低蛋白质饲粮对大午金凤商品代蛋雏鸡血清生化及免疫机能的影响

耿顺菊，张家图，赵丽红，张建云，黄世猛，马秋刚

(中国农业大学 动物科学技术学院，动物营养学国家重点实验室，北京 100193)

大午金凤是由国家自主培育的世界首个羽色自别雌雄粉壳蛋鸡新品种，其红羽粉壳蛋的独特优势和优秀的生产性能在养殖户中形成了良好的口碑。家禽养殖过程中饲粮蛋白质水平的把控至关重要，其不仅会影响育雏期和育成期的生长发育，还会对后续生产性能造成相应的影响。育雏期对粗蛋白质需要量在整个生长周期内最高[1]，但目前由于季节、气候、收割和加工方式等原因造成我国蛋白质饲料资源的极度短缺，在一段时间内仍需依赖进口维持基本需求，进而造成饲养成本大幅度上涨。在此背景下低粗蛋白质日粮和氨基酸平衡技术的开发显得尤为重要，鉴于其是近年来培育的新品种，且大午金凤商品代育雏期蛋白质需要量的研究报道较少。因此，本试验通过研究不同蛋白质水平对大午金凤商品代蛋鸡育雏期血清中常规生理生化和免疫机能的影响，研究粗蛋白质在日粮中的适宜添加量，旨在为大午金凤蛋鸡饲养标准的制订提供理论依据。

1.1 试验材料

本试验选取1日龄体况健康、体重和胫长均匀度一致的大午金凤商品代蛋鸡384只，采用单因素试验设计，随机分为4个处理组，每个处理6个重复，每个重复16只鸡，各处理组饲粮CP水平(实测值)分别为17.36%、18.44%、19.39%和20.02%。试验期采用玉米-豆粕型颗粒饲料，不同处理组的饲粮组成及营养成分含量见表1，其他营养指标均满足NY/T 33-2004[2]的要求。本试验采用封闭式鸡舍笼养，鸡舍温湿度满足雏鸡饲养要求，自由采食和饮水，每天饲喂4次，饲养试验场所由中国农业大学涿州试验基地提供，试验期42 d。

1.2 测定指标及方法

1.2.1 血清中常规生理生化指标检测。在蛋雏鸡的14日龄和42日龄时，每个重复随机挑选2只鸡，利用翅静脉采血的方法进行血液采集，3 500 r·min-1离心15 min，吸取上清液转移至1.5 mL离心管内，保存于-80 ℃待后续检测分析[3]。采用日立7600全自动血清生化分析仪(HITACHI7600，日本)，对血清中总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量以及碱性磷酸酶(ALP)活性进行检测。

1.2.2 血清中免疫球蛋白含量检测。血清样本采集方法同上。根据北京利德曼提供的通用型ELISA试剂盒，采用免疫比浊法分别对血清中免疫球蛋白IgA(货号：IG7435)、IgM(货号：IG7437)、IgG(货号：IG7436)的含量进行检测(北京利德曼生化股份有限公司，中国)。

1.3 数据统计分析。

使用SAS 9.0统计软件对数据进行GLM分析和Duncan氏法多重比较，血液各项指标数据以重复作为试验单位，对差异显著数据进行进行二次曲线或者折线拟合，进而比较分析出不同CP水平对大午金凤育雏期商品代蛋鸡血液相关指标的影响。结果用平均值(mean)和标准误(SE)表示，以P<0.05表示差异显著，并具有统计学意义。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

2.1 饲粮中不同粗蛋白质水平对蛋雏鸡血清与蛋白消化代谢相关指标的影响

由表2可知，育雏期饲粮CP水平对14和42日龄大午金凤蛋鸡TP、ALB和GLB无显著影响，然而，由表可知其中对照组(17.36% CP)以上指标的数值均高于其他处理组；
与对照组和18.44%蛋白组相比，20.02%蛋白组中碱性磷酸酶含量呈现显著增加趋势(P<0.05)。除此之外，在第14日龄时，20.02%蛋白组中ALP含量显著高于19.39%蛋白组(P<0.05)，但至42日龄时19.39%蛋白组中ALP含量却显著高于其余三个处理组(P<0.05)。本试验结果表明育雏期(0～42日龄)饲粮添加不同水平的CP对14和42日龄大午金凤蛋鸡蛋白质消化代谢相关的部分血液生理生化指标(TP、ALB和GLB)无显著影响(P>0.05)，同时，育雏期CP水平显著影响大午金凤14和42日龄血清中碱性磷酸酶(ALP)含量(P<0.05)。

表2 饲粮蛋白质水平对14日龄和42日龄蛋雏鸡血液免疫指标的影响

2.2 饲粮中不同粗蛋白质水平对蛋雏鸡免疫机能的影响

由表3可知，在第14日龄时，随着饲粮CP水平的增加各处理组数值虽无明显差异(P>0.05)，但相比之下对照组的IgA、IgM和IgG在数值上高于其他各组；
在第42日龄，随着饲粮中添加CP水平增加，大午金凤蛋鸡血清中IgM和IgG有显著差异性变化(P<0.05)；
与对照组(17.36% CP)相比，19.39%、20.02% CP组IgM显著降低(P<0.05)；
除此之外，在第42日龄，对照组和19.39%蛋白组血清IgG含量显著高于18.44%蛋白组(P<0.05)，其中19.39%蛋白组含量最高。结果表明，育雏期(0～42日龄)饲粮添加不同水平的CP对第14日龄大午金凤蛋鸡的血清免疫指标无显著影响(P>0.05)，但对第42日龄大午金凤蛋鸡的IgM和IgG两项指标有显著性影响(P<0.05)。

