饲粮中添加α-亚麻酸对母羊发情周期内生殖激素的影响

扎拉嘎，黎 明，满 达，李云鹏，唐和斯，双 金*

（1.内蒙古圣牧高科牧业有限公司，呼和浩特 010010；
2.内蒙古农业大学，呼和浩特 010018）

动物生产上普遍饲喂脂肪以增加饲粮能量浓度，进而提高生产性能。最近研究的重点开始转向饲喂更多的特定必需脂肪酸，以改变动物生产性能及其产品的脂肪酸组成，其中值得关注的是饲喂必需脂肪酸对动物繁殖的可能影响。饲喂必需脂肪酸不仅能够改善能量平衡，而且还改变了机体脂肪酸成分——生殖激素，尤其是为孕酮（progesterone，P）及雌激素（estradiol，E2）等类固醇类激素提供了基本的分子成分［1］。研究表明，上述反应包括但不限于：开始排卵、恢复周期、改善发情的可见症状、增加卵巢的血流量以促进卵泡的生长。W.F.Marei等［2］研究表明，体外成熟培养液中添加适量的α-亚麻酸（ω-3多不饱和脂肪酸的母体）可促进牛卵母细胞核成熟、提高卵母细胞达到第二次减数分裂中期阶段的比例及受精后的发育能力及囊胚质量，而且α-亚麻酸处理卵丘卵母细胞复合体（cumulus-oocyte complexes，COCs）后，可促进前列腺素E2（PGE2）的合成。在发情期内PGE2能增加促性腺激素释放激素（GnRH）的释放，促进黄体生成激素（LH）和卵泡生成激素（FSH）的分泌；
还能调节靶细胞对激素的敏感性而影响激素效应［1］；
PGE2还可促进排卵，同时增强丝裂原活化蛋白激酶（mitogenactivated protein kinase，MAPK）的磷酸化水平，揭示α-亚麻酸可能通过影响PGE2的合成，进而激活MAPK信号通路，促进卵母细胞生长［3］，增加卵泡P和E2的分泌［1］。奶牛饲喂高水平ω-3多不饱和脂肪酸（ω-3PUFA）的饲粮，可以增加卵泡液内ω-3PUFA组成，提高ω-3PUFA／ω-6PUFA的比例，进而促进卵母细胞的生长［4］。

目前还未见饲粮中添加α-亚麻酸对母羊发情周期内生殖激素含量影响方面的报道。为此，本试验以母羊为试验对象，拟通过在其饲粮中添加α-亚麻酸，了解其对母羊生殖激素分泌的影响，为提高母羊生产效益提供依据。

1.1 α-亚麻酸的制备

α-亚麻酸，内蒙古武川县所产亚麻籽经过80℃炒熟、粉碎，获取α-亚麻酸含量达到53%的产品。

1.2 试验动物及分组

2～3岁蒙古羊20只，体重为（40±3）kg，体况良好，来源于内蒙古自治区苏尼特左旗。将20只羊随机分为2组，每组10只，组间体重差异不显著（P＞0.05）。

1.3 试验设计

基础饲粮参照NRC（2007年）标准［5］配制，营养水平进行计算调整，对照组饲喂基础饲粮，试验组在基础饲粮中添加3%α-亚麻酸。试验期为50 d，其中预试期5 d，逐渐调整饲粮；
正试期为45 d。饲粮组成及营养水平见表1。

表1 饲粮组成及营养水平（干物质基础）Tab.1 Diet composition and nutritional level（DM basis）

1.4 饲养管理

试验母羊全期舍饲，每组一栏。饲喂方式为每天上午和下午定量饲喂全混合饲粮（TMR）各1次，自由饮水。认真观察母羊采食、反刍情况，发现异常羊只要查找原因并及时处置，做好记录。

1.5 样品的采集与制备

预试期5 d后，给每只母羊肌内注射1 mL氯前列腺烯醇（PG），隔8 d再注射PG 1 mL，6 d后给每只羊安装阴道栓，11 d后撤阴道栓并肌内注射孕马血清促性腺激素（PMSG）400 IU。每组随机选取6只母羊，在撤栓前1天及发情周期第1，10，20天采血，3 500 r／min离心10 min，分离血清，置于-20℃冰箱中保存，待测。

1.6 测定项目

卵泡生成激素（follice-stimulating hormone，FSH）、黄体生成激素（luteinizing-hormone，LH）、雌二醇（E2）、孕酮（P），均用放射免疫分析法测定（试剂盒来自西安宝信生物科技有限公司）。

1.7 数据的统计分析

试验数据采用单因子方差分析（期间）和配对重复观察值相等t检验（组间），均值的多重比较采用邓肯氏法。

母羊发情周期内生殖激素含量测定结果见表2。

2.1 母羊血清中E2含量变化

见表2、图1。

由表2和图1可以看出：（1）组间比较。在撤栓前1天和发情周期第1天母羊血清E2含量试验组显著高于对照组（P＜0.05）；
而发情周期第10，20天，试验组虽然略高于对照组，但组间差异不显著（P＞0.05）。（2）时间点间比较。随着时间，试验组和对照组母羊血清E2含量均呈先降低后略升高的趋势。与撤栓前相比，对照组和试验组发情周期第10，20天母羊血清E2含量显著和极显著降低（P＜0.05和P＜0.01）。

