深圳某地区3～7岁儿童血清白蛋白参考范围的建立

陈 相，杜丽伟，蔡珠妹，龚海娜，陈书恩

深圳市罗湖医院集团医学检验实验室（深圳市罗湖区妇幼保健院检验科），广东 深圳 518019

白蛋白（ALB）亦称清蛋白，含580个氨基酸残基的单链单纯蛋白质，主要由肝实质细胞合成分泌，是血浆中含量最多的蛋白质，约占血浆总蛋白的57%～68%。维持血液循环胶体渗透压及血液pH值、保护血管内皮细胞完整性及在出凝血中发挥重要的生理功能，还参与炎症反应、抗氧化、修复损伤等。同时白蛋白是体内重要的营养蛋白，其浓度水平不仅与疾病状况相关，也和性别、年龄、不同地区的生活水平及习惯相关。目前，临床各实验室测定ALB的方法有电泳法、免疫法、染料结合法，各种检测方法学间差异较大，且儿童正常参考范围没有统一，多数沿用成人的参考范围，存在很大局限性。本实验室ALB检测方法学由染料结合法更改为免疫法，因而急需建立新的参考范围。本研究以本地区托幼机构健康体检儿童为调查对象，应用免疫比浊法检测ALB，以求建立适合本地区本实验室的3～7岁儿童ALB参考范围，现将结果报告如下。

1.1 调查对象

选取2019年7—9月来深圳市罗湖医院体检适龄入院入学的健康儿童作为研究对象，按照国家临床实验室标准委员会（NCCLS）关于健康者的原则要求，选取其中肝肾功能正常、血尿常规正常、乙肝表面抗原（HbsAg）阴性及其他体检结论为“健康”的3～7岁儿童采集外周静脉血，检测血清白蛋白结果进行统计分析。本研究经样本医院医学伦理委员会批准、入选者家长签署知情同意书；
分为3～5岁、6～7岁，以男童、女童分组分别统计结果。

1.2 仪器与试剂

仪器为BECKMAN AU-680全自动生化分析仪；
试剂为芬兰Orion公司生产的生化液体双试剂盒及配套标准品（国械注进20172401012），按照试剂说明书的要求设置仪器测定参数，采用免疫比浊法。室内质控血清为朗道双水平质控品。

1.3 方法

质量控制室内质控为朗道双水平质控，每天ALB CV＜2.5%，累积室内质控CV＜5%，室间质评（EQA计划）ALB项目（广东省室间质量评价、卫生部室间质评价）均为优秀。检测方法由护士按要求采集在本地区托幼机构入院入学3～7岁儿童静脉血液标本（剔除溶血、脂血及黄疸样本）［1-2］，标本凝集后3 000转离心10 min，并在实验室2 h内完成检测。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验。计数资料以例数和百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2.1 1 792例儿童血清ALB测定值

各年龄组血清ALB测定值均符合正态分布，男童3～5岁年龄组平均白蛋白水平范围40.01～45.79 g/L，平均值为42.9 g/L；
6～7岁年龄组平均白蛋白水平范围40.72～46.48 g/L，平均值为43.6 g/L；
女童3～5年龄组平均白蛋白水平范围41.56～47.24 g/L，平均值为44.4 g/L；
6～7岁年龄组平均白蛋白水平范围41.03～46.77 g/L，平均值为43.9 g/L，见表1。

表1 1 792例儿童血清ALB测定值（±s）

表1 1 792例儿童血清ALB测定值（±s）

性别男女年龄组3～5岁6～7岁3～5岁6～7岁例数（例）130 849 119 694 ALB水平42.9±2.89 43.6±2.88 44.4±2.84 43.9±2.87

2.2 不同性别儿童间ALB结果

男童3～5岁、6～7岁两年龄组间比较，差异有统计学意义（P＜0.05），女童3～5岁、6～7岁两年龄组间比较，差异无统计学意义（P＞0.05），女童取消年龄分组；
在男女童3～5岁组及6～7岁组间ALB结果比较，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 不同性别儿童间ALB结果（±s）

表2 不同性别儿童间ALB结果（±s）

性别男女t值P值3～5岁组42.9±2.89 44.4±2.84-4.107 0 6～7岁组43.6±2.88 43.9±2.87 2.499 0.014

2.3 深圳罗湖地区1 792例健康3～7岁儿童ALB参考范围

男童3～5岁年龄组95%的参考区间37.24～48.56 g/L；
6～7岁年龄组37.95～49.25 g/L；
女童3～7岁年龄组白蛋白95%参考区间38.37～49.63 g/L，见表3。

表3 1 792例3～7岁儿童ALB参考范围（±s）

表3 1 792例3～7岁儿童ALB参考范围（±s）

性别男女年龄组3～5岁6～7岁3～7岁例数（例）130 849 813 ALB（g/L）42.9±5.66 43.6±5.65 44.0±5.63

2.4 常用ALB参考范围

免疫比浊法检测ALB结果参考范明显低于溴甲酚绿法，可能与两种方法的检测原理不同相关，见表4

表4 常用ALB参考范围（±s）

表4 常用ALB参考范围（±s）

ALB文献来源本研究年龄3～5岁6～7岁成人（免疫比浊法）成人（溴甲酚绿法）男37.2～48.6 37.9～49.3女38.4～49.6本试剂厂家卫生行业标准总体37.9～49.4 38.1～49.4 35～50 40～55

