不同产地凹叶景天挥发油成分的GC-MS分析

刘媛媛，叶梅芳，蒙雪雁，江露娟，丘琴,2*，甄丹丹，黄凤音，甄汉深

(1.广西中医药大学，广西 南宁 530200；
2.广西优势中成药与民族药开发工程技术研究中心，广西 南宁 530200)

凹叶景天，别名众多，《中药大辞典》[1]记载其别名有,马牙半支、马牙苋和酱瓣半支等，来源于景天科植物凹叶景天SedumemarginatumMigo的全草。其性凉，味苦、酸；
归心、肝、大肠经；
具有清热解毒、凉血止血、止痛等功效。主治肝炎、痢疾、吐血、衄血、便血、月经过多，外用时可治疗跌打损伤、痈疖、带状疱疹,鲜品捣烂外敷可治疔疮[2-3]。《本草纲目拾遗》[4]记载：“消痈肿，治湿热，利水和血。治肠痈，痔漏，蛇咬，疔疽，便毒，风痹，跌扑，黄疸。擦汗斑尤妙”。现代药理表明凹叶景天中黄酮类化学成分具有抗肿瘤[5]、止血、耐缺氧[6]和镇静催眠作用[7]。凹叶景天分布于全国，资源丰富，为药食两用药，广西各地都有种植，为广西壮族民间用药。目前，国内外对凹叶景天的研究多集中于扦插栽培[8]和含量测定[9-10]，但对于不同产地凹叶景天挥发油成分的比较分析未见报道，因此本实验在前期研究的基础上[11-12]，采用气相色谱-质谱联用方法，对10个不同产地的凹叶景天挥发油成分进行了分析研究，寻找共性成分，比较其主要差异，为凹叶景天药材质量的评价提供科学依据。

1.1 仪器

Agilent5971B 质谱仪(Agilent公司)；
Agilent7890B气相色谱仪(Agilent公司)；
Agilent7683B 自动进样器(Agilent公司)；
CPA225D型Sartorius电子天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司)。

1.2 材料

乙酸乙酯(成都市科龙化工试剂，批号：2018022801，AR)；
无水硫酸钠(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；
纯水。10个不同产地凹叶景天药材主要来源于广西壮族自治区、浙江省和湖北省，经广西一心医药马利飞副主任中药师鉴定为景天科景天属植物凹叶景天的地上部分。药材来源见表1。

2.1 挥发油的提取

取10批凹叶景天药材，剪碎，称取30.0 g，置于1 000 mL烧瓶中，按照中国药典2015版第四部通则2204挥发油测定法[13]进行操作，得油状物约0.15 mL，挥发油得率为0.50%，转移至15 mL离心管，乙酸乙酯萃取后加入无水硫酸钠脱水，得到凹叶景天的挥发油备用。

表1 10个不同产地凹叶景天药材来源

2.2 GC-MS测试条件

进样口温度：250 ℃；
进样口分流模式：不分流；
载气：He气；
色谱柱：HP-5MS色谱柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；
流速：1.0 mL·min-1；
检测器温度：280 ℃；
进样量：1 μL；
溶剂延迟时间：3 min；
色谱柱升温条件：程序升温，见表2；

EI离子源；
离子源温度：230 ℃；
接口温度：300 ℃；
电子能量：70 eV；
溶剂延迟时间：3.5 min；
扫描范围：质荷比(m/z)50～400。

表2 气相程序升温条件

对10个不同产地凹叶景天挥发油成分进行GC-MS检测得到总离子流图，见图1，通过运用HP6890/5973N化学工作站NIST08、Chemical BooK标准质谱图库，按各色谱的质谱裂解碎片图，对基峰、质荷比和相对丰度等进行比较，并结合图谱解析，确定挥发油的化学成分，采用面积归一化法测得各组分的相对百分含量，分析鉴定结果见表3～5。