图1 母羊血清中E2含量变化趋势Fig.1 Changes of serum E2 content in ewe

2.2 母羊血清中P含量变化

见表2、图2。

由表2和图2可以看出：（1）组间比较。在撤栓前1天和发情周期第10天母羊血清P含量试验组显著高于对照组（P＜0.05），发情周期第1，20天组间差异不显著（P＞0.05）。（2）时间点间比较。随着时间，试验组和对照组母羊血清P含量均呈先降低后升高的趋势。对照组和试验组发情周期第20天母羊血清P含量显著高于撤栓前1天和周期第1天（P＜0.05）。而且发情周期第10天后母羊血清P含量都处在很高水平。

表2 母羊发情周期内生殖激素含量测定结果Tab.2 Determination results of reproductive hormone content in ewe during estrus cycle

图2 母羊血清中P含量变化趋势Fig.2 Changes of serum P content in ewe

2.3 母羊血清中LH含量变化

见表2、图3。

由表2和图3可以看出：（1）组间比较。在撤栓前1天母羊血清LH含量试验组显著高于对照组（P＜0.05），其余时间点组间均差异不显著（P＞0.05）。（2）时间点间比较。随着时间，试验组和对照组母羊血清LH含量均呈先降低后升高的趋势。对照组和试验组血清LH含量均在撤栓前1天最高，显著高于发情周期第10，20天（P＜0.05）。

图3 母羊血清中LH含量变化趋势Fig.3 Changes of serum LH content in ewe

2.4 母羊血清中FSH含量变化

见表2、图4。

图4 母羊血清中FSH含量变化趋势Fig.4 Changes of serum FSH content in ewe

由表2和图4可以看出：（1）组间比较。在撤栓前1天母羊血清FSH含量试验组显著高于对照组（P＜0.05），其余时间点组间均差异不显著（P＞0.05）。（2）时间点间比较。随着时间，试验组和对照组母羊血清FSH含量均呈先降低后略升高的趋势。对照组和试验组撤栓前1天均最高，显著高于发情周期第1，10，20天（P＜0.05）。

首先，由母羊血清生殖激素的浓度差异看，添加α-亚麻酸的试验组均高于对照组。α-亚麻酸是（ω-3PUFA）的母体，在动物体内可转化成二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA），但其转化率还要受体内ω-6PUFA（母体是亚油酸）的竞争［6］。同时，动物体内类二十烷酸的代谢途径都要依靠ω-3PUFA和ω-6PUFA的平衡来实现［3］。它们在体内的平衡对于稳定生物膜功能、调控基因表达、维持细胞因子和脂蛋白平衡及促进生长发育和免疫等方面都起着重要作用［7］。但过去由于过分强调了ω-6 PUFA在这种平衡中的作用，又引发了新的不平衡［8］。如，目前母羊精补料多为玉米-豆粕型配方，其脂肪酸组成中ω-6PUFA组成很高，相反ω-3PUFA组成却很低。导致母羊饲粮中脂肪酸组成不平衡，影响母羊的繁殖性能。α-亚麻酸和亚油酸是动物卵泡、卵母细胞内含量最为丰富的PUFA［3］。S.Matoba等［9］研究表明，牛卵泡液α-亚麻酸含量与卵母细胞发育能力呈正相关。还有W.F.Marei等［2］研究表明，体外成熟培养液添加适量的α-亚麻酸促进了牛卵母细胞核成熟，提高了卵母细胞达到第二次减数分裂中期阶段的比例、受精后的发育能力及囊胚质量，而且α-亚麻酸处理卵丘卵母细胞复合体（cumulus-oocyte complexes，COCs）后，促进了PGE2的合成。在发情期内PGE2能增加促性腺激素释放激素（GnRH）的释放，促进LH和FSH的分泌；
还能调节靶细胞对激素的敏感性而影响激素的效应［1］；
PGE2还可促进排卵，同时增强MAPK的磷酸化水平，揭示α-亚麻酸可能通过影响PGE2的合成，进而激活MAPK信号通路促进卵母细胞生长［3］。研究还表明，奶牛饲喂高水平ω-3PUFA的饲粮，增加了卵泡液内ω-3PUFA组成，提高了ω-3／ω-6PUFA的比例，进而促进了卵母细胞的生长［4］。由此增加了卵泡P和E2的分泌［1］，部分E2进入血液循环，丘脑下部和脑垂体对E2的低浓度产生反馈，分泌更多的FSH，刺激颗粒细胞，使得E2的分泌持续增加，最终达到排卵前的峰值，启动LH分泌，触发排卵。

其次，由发情周期内生殖激素浓度的变化看，母羊血清E2浓度的高峰围绕在撤栓前1天和发情周期第1天左右的时间段出现，符合母羊排卵前血清E2浓度最高的生理变化规律；
P的浓度由发情周期第10天左右进入高位态势，说明早期胚胎已由囊胚期进入着床并结束赋植过程，同时卵巢进入黄体期。而血清LH和FSH已完成卵泡成熟与排卵的任务，随之进入下降阶段。

本试验结果表明：母羊清E2含量在撤栓前1天最高，P含量在发情周期第10天左右进入高位态势、之后降低，血清LH和FSH含量也呈降低趋势；
通过在饲粮中添加α-亚麻酸，母羊血清中的生殖激素（包括E2、P、LH和FSH含量）水平均有提高。说明在饲料中补充α-亚麻酸能够促进母羊繁殖相关激素的分泌。