PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA在结直肠癌组织中的表达及与预后的关系

王汉星

山东省曹县中医院检验科 274400

早期诊断、早期手术切除治疗是目前临床上治疗结直肠癌最有效的方法[1]。但是该病早期症状不明显，随着癌肿发展，症状逐渐出现，表现为大便习惯改变、腹痛、便血、腹部包块、肠梗阻等，伴或不伴贫血、发热和消瘦等全身症状，确诊时常失去最佳治疗时机，且预后效果较差[2]，并且该病的发生和发展机制尚未明确。研究表明[3]，cGMP依赖性蛋白激酶(PKG)、cAMP依赖性蛋白激酶(PKA)均是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在结直肠癌发病中起重要的作用，且与预后具有一定的相关性。鉴于此，本文选择100例结直肠癌患者探究PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA在结直肠癌组织中的表达及与预后的关系，现报道如下。

1.1 一般资料 选择2018年9月—2019年9月收治的100例结直肠癌患者作为观察对象。其中男54例、女46例；
年龄35～68(52.03±11.12)岁；
肿瘤最大径1.8～4.8(3.52±1.05)cm；
肿瘤部位：结肠51例，直肠49例；
分化程度：高/中/低为12/63/25例；
TNM分期：Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ/Ⅳ期为11/34/48/7例；
浸润深度：T1/T2/T3/T4为12/32/46/10例。入选标准：(1)依据《中国结直肠肿瘤早诊筛查策略专家共识》[4]，并经活检、病理学检查确诊为结直肠癌者；
(2)临床资料收集完整者；
(3)预计生存期在6个月以上者；
(4)知情本次研究者。排除标准：(1)无法与医护人员正常沟通者；
(2)接受过相关治疗者；
(3)1周内有特殊用药史者；
(4)伴有其他恶性肿瘤者。本次研究获得我院伦理委员会的认证。

1.2 试剂及药品 PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA兔单抗购于武汉博士德生物工程有限公司。免疫组织化学试剂盒、二氨基联苯胺(DBA)显色试剂盒均购于北京天根生化科技有限公司。

1.3 方法 用10%甲醛固定结直肠癌和癌旁组织标本，用石蜡包埋后，切4μm薄片，烘干、脱蜡后滴加PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA兔单抗。然后进行苏木素染色。以自制磷酸盐缓冲液(PBS)为阴性对照，用已知标志物的阳性组织切片为阳性对照。(1)PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA表达情况：PKG-Ⅰ表达的阳性判定标准：阳性细胞—细胞浆出现棕黄色颗粒，在400倍镜下观察阳性细胞<10%判定为阴性，≥10%判定为阳性。PKG-Ⅱ表达的阳性判定标准：阳性细胞—细胞的胞膜和部分细胞质中出现呈棕黄色或棕褐色颗粒；
在400倍镜下观察阳性细胞<25%判定为阴性，≥25%判定为阳性。PKA表达的阳性判定标准：阳性细胞—细胞质或细胞核出现棕黄色颗粒。在400倍镜下观察阳性细胞<10%判定为阴性，≥10%判定为阳性。(2)分析PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA表达与结直肠癌临床病理参数的关系：包括性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、分化程度、TNM分期、浸润深度。(3)对结直肠癌患者随访24个月，统计PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA阳性和阴性表达结直肠癌患者24个月生存状况。

2.1 PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA表达情况 相比癌旁组织，结直肠癌组织中PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA阳性率明显更低，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表1。

表1 结直肠癌组织与癌旁组织PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA表达阳性率比较[n(%)]

2.2 PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA表达与结直肠癌临床病理参数的关系 在结直肠癌组织中，PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA阳性表达率随着肿瘤直径的增加、分化程度的降低、TNM分期的增加、肌层浸润而降低差异有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

表2 PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA表达与结直肠癌临床病理参数的关系[n(%)]

2.3 PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA表达与结直肠癌患者24个月生存状况的关系 结直肠癌患者24个月生存率为78.00%(78/100)，其中PKG-Ⅰ阳性表达患者24个月生存率为96.97%(32/33)，明显高于阴性表达患者的68.66%(46/67)；
PKG-Ⅱ阳性表达患者24个月生存率为100.00%(20/20)，明显高于阴性表达患者的72.50%(58/80)；
PKA阳性表达患者24个月生存率为92.31%(48/52)，明显高于阴性表达患者的62.50%(30/48)，差异有统计学意义(P<0.05)。

结直肠癌是来源于结肠和直肠黏膜的恶性肿瘤，发病过程较复杂，确切病因尚未明确。目前临床上常用手术、放疗、化疗、靶向治疗该病，但是5年生存率约为60%，生存率仍然不高[5]。故研究结直肠癌的病因，寻找新的治疗方案成为研究热点。

临床研究表明[6]，结直肠癌的发生、转移及预后与丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶密切相关。其中PKG、PKA均为蛋白激酶，PKG分为Ⅰ、Ⅱ型，PKG-Ⅰ分布较广泛，在肠平滑肌细胞分布较多；
PKG-Ⅱ能够调节囊性纤维化跨膜离子通道，使得碳酸氢盐、氯离子外排，水分进入肠腔，调节肠壁细胞内外的渗透压；
PKA能够通过磷酸化底物蛋白或转录因子，调节基因的转录翻译，进而调节细胞的生长、代谢及增殖等[7-8]。同时临床研究表明[9]，PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ能够抑制肿瘤细胞的侵袭，具有抗肿瘤的作用；
PKA能够抑制细胞异常生长和增殖，起到抗肿瘤的作用。本文结果显示，相比癌旁组织，结直肠癌组织中PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA阳性率明显更低。均与陈晨等[10]研究的PKG两种亚型、PKA在结直肠癌组织中表达显著降低相一致。

另外，本文结果还发现，在结直肠癌组织中，PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA阳性表达率随着肿瘤直径的增加、分化程度的降低、TNM分期的增加、肌层浸润而降低。结直肠癌患者24个月生存率为78.00%，其中PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA阳性表达患者24个月生存率明显高于阴性表达患者。分析原因：PKG-Ⅰ能够使得血管内皮生长因子减少，减少肿瘤血管生成，抑制肿瘤细胞增殖，延长癌症患者生存周期；
PKG-Ⅱ能够阻断酪氨酸酶活化，抑制酪氨酸酶介导的主要通路信号，抑制癌细胞的增殖、迁移、侵袭，促进癌细胞凋亡，延长癌症患者生存周期；
PKA能够抑制NF-κB转录活性，使得癌细胞的增殖活性下降，抑制结肠癌细胞迁移/侵袭，诱导结肠肿瘤细胞凋亡，从而延长癌症患者生存周期。

综上所述，PKG-Ⅰ、PKG-Ⅱ、PKA在结直肠癌组织中均呈现低表达，且与临床特征和患者预后密切相关，能够成为结直肠癌诊断与治疗的新靶点。