血浆（1,3）-β-D,葡聚糖检测在侵袭性真菌感染诊断中的价值分析

李元元

（复旦大学附属中山医院吴淞医院检验科 上海 201900）

侵袭性真菌感染是组织内部遭受致病性真菌侵袭，且在组织内增殖，所引发的真菌感染性疾病，属于院内感染性疾病[1]。侵袭性真菌感染主要好发于免疫力低下的患者[2]，近年来，侵袭性真菌感染临床发病概率逐步升高。同时，由于侵袭性真菌感染多数与其他细菌感染合并，其疾病表现容易被患者的基础性疾病所掩盖，导致漏诊与误诊，无法获得有效的抗真菌治疗，患者致死率大幅升高，增加患者的住院风险，特别是针对免疫力较差的患者，严重威胁其身体健康与生命安全，临床称其为临终感染[3]。早期诊断是治疗侵袭性真菌感染的有效途径，需要在早期使用有效的抗真菌药物。但是，由于侵袭性真菌感染患病初期的症状与体征具有隐匿性，会对临床诊断造成影响[4]。传统诊断侵袭性真菌感染的方式为形态学诊断，耗时长，敏感度低。组织病理诊断为侵入性操作，患者接受度不高，影像学检查表现特异性不够。因此，探寻一种快速、高敏感度、高特异性的院内侵袭性真菌感染诊断方法，是目前临床热议的话题。真菌细胞壁中（1,3）-β-D 葡聚糖成分较高，吞噬细胞存在于人体血液或深部组织中，可将真菌吞噬、消化，释放真菌细胞壁的（1,3）-β-D 葡聚糖，患者血液与体液中均可检测到（1,3）-β-D 葡聚糖含量[5]。基于此，本研究旨在分析血浆（1,3）-β-D 葡聚糖检测（BDG 检测）诊断侵袭性真菌感染的应用价值，现报道如下。

1.1 一般资料

选取2021 年1 月—2022 年12 月复旦大学附属中山医院吴淞医院102 例疑似侵袭性真菌感染住院患者。其中男性62 例，女性40 例，年龄10 ～80 岁，平均年龄（45.21±1.56）岁。根据侵袭性真菌感染诊断标准分为侵袭性真菌感染组（n= 50）与非侵袭性真菌感染组（n= 52）。

侵袭性真菌感染组纳入标准：①感染部位影像学征象特殊者；
②侵袭感染部位伴临床症状、体征者，且用广谱抗生素治疗无效者。排除标准：①行血液透析治疗者；
②入组前7 d 行抗真菌治疗者；
③输注白蛋白或球蛋白者；
④抗肿瘤药物治疗者。

1.2 方法

（1）真菌培养与分离鉴定。①严格按照相关检验操作标准，从血液、痰、支气管分泌物、粪便、分泌物、尿液、引流液等感染部位收取标本，进行涂片检查与真菌培养。②血培养使用全自动血培养仪以及综合抗生素血培养瓶，真菌培养使用念珠菌显色培养基与全自动微生物分析仪，菌种鉴定使用酵母菌鉴定卡。（2）血浆BDG 检测。①使用微生物快速动态检测仪，依照浊度变化实施定量检测。在清晨取患者静脉血2 mL，离心1 min，取0.1 mL 血清，加入0.9 mL 样品处理液，混匀，在70 度恒温环境下放置10 min，取出后放入冰水中。②取待检血样0.2 mL，加入酶反应主剂A，完全溶解后放置于标准玻璃反应管中，在微生物快速动态检测系统中反映1 h，读取BDG 检测含量。

1.3 观察指标

参照欧洲癌症研究治疗组织与真菌研究组织诊断标准。①确诊：病理结果显示为真菌，无菌组织与血培养结果显示为真菌，临床诊断存在侵袭性真菌感染宿主因素且临床表现显著，同时，存有一项病原学依据；
②临床拟诊：伴有侵袭性真菌感染宿主因素以及显著性临床表现，无病原学依据，抗真菌治疗有效；
③排除诊断：上述标准均不符合，单用抗生素治疗有效。

