温，味甘、苦，入脾经、胃经，主要功效为健脾益气、燥湿利水等，在治疗胃黏膜损伤的复方中出现频率极高。《医学启源》中记载：“（白术）除湿益燥，和中益气，温中，去脾胃中湿，除胃热，强脾胃”[2]。故本实验拟探究白术对乙醇致急性胃黏膜损伤大鼠的保护作用，并初步探讨其机理作用，为白术的开发、利用提供理论依据。

1.1 受试物的预处理

称取白术饮片（购于安徽某药材市场），去除杂质后置于粉碎机中粉碎，过60 目筛，临用前用1%羧甲基纤维素钠溶液配置成0.04g/mL、0.06g/mL、0.08g/mL 的受试物溶液。

1.2 实验动物

健康Wistar 雄性大鼠（购于上海斯莱克实验动物有限责任公司），体重200g 左右。

1.3 试剂与仪器

奥美拉唑胶囊（悦康药业集团有限公司生产），PBS 磷酸盐缓冲液（北京万佳首化生物科技有限公司生产），0.9% 生理盐水（实验室配制），无水乙醇（天津风船化学试剂科技有限公司生产），10% 甲醛溶液（德国默科公司生产）。A8 匀浆机（上海欧河机械设备有限公司生产），电子天平（上海精密仪器有限公司生产），AXTG16G 台式高速离心机（盐城市安信实验仪器有限公司生产），SZ61 解剖显微镜（上海普赫光电科技有限公司生产），三叶因子1、2（TFF1、TFF2）大鼠ELISA 试剂盒（上海酶联生物科技有限公司生产），白细胞介素-8（IL-8）、白细胞介素-2（IL-2）检测试剂盒（武汉默沙克生物科技有限公司生产），超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）检测试剂盒（南京建成生物工程研究所生产）。

1.4 实验方法

1.4.1 乙醇致急性胃黏膜损伤大鼠造模实验及分组

雄性Wistar 大鼠，体质量在200g 左右，适应性喂养1 周，按体质量随机分为6 组，每组12 只，即：空白对照组、模型对照组、奥美拉唑组及白术低、中、高剂量组（0.4g/kg、0.6g/kg、0.8g/kg，以生药计）。空白对照组和模型对照组给予等体积的1% 羧甲基纤维素钠溶液，奥美拉唑组给予3.5mg/kg 的奥美拉唑胶囊内容物溶液，白术组给予不同剂量的受试液，灌胃体积均为10mL/kg，每天灌胃1 次，连续灌胃28d。末次给药后，将大鼠禁食不禁水12h，除空白对照组外，其余大鼠均灌胃1.0mL 无水乙醇，建立乙醇致急性胃黏膜损伤大鼠模型。以上实验及分组平行3 次，分别用于测定胃黏膜损伤指数、血清生化指标及胃组织中三叶因子蛋白含量。

1.4.2 胃黏膜损伤指数及溃疡抑制率的测定 第一组实验大鼠：灌胃无水乙醇1h 后处死大鼠，解剖腹部，结扎贲门和幽门，取出完整胃部，注射0.6mL 甲醛溶液（浓度为10%），随后将胃浸泡在甲醛溶液中30min 并固定内外层。沿胃大弯剪开，去除胃内容物，用滤纸吸干表面水分，平铺胃黏膜，用解剖显微镜观察测量胃黏膜损伤数量及长度、宽度。依据陈蔚文[3]主编的《消化道药理与临床》中乙醇性胃溃疡模型胃溃疡指数的计分方法，大鼠计分总数即胃黏膜损伤指数，并根据下面公式计算溃疡抑制率（%）。计分方法：完整胃黏膜计0 分；
胃黏膜有点状出血（直径≤1mm）和点状糜烂计0.5 分；
胃黏膜有条索状溃疡，每1mm 长度计1 分，短径＞1mm 时计分加倍。

1.4.3 血清生化指标的测定 第二组实验大鼠：实验结束后，灌胃无水乙醇1h 后处死大鼠，腹主动脉取血，于3500r/min 离心机中离心10min，取上清液，根据试剂盒操作方法测定血清中SOD、MDA、NO 含量及血清中细胞因子IL-8、IL-2 含量。

1.4.4 胃组织中TFF1、TFF2 蛋白含量的测定[4]第三组实验大鼠：灌胃无水乙醇1h 后处死大鼠，解剖腹部，取出胃组织，用已预冷的PBD 磷酸盐缓冲液冲洗，去除血液，电子天平称重后将组织剪碎，按1:9体积加入PBS 磷酸盐缓冲液，在冰盘上充分匀浆研磨，4℃时放入6000r/min 离心机中离心10min，取上清液于-80℃冰箱中保存待测，并检测其中TFF1、TFF2蛋白含量，测定方法按ELISA 试剂盒说明书中的步骤操作。

1.5 统计学方法

实验数据采用SPSS 15.0 软件进行分析统计，所有数据均以±s表示，行t检验，P＜0.05 表明组间差异具有统计学意义。

2.1 白术对胃黏膜损伤大鼠胃黏膜损伤指数及溃疡抑制率的影响

研究结果显示，模型对照组大鼠胃溃疡明显，且溃疡情况严重，提示无水乙醇能造成明显的胃黏膜损伤。与模型对照组相比，奥美拉唑组和白术三个剂量组的胃溃疡均有不同程度的改善，胃黏膜损伤指数下降，溃疡抑制率上升（P＜0.05，P＜0.01），白术高剂量组效果最明显，溃疡抑制率高达55.21%（P＜0.05），与奥美拉唑组结果相近。详见表1。