3.1 饲粮中不同粗蛋白质水平对蛋雏鸡血清中蛋白消化代谢相关指标的影响

血液生化指标不仅能够反映动物机体内某些营养素的吸收分布及含量情况，还可以反映动物体内代谢和生理状况，同时和动物机体的健康与疾病也有着紧密的联系[4]。血清中总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)通常作为反应机体肝脏蛋白质合成能力的关键指标[5]，同时也可反映出机体蛋白代谢状况。TP的含量可作为反映机体感染、炎症反应及免疫疾病等的重要信息，同时也与动物合成CP呈正相关[6]，其在机体内的含量可以间接对日粮中蛋白质的添加量以及蛋白质在动物体内的消化情况进行有效反馈。张思轩等[7]研究发现，在氨基酸平衡的条件下日粮蛋白质水平降低1%～3%未对血清TP含量产生显著影响，与本文结果类似。

碱性磷酸酶(ALP)作为机体反映肝脏能否正常发挥功能的重要指标，其本质属于酶蛋白，由成骨细胞所分泌，主要存在于肝脏、骨骼、肠道粘膜细胞中[8]。当机体肝细胞发生受损或代谢障碍时，ALP等肝功能指标数值会明显上升[5]。陈冬梅等[9]研究认为当血清磷浓度低时，骨组织的碱性磷酸酶释放量增加。而19.39%蛋白组血清磷浓度低于其他处理组，可能是该起骨组织的碱性磷酸酶释放量增加至血液中而使该组血清ALP含量升高的原因。李琴等[10]研究指出，随着饲粮粗蛋白质水平的升高，血清ALP水平显著增加。依据本试验结果，随着饲粮中CP水平的增加，在14日龄和42日龄，蛋鸡血清中ALP含量呈现线性增加，例如，在14日龄，饲粮中20.02%蛋白组血清碱性磷酸酶含量显著高于17.36%、18.44%和19.39%蛋白组。同时，在42日龄，与17.36%蛋白组相比，饲粮中19.39%蛋白组血清碱性磷酸酶含量显著增加。与陈国宏等[11]关于新扬州鸡血浆中碱性磷酸酶含量随日龄的增长而呈下降趋势的研究结果存在差异。这可能是由于碱性磷酸酶的活性受动物品种、性别、年龄、同工酶类型和采食前后等诸多因素影响[12]。本试验结果表明，饲粮中添加高水平的蛋白质，可能会导致蛋鸡肝脏中蛋白质代谢负担加重，造成肝脏功能损伤，从而引起血清中碱性磷酸酶含量增加。

表3 饲粮蛋白质水平对14日龄和42日龄蛋雏鸡免疫机能的影响

3.2 饲粮中不同粗蛋白质水平对蛋雏鸡免疫机能的影响

免疫球蛋白作为血清中的主要抗体，即在体液免疫中发挥重要作用，又在免疫反应过程中担任重要组成部分[13]。家禽体内的免疫球蛋白主要包括IgG、IgM和IgA三类[14]，其主要有参与机体免疫、中和毒素、清除衰老和凋亡细胞、调节机体代谢等方面功能[15]。血清中IgA、IgM和IgG含量高低可反映动物机体内体液免疫的强弱[16]，其中IgA在局部粘膜免疫应答过程中发挥重要作用；
IgM主要出现于初次免疫应答，产生最早且抗体效价高；
而IgG主要集中于血液，是再次免疫应答的主要抗体。Klemperer研究发现，家禽体内的免疫机能可通过免疫球蛋白自血清转移至蛋黄内的方式传递给后代。本研究发现育雏初期不同处理组的免疫球蛋白含量无显著差异，可能是由于前期对母体所传递的免疫机能进行消耗，因此14日龄时不同水平蛋白质组间并无差异性。而育雏后期由于机体发育，不同蛋白水平下血清免疫球蛋白含量也逐渐出现差异性变化，但仍存在个体差异，可能不同个体对蛋白吸收情况的不同，导致饲粮CP含量与IgG未呈现出线性关系。本文试验结果显示，饲粮CP水平对42日龄大午金凤蛋鸡血清中IgM和IgG有显著影响；
17.36%和18.44%蛋白组IgM显著高于其余两个高蛋白组；
同时，在本试验中，18.44%蛋白组接近饲养标准推荐量，与该处理组相比，饲粮中17.36%和19.39%蛋白组血清中IgG含量显著增加，其中19.39%蛋白组的IgG含量达到10.84 g/L。由于IgG在机体抵抗感染和机体损伤中扮演十分重要的角色，当机体蛋白水平过高，诱导机体蛋白质代谢负担加重，诱发代谢失调和炎症损伤，从而引起机体免疫机能过度激活，该过程需要大量IgG发挥相应功能。同时，以上结果也表明饲粮蛋白水平较低的情况下，机体可以通过不同途径获取较高水平的免疫球蛋白含量，从而帮助机体构建牢固的免疫屏障。由此可见，粗蛋白质水平在17.36%情况下，大午金凤蛋雏鸡的机体代谢和免疫机能有所提高，这也为其发挥最佳生长性能提供扎实基础。

(1) 在日粮氨基酸平衡条件下，降低粗蛋白水平有利于防止家禽血液中碱性磷酸酶含量的增加，降低机体蛋白质代谢负担，结合数据可知17.36%蛋白组较其他处理组更有利于后期产蛋性能的发挥。

(2) 在日粮氨基酸平衡条件下，降低粗蛋白水平也可以保证机体免疫机能处于较高水平，有利于提高蛋鸡免疫屏障的构建，由此，推测饲粮中粗蛋白水平为17.36%时，大午金凤商品代蛋雏鸡具有较好的免疫潜能，从而为发挥最佳生长性能提供扎实基础。