1.4 统计学方法

使用SPSS 25.0 统计软件进行数据处理。符合正态分布的计量资料采用（± s）表示，行t检验；
计数资料用频数（n）和百分率（%）表示，组间比较采用χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2.1 102 例患者科室分布与BDG 检测阳性率

102 例患者中血浆BDG 检测阳性58 例，总阳性率57.40%，其中，阳性率最高的为ICU 病房，为90.70%，第2 位为血液科，63.60%，最低为22.70%，为CCU，见表1。

表1 102 例患者BDG 检测阳性率科室分布

2.2 50 例侵袭性真菌感染患者的真菌培养与血浆BDG 检测结果

102 例患者中，确诊50 例为侵袭性真菌感染组，剩余52 例为对照组。感染组中，呼吸道标本为真菌培养阳性标本的主要来源，占比78.50%；
真菌培养结果显示，以酵母菌感染为主，而且以白假丝酵母菌感染者BDG 平均含量最高，与其他类型菌比较，差异有统计学意义（P＜0.05）见表2、表3。

表2 50 例侵袭性真菌感染患者的真菌培养标本来源

表3 50 例不同真菌感染者血浆BDG 检测水平

2.3 血浆BDG 检测诊断侵袭性真菌感染的临床效能

拟定BDG 含量诊断临界值为10 pg/mL，则侵袭性真菌感染组阳性率（98.00%）显著高于对照组（19.23%），差异有统计学意义（P＜0.05）；
BDG 检测诊断侵袭性真菌感染的灵敏度与特异度分别为98.0%、80.8%，见表4。

表4 BDG 检测与侵袭性真菌感染临床诊断结果比较（n）

2.4 BDG 检测诊断侵袭性真菌感染不同界值的灵敏度与特异度

以浓度不同的BDG 检测为界值，BDG 检测诊断侵袭性真菌感染的敏感度与特异度存在差异，最佳诊断临界值为16.2 pg/mL，以此为阈值，可将特异度提升至81.7%，见表5。

表5 BDG 检测诊断侵袭性真菌感染的敏感度与特异度（%）

近年来，免疫抑制剂与广谱抗生素在临床上的使用逐渐广泛，真菌感染的发病率逐渐上升[6]。传统诊断真菌感染的金标准为真菌培养，但用时过多，阳性率不高，不适用于早期诊断。同时，组织病理学与组织培养具有侵入性，不适用于血小板减少、凝血功能障碍以及其他疾病类型的危重患者，国内使用患者的接受度不高，所以临床应用效能较低[7]。目前，由于缺少快速、灵敏的早期诊断方式，临床对真菌感染的早期诊断困难较大，导致患者无法及时接受有效的抗真菌治疗，真菌感染的病死率始终居高不下。探寻迅速、灵敏、精确的真菌感染诊断技术是临床的研究热点[8]。

形态学检查的基本方法包括直接镜检法与培养检查法。直接镜检法的优势在于实用、快速、便捷，直接根据阳性结果即可确定真菌感染，但阳性率不高，阴性结果不可用于排除诊断，需要结合培养检查结果才能确诊[9]。培养检查法可提高病原体检出阳性率，对直接镜检的结果进行验证，同时明确病菌种类。但培养时间较长，且不可过早结束培养，以免造成假阴性结果。同时，培养检查法需要对菌株进行培养，方可明确菌种[10]。因此，对病原学完整资料的收集要求较高。当前临床已形成了API 20C、全自动微生物鉴定体系等规范的酵母菌鉴定体系，其中白色念珠菌和几种常见的念珠菌以显色培养基进行鉴定，精确度较高，而其他几种少见菌种的鉴别需要方法之间相互验证，不可仅依靠颜色的变化来进行确定。因此，临床鉴定丝状菌时需要结合丰富的临床经验，并查阅大量文献，严格遵照各类菌种所需的规范方法，详细观察菌落的特性与显微镜下的产孢特点，甚至需要数次或反复多次接种才可得出精确的结果[11]。