表1 白术对胃黏膜损伤大鼠胃黏膜损伤指数及溃疡抑制率的影响

2.2 白术对胃黏膜损伤大鼠血清中SOD、MDA及NO 含量的影响

与空白对照组相比，模型对照组大鼠胃黏膜损伤后血清中SOD 的活性减弱，氧化产物MDA 含量上升，NO 含量下降（P＜0.01）。与模型对照组相比，奥美拉唑组和白术中、高剂量组血清中SOD 活性提高，MDA 含量降低，NO 含量升高（P＜0.05）。详见表2。

表2 白术对胃黏膜损伤大鼠血清中SOD、MDA 及NO 含量的影响

2.3 白术对胃黏膜损伤大鼠血清中细胞因子IL-8、IL-2 的影响

模型对照组血清中IL-2 含量低于空白对照组，IL-8 含量高于空白对照组（P＜0.05），提示胃黏膜损伤对细胞因子含量有影响。与模型对照组相比，奥美拉唑组和白术三个剂量组大鼠血清中IL-8 含量下降、IL-2 含量升高（P＜0.05）。详见表3。

表3 白术对胃黏膜损伤大鼠血清中细胞因子IL-8、IL-2 的影响

2.4 白术对胃黏膜损伤大鼠胃组织中TFF1、TFF2蛋白含量的影响

与空白对照组相比，模型对照组组胃组织中TFF1、TFF2 蛋 白 含 量 下 降（P＜0.05，P＜0.01）。与模型对照组相比，奥美拉唑组、白术三个剂量组胃组织中TFF1 蛋白含量升高（P＜0.05），奥美拉唑组和白术中、高剂量组胃组织中TFF2 蛋白含量升高（P＜0.05）。详见表4。

表4 白术对胃黏膜损伤大鼠胃组织中TFF1、TFF2 蛋白含量的影响

胃黏膜损伤指数是评价胃黏膜损伤模型建立成功与否的基本指标之一。本实验通过无水乙醇灌胃，破坏了大鼠的胃表面黏液层和黏液细胞，进而破坏了胃黏膜正常代谢所需的生理环境，出现生理和病理性损伤[5]。第一组实验中，模型对照组大鼠胃黏膜损伤指数高达（42.2±5.8），说明本实验乙醇致急性胃黏膜损伤大鼠模型造模成功。而白术三个剂量组的胃溃疡均有不同程度的改善，胃黏膜损伤指数下降，溃疡抑制率上升，说明白术能提高胃黏膜抵抗力，维持胃黏膜正常代谢所需的生理环境，减少刺激性损伤，这与相关文献[6]报道的“白术具有抗溃疡作用”相一致。氧自由基是急性胃黏膜损伤的重要致病因子，氧自由基易与多不饱和脂肪酸发生反应，导致脂质过氧化，从而引起胃黏膜血流障碍，引发、加重胃黏膜损伤[7]。SOD 是机体中重要的抗氧化酶，可通过歧化反应来清除氧自由基。MDA 是脂质过氧化的产物，机体中MDA 含量的变化能反映组织细胞损伤的程度。因此，在治疗胃黏膜损伤的过程中，应注重提高SOD 的活性，加快清除MDA。第二组实验中，模型对照组大鼠胃黏膜损伤后，SOD 活性减弱，氧化产物MDA 含量上升，而白术中、高剂量组血清中SOD 活性提高，MDA 含量降低。说明白术可通过清除氧自由基来保护胃黏膜。NO 是评价胃黏膜损伤程度的重要指标之一，它是一种内源性血管舒张因子，能有效舒张血管，增加胃黏膜血流量[8]。当胃黏膜损伤时，易产生血氧供应不足，导致NO 含量降低，而NO 可改善胃黏膜的微循环，使血氧量上升，加快胃黏膜上皮细胞的更换和修复。本实验结果显示，白术中、高剂量均能提高NO 含量，其中白术高剂量效果最好。提示白术可能通过增加NO 含量提高胃黏膜血流量，改善血氧供应，加快胃黏膜细胞的修复。IL-2 是由T 细胞产生的保护因子，具有多向性，可起到免疫调节作用。IL-8是中性粒细胞趋化分子，是炎症因子的重要介质，与炎症程度呈正相关[9]。本实验中，白术连续灌胃28d 后，胃黏膜损伤大鼠血清中IL-2 分泌上升，IL-8 分泌下降，提示白术可保护胃黏膜，其机制可能是通过控制血清中IL-2、IL-8 的分泌，调节T 细胞功能，增强免疫能力，减轻炎症程度。三叶因子家族（TTFs）是较新发现的小分子多肽，包含TFF1、TFF2、TFF3。其中TFF1、TFF2 主要分布于胃部，TFF3 则多分布在肺部及肠道[10]。研究表明，TFF1 以二聚体的形式通过二硫键与黏蛋白结合，组成网状保护层，能减轻胃酸、胃蛋白酶水解对胃黏膜的损伤。TFF2 能加强黏液凝胶层，增强胃黏膜表层对有害物质的抵抗，还能抑制胃酸分泌，刺激胃细胞增殖，提高胃黏膜的修复能力[11]。本实验中，连续28d 灌胃白术可促使大鼠胃组织中TFF1、TFF2 蛋白的含量增加，起到保护胃黏膜的作用。目前对TFFs 的研究较少，需通过进一步实验详细探究其对胃黏膜的保护机制。

综上所述，白术具有保护胃黏膜的作用，其机理可能与调节细胞因子、增加抗氧化酶活性、清除脂质氧化产物、加强细胞修复作用等有关。