石墨炉原子吸收光谱法测定原料药酒石酸依利格鲁司他中钯的含量

陈 璐,李琴梅,黄 曌,池海涛,赵 婷,张 梅,2*

(1.北京市科学技术研究院 分析测试研究所(北京市理化分析测试中心),北京 100094;2.有机材料检测技术与质量评价北京市重点实验室,北京100094)

酒石酸依利格鲁司他是一种高度特异性神经酰胺类似物抑制剂,能够抑制葡萄糖神经酰胺的产生和累积,是治疗特定Ⅰ型戈谢病的小分子口服药物[1-3]。原料药酒石酸依利格鲁司他在生产过程中常用钯作为催化剂[4],虽然经过精制步骤去除,但成品中仍可能残留钯。钯元素可能会对心脏、肝肾和肺造成损害,并产生溶血,还会引发哮喘、过敏、结膜炎等疾病[5]。欧洲药品管理局(EMA)在2008年颁布了《金属催化剂或金属试剂残留量规定》的指导文件,其中钯作为第Ⅰ类金属1A 亚组,具有显著毒性,其残留量不得超过10 mg·kg－1(限度值)。目前对酒石酸依利格鲁司他中钯残留的测定方法研究还鲜有文献报道。基于此,建立一种快速、准确测定原料药酒石酸依利格鲁司他中钯含量的方法对保证该类药品的用药安全有重要意义。

目前,测定原料药中钯残留量的方法主要有电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)[6-8]、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)[9-11]和原子吸收光谱法(AAS)[12-13]。但ICP-AES测定的检出限较高,无法对药物中痕量元素进行检测;ICP-MS成本高且普及度低,不适于药品的日常质量控制;AAS包括火焰法和石墨炉法,其中火焰法灵敏度低,测得检出限偏高,不适用于低浓度水平的样品检测,石墨炉法对样品基体要求低、灵敏度高,适用于药品中钯残留量的测定[14]。本工作采用微波消解法对原料药酒石酸依利格鲁司他样品进行前处理,用石墨炉原子吸收光谱法测定其中钯的含量,该方法检出限低、灵敏度高、干扰少,且简单、快速。

1.1 仪器与试剂

Pin AAcle 900T 型系列石墨炉原子吸收光谱仪;Ethos型微波消解仪;SQP 型电子分析天平;VB24 Plus型石墨赶酸器;Milli-Q 型超纯水仪。

试验中所用聚四氟乙烯消解罐及容量瓶等均用10%(体积分数)硝酸溶液浸泡过夜,用水冲洗后备用。

钯标准储备溶液:10 mg·L－1,精密移取1.0 mL钯标准溶液(1 000 mg·L－1)于100 mL 容量瓶中,用0.2%(体积分数,下同)硝酸溶液定容,摇匀,配制成质量浓度为10 mg·L－1的钯标准储备溶液。

钯标准中间溶液:100μg·L－1,精密移取钯标准储备溶液1.0 mL 于100 mL 容量瓶中,用0.2%硝酸溶液定容,摇匀,得质量浓度为100μg·L－1的钯标准中间溶液。

1 000 mg·L－1钯标准溶液,编号GSB 04-1743－2004;30%(质量分数,下同)过氧化氢溶液为优级纯;高纯氩气,纯度不小于99.999%;硝酸为电子级;试验用水为超纯水(电阻率为18.2 MΩ·cm)。

原料药酒石酸依利格鲁司他由某药厂提供。

1.2 仪器工作条件

1.2.1 微波消解仪

微波消解程序见表1。

表1 微波消解程序Tab.1 Program of microwave digestion

1.2.2 石墨炉原子吸收光谱仪

测定波长247.64 nm;光源为钯空心阴极灯;狭缝宽度0.7 nm;保护气为氩气;工作灯电流10 m A;进样体积20μL;测定方式为标准曲线法;测定次数为3次。石墨炉升温程序见表2。

表2 石墨炉升温程序Tab.2 Program of temperature elevation of graphite furnace

1.3 试验方法

准确称取原料药酒石酸依利格鲁司他约0.1 g于聚四氟乙烯消解罐中,加入3 mL 硝酸和2 mL 30%过氧化氢溶液,装好外置套,旋紧旋塞,置入微波消解仪中,按表1 程序进行消解,同时做样品空白。消解完全后置于石墨赶酸器上于160℃赶酸至近干,冷却后用水定容至10 mL容量瓶中,摇匀,用水稀释5倍后,按照仪器工作条件进行测定。

2.1 标准曲线与检出限

由自动进样系统将钯标准中间溶液稀释成5,10,20,50,100μg·L－1的钯标准溶液系列,以0.2%硝酸溶液为空白,测量吸光度。以钯的质量浓度为横坐标,对应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。所得线性回归方程为y＝6.700×10－4x＋9.200×10－4,线性范围为5～100μg·L－1,相关系数为0.999 2。

取样品空白溶液,连续进11针后得到钯的吸光度,根据《中华人民共和国药典》(2020 年版)四部“药品质量标准分析方法验证指导原则”计算检出限(3.3s/k),其中s为标准偏差,k为标准曲线的斜率,再换算为质量分数,得出钯的方法检出限为0.508 mg·kg－1。

2.2 精密度试验

2.2.1 仪器精密度

取适量的20μg·L－1(限度值对应的质量浓度)钯标准溶液,按照仪器工作条件连续进样20次,测量钯的吸光度,计算相对标准偏差(RSD)。结果表明,RSD 为3.0%,表明仪器精密度良好。

2.2.2 重复性

精密平行称取6份酒石酸依利格鲁司他样品,因为样品中钯含量均小于检出限,所以需加入限度值对应质量浓度的钯标准溶液,然后分别按照试验方法前处理并测定。结果表明,测定值的RSD 为0.81%,表明方法的重复性良好。

2.3 回收试验

精密平行称取9份0.1 g样品于聚四氟乙烯消解罐中,分3组,每组做3个平行样,按80%,100%和120%限度值进行加标,按照试验方法进样测定,并计算回收率,结果见表3。

表3 回收试验结果Tab.3 Results of test for recovery

由表3 可知,钯的加标回收率为96.2%～108%,表明所建立的方法准确度高。

2.4 样品分析

采用建立的试验方法对3个批次的酒石酸依利格鲁司他样品中钯的含量进行测定,结果表明,钯的测定值均低于检出限,说明不同批次酒石酸依利格鲁司他中钯含量接近,且均小于规定限度值10 mg·kg－1。进一步证明建立的方法实用性强,可以对样品进行批量检测。

本工作提出了石墨炉原子吸收光谱法测定原料药酒石酸依利格鲁司他中钯含量的分析方法。该方法简便、快速、准确,可用于原料药酒石酸依利格鲁司他中钯元素的测定,适用于医药及其中间产物的分析,为原料药的质量安全控制提供了检测方法依据,可在实际工作中得到应用。