近年来，在临床的重视下，真菌病原菌的检出率大幅提升。真菌细胞壁中含有大量的（1,3）-β-D 葡聚糖，占总重量的80%～90%，其中，在所有真菌胞壁成分中，（1,3）-β-D 葡聚糖占比超过50%，特别是在酵母样真菌中，其形式主链为（1,3）-β-糖苷键连接的葡萄糖残基骨架，侧链为分支状（1,3）-β-D 葡聚糖残基。因为（1,3）-β-D 葡聚糖仅在真菌细胞壁中广泛存在，真菌一旦进入人体血液或系统性组织，会受到吞噬细胞的吞噬与消化，使得（1,3）-β-D 葡聚糖从细胞壁中释放，增加血液或尿、脑脊液、腹水、胸水等其他体液中（1,3）-β-D 葡聚糖的含量[12]。浅部真菌感染中（1,3）-β-D 葡聚糖由于尚未进入血液或体液，因此含量并未增高。国外相关学者对血清（1,3）-β-D 葡聚糖进行检测，发现（1,3）-β-D 葡聚糖对诊断真菌感染临床应用价值较高，可为后续的临床治疗提供有力的数据证明。

酵母和丝状真菌细胞壁的多聚糖成分就是（1,3）-β-D 葡聚糖，其并不存在于原核生物、病毒和人体细胞内。所以，临床可将血液与无菌体液中检出（1,3）-β-D 葡聚糖作为侵入性真菌感染的标志。（1,3）-β-D 葡聚糖水平升高可提示存在深部真菌感染的可能，且BDG 检测优势在于快速、便捷，适用于疾病的早期诊断。①本文结果显示，102 例患者中血浆BDG 检测阳性58 例，总阳性率57.40%，其中，阳性率最高的为ICU 病房，为90.70%，第2 位为血液科，63.60%，最低为22.70%，为CCU。分析原因在于，ICU 患者的住院时间较长，机械通气、导管留置、广谱抗菌药物使用、免疫抑制剂使用时间较长，从而导致患者全身或局部免疫功能减退，增加了侵袭性真菌感染的风险，且集中高发于肺部感染。②本文结果显示，50例侵袭性真菌感染患者中，白色假丝酵母菌最为常见，其次为光滑假丝酵母菌和热带假丝酵母菌，曲霉菌感染较少。同时，曲霉菌感染患者的（1,3）-β-D 葡聚糖水平低于白色假丝酵母菌感染患者。分析原因在于，曲霉菌感染时，（1,3）-β-D 葡聚糖上升的幅度与宿主免疫力、病原菌数量关系紧密，只要厚壁纤维组织围绕曲霉菌，（1,3）-β-D 葡聚糖就难以进入到血液当中。③本文结果显示，选择10 pg/mL为诊断界值，（1,3）-β-D 葡聚糖诊断侵袭性真菌感染的灵敏度为98.0%，特异度为80.8%。临床诊断价值较高。将诊断界值提高至16.2 pg/mL，灵敏度不变，特异度可显著提升。分析原因为真菌在人体血液与深部组织内会被吞噬细胞吞噬、消化，随后从细胞壁中释放出来，导致血液与体液中的（1,3）-β-D 葡聚糖含量增高。因此，以（1,3）-β-D 葡聚糖进行真菌抗原的诊断具有较高的特异性。

综上所述，血浆BDG 检测在侵袭性真菌感染诊断中的应用价值较高，选定16.2 pg/mL 为阈值能够提高诊断有效率。BDG检测可作为侵袭性真菌感染早期的筛查方法，临床应用中需要结合真菌培养、临床指征、影像学检测等各项手段，将影响因素造成的影响排除在外，同时加强动态监测，充分发挥BDG 检测快速、敏捷、精确的优势，以争取宝贵的治疗时间，减少真菌感染病死事件的发生。