ALB是血浆中含量最多的蛋白质，几乎全部在肝脏合成，饮食中的蛋白水平能直接影响清蛋白的合成，ALB是体内重要的营养蛋白，参与维持血浆胶体渗透压、酸碱平衡等内环境稳定，也是血浆中多种物质的主要转运蛋白。血清蛋白的检测结果对相关疾病的诊断没有特异性，但结合临床症状，可用于判断疾病的发展状况，同时可预测肝脏疾病的关键指标。近年来，有最新研究表明［12］ALB在脓毒血症预后或疾病严重度分层，是一项容易获得及敏感指标。随着经济发展和人民生活水平的提高，饮食习惯的变化，ALB不仅在儿童营养状况的改善及对儿童健康状况的评估作为一个重要指标，随着对ALB研究的深入，还在其他疾病当中的应用及疾病的预后也有重要的意义。

参考范围是对95%健康人群中各项检测指标及其检测结果进行多样本统计数值分析，参照相关标准所设定，随着检测方法学的改变及人体生理状况的变化，其具体的指标也会发生相应的改变［11］。目前白蛋白常用的检测方法有染料结合法、电泳法、免疫比浊法。本实验室因ALB测定试剂更换，ALB测定方法学由原来的溴甲酚绿法改变为免疫比浊法，因而在使用新的试剂过程中发现试剂提供的参考范围及卫生行业标准［3-6］提供的ALB参考范围不适合医院特殊就诊人群，且其参考范围主要来自成人，没有明确显示可适用于儿童，同时，医院临床医生也对本实验室检测结果提出质疑，反应强烈，影响到临床医生对入幼、入学儿童的健康的诊断。因此本实验室急需建立适合本地区医院特殊就诊人群的ALB参考范围。

在本研究中，男童3～5岁、6～7岁两个年龄分组中，ALB检测数据相比较与郭存九等［10］研究（ALB为溴甲酚紫法）的成人年龄分组一样，均有较大差异，说明在不同地区、不同年龄段、性别因素对ALB参考范围的建立有明显影响，研究者推测这可能与人群生活习惯、生活方式等不同相关。而目前卫生行业标准中提供的参考范围没有年龄分组，在引用时也需要做相关的验证，提示在实际工作中要根据不同检测项目的检测方法学、不同人群、建立适合本地区本实验室参考范围。

在本研究中，男、女童ALB参考范围低限值均低于卫生行业标准而高于试剂厂家提供的标准，高限值均低于卫生行业标准（ALB为溴甲酚绿法）及试剂厂家提供的参考范围，推测这可能与儿童的生理发育状况和成人不同相关；
可能与儿童在不同地区的生活条件、营养状况和饮食结构改善有关；
可能与不同的检测方法学检测原理不一致相关。提示ALB项目检测应建立不同检测方法学的适于3～7岁的儿童健康、诊断的参考范围，以供临床医生参考。

溴甲酚绿法的检测原理主要是白蛋白在pH值4.2的缓冲液中带正电荷，与带负电荷的染料溴甲酚绿结合形成蓝绿色复合物，但溴甲酚绿法特异性差，溴甲酚绿不仅与白蛋白反应，还可与球蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白反应，导致检测结果产生偏差。免疫比浊法检测原理是采用单克隆抗体技术，使抗白蛋白抗体与血清中的白蛋白特异性结合，通过测定抗原抗体复合物的浊度从而得出血清白蛋白的含量，重复性、准确性均有明显提高。同时，检验医学溯源联合委员会（JCTLM）也将免疫比浊法作为参考方法。在本研究中检测ALB应用的免疫比浊法，在和溴甲酚绿法相比较时，参考范围明显偏低［10-11］，表明了方法学检测原理之间的明显差异，与刘非等［13］研究相一致。这提示研究者在实际工作中更换检测方法学后应验证和重新制定相适应的参考范围。

本研究中因客观条件所限，未能再次细化每一个年龄阶段及不同方法学的儿童白蛋白参考区间的分析，同时当前在细化各人群及年龄段的检测项目参考范围相关报道较少，这方面这也是以后努力的方向和目标，也是对不同医院、不同地区的检验结果相互承认提供科学的实验依据，也期待有其它地区相关的实验研究报道。

综上所述，本研究中在3～7岁儿童的ALB参考范围在性别、年龄组间的差异的分析能够真实反映深圳罗湖地区3～7岁健康儿童人群的血清白蛋白浓度水平情况。同时也验证了同一项目在不同医院面对不同人群时要及时修订相适应的参考范围。也证明了检测方法更改后应重新制定相适应的正常人群的参考范围必要性［14］。因此，建议实验室按照CLSI［7］要求，根据性别、年龄、检测方法学建立各自的参考范围。为临床诊断、治疗、监测提供科学的实验依据。