表3分析结果显示，不同产地样品中挥发性成分差异显著，浙江宁海产样品中共鉴定出23种挥发性成分，占总含量的48.04%；
浙江丽水产样品中共鉴定出13种挥发性成分，占总含量的56.29%；
广西隆安产样品中共鉴定出15种挥发性成分，占总含量的58.54%；
广西南宁产样品中共鉴定出19种挥发性成分，占总含量的39.05%；
广西武鸣产样品中共鉴定出16种挥发性成分，占总含量的52.63%；
广西桂林产样品中共鉴定出14种挥发性成分，占总含量的74.75%；
广西龙胜产样品中共鉴定出9种挥发性成分，占总含量的78.13%；
湖北恩施建始县产样品中共鉴定出12种挥发性成分，占总含量的77.92%；
湖北恩施宜恩县产样品中共鉴定出12种挥发性成分，占总含量的50%；
湖北恩施巴东县产样品中共鉴定出11种挥发性成分，占总含量的65.99%。不同产地共有的挥发性成分有3种，分别是1,3-二叔丁基苯、2,4-二叔丁基苯酚和邻苯二甲酸二丁酯。其中，浙江宁海产地含特有挥发性成分癸烷、氰化苄、Naphthalene、二十二烷、5alpha-胆甾烷；
浙江丽水产地含特有挥发性成分正三十一烷；
广西隆安产地含特有挥发性成分十二烷、二十八烷、2-十四醇；
广西南宁产地含特有挥发性成分亚油酸、正三十四烷；
广西武鸣产地含特有挥发性成分1-二十二醇、1,2-环氧十六烷；
湖北恩施建始县产地含特有挥发性成分正十七烷、正二十烷、十四烷；
湖北恩施宣恩县产地含特有挥发性成分正三十一烷；
湖北恩施巴东县产地含特有挥发性成分月桂酸。

进一步从表3、4分析结果来看，10个不同产地共有成分中邻苯二甲酸二丁酯的含量最高，其相对百分含量均在15%以上，其中广西龙胜所含的邻苯二甲酸二丁酯含量为50.05%，湖北恩施建始县所含的含量为39.55%，湖北恩施巴东县所含的含量为37.03%；
在其挥发性成分种类数量中：烷烃类>酯类>其他类>醇类>酚类>醛类>胺类>酸类>酮类。由表5分析结果可知，10个不同产地凹叶景天挥发性成分主要是酯类化合物(324.28%)，其次是烷烃类(102.58%)和醇类(70.66%)，其中广西龙胜产地挥发性化学成分中酯类相对含量最高(55.25%)，浙江宁海产地挥发性化学成分中酯类相对含量最低(17.6%)，只有浙江丽水和广西南宁含有酮类成分，分别占1.17%和2.52%。

注：A.浙江宁海；
B.浙江丽水；
C.广西隆安；
D.广西南宁；
E.广西武鸣；
F.广西桂林；
G.广西龙胜；
H.湖北恩施建始县；
I.湖北恩施宣恩县；
J.湖北恩施巴东县。图1 不同产地凹叶景天挥发性成分GC/MS总离子流图

表3 不同产地凹叶景天挥发性成分分析结果

续表3

表4 10个产地凹叶景天挥发性成分的种类(种)

表5 10个产地凹叶景天挥发性成分的相对百分含量(%)

不同产地凹叶景天挥发性成分组成和含量存在差异，其中1,3-二叔丁基苯、2,4-二叔丁基苯酚和邻苯二甲酸二丁酯是不同产地凹叶景天挥发油的共有成分，但在10个不同产地凹叶景天挥发油的成分之间又有较大的差异，说明产地对于凹叶景天挥发油成分具有较大影响。而部分不同地区凹叶景天挥发油含有标志性成分，其可能是药材在水土情况、太阳光照、气候条件、海拔高度和采集季节等环境因素下，使得药材中的挥发油在生物合成过程中受到影响，针对部分产地中的特有成分，大量样本的分析结果可鉴别不同产地来源的凹叶景天，因此可为凹叶景天的品种和产地鉴别提供思路。

历史上大多数新药都是由自然产物衍生的化合物，天然植物就是其中一种重要的药物资源[14]，因此，鉴定天然植物中具有特定功效的活性成分具有重要意义[15]。研究表明三七是临床上治疗跌打损伤、关节疼痛常用的一类经典药物，而三七中的活性单体邻苯二甲酸二丁酯通过抑制破骨细胞融合而阻断破骨细胞生成，从而有效抑制骨性关节炎的启动和进程[16]。凹叶景天在治疗跌打损伤方面颇有疗效，而邻苯二甲酸二丁酯作为凹叶景天挥发油成分中含量最高的化合物，推测该成分可能为凹叶景天在治疗铁打损伤方面的活性成分。