【维生素Ｄ受体基因多态性与白癜风的相关性研究】 D受体

　　[摘要]目的：探讨维生素D受体基因多态性与白癜风的相关性。方法：采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法，对749例白癜风患者和763例健康人的维生素D受体基因型进行分析。结果：白癜风患者维生素D受体BsmI、ApaI、TaqI位点基因型的分布与正常对照组相比有显著性差异，bb、aa、tt基因型在白癜风患者中频率较高，FokI位点基因型的分布与对照组无明显差异。单倍体型分析表明FokI位点和BsmI位点，BsmI位点和ApaI位点，BsmI和TaqI位点，ApaI位点和TaqI位点之间存在较强的连锁不平衡，白癜风患者中fbAT、FbAT和FbaT单倍体型的频率显著高于对照组。结论：维生素D受体基因多态性与白癜风有明显的相关性。携带维生素D受体基因纯合子bb、aa或tt基因型可能会增加对白癜风的易感性。
　　[关键词]白癜风；维生素D受体；多态性
　　[中图分类号]R758.41　[文献标识码]A　[文章编号]1008－6455(2007)03－0302－03
　　
　　白癜风是一种以色素脱失为特征的皮肤病，本病影响容貌，治疗困难。既往研究表明本病是一种多基因遗传病，属于自身免疫病的范畴，由免疫功能异常所导致的黑素细胞的破坏是本病发生的主要机制。维生素D受体(vitamin D Receptor，VDR)是细胞核激素受体，属于类固醇激素/甲状腺受体超家族的成员，维生素D及其衍生物通过VDR发挥重要的生物学功能。以往研究证实VDR不仅参与骨骼的生长发育，而且与T细胞的功能调节以及黑素细胞的生物学功能明显相关，在白癜风患者VDR表达水平降低，这些结果都表明VDR与白癜风有密切的关系。VDR基因存在单核苷酸多态性，这些单核苷酸多态性与多种疾病的易感性有重要的关系，但是在白癜风患者人群VDR基因多态性的意义尚不明确。本研究采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法研究了中国汉族人群VDR基因多态性与白癜风的相关性。
　　
　　1 研究对象和方法
　　
　　1．1　研究对象：白癜风患者组，随机选取本院门诊白癜风患者749例，男性414例，女性335例，均为汉族，年龄2～95岁(平均24.9±13.9岁)。正常对照组来自同地区763例无血缘关系的健康人员，男性413例，女性350例，均为汉族，年龄1～75岁(平均26.2±13.7岁)。
　　
　　1．2　实验方法
　　1．2．1　基因组DNA提取：取外周抗凝血1ml，用基因组提取试剂盒(天根生公司)提取基因组DNA。
　　1．2．2　PCR扩增及酶切：取基因组DNA约50ng进行PeR反应，反应体积为20μl。取PCR反应产物3μl进行酶切，酶切总体积为10μl。具体PCR及酶切反应条件见表1。

　　1．2．3　VDR多态性分析：分别用限制性内切酶FokI、BsmI、ApaI、TaqI(NEB公司)对不同的PCR扩增产物进行酶切，3％的琼脂糖凝胶电泳分离酶切产物，EB染色及紫外线投射仪下观察结果。分别以4种限制性内切酶第一个字母的大写F、B、A、T表示缺乏相应的多态性位点，以小写字母f、b、a、t表示存在相应的多态性位点，f、b、a、t突变位点经酶切后分别释放如下大小的片断。f:196bp和69 bp，b:177bp和182 bp，a:280bp和210bp，t:290bp和200 bp。
　　
　　1．3　统计学处理：分别统计病例组和对照组基因型和等位基因的分布频率。数据经Hardy－Weinberg遗传平衡检验后，用SPSS10.0统计软件分析。采用卡方检验，比较白癜风患者组和对照组VDR基因型分布上的差异，并分析VDR基因型与白癜风的相关性。
　　
　　2　结果
　　
　　2．1　Hardy－Weinberg遗传平衡检验：对白癜风组及对照组VDR基因型分布进行检验。结果白癜风组及对照组均符合Hardy－Weinberg遗传平衡(表2)。

　　
　　2．2　VDR基因型分布：白癜风患者VDR BsmI、ApaI、TaqI位点基因型的分布情况与正常对照组有显著性差异bb、aa、tt、基因型在白癜风患者中频率较高，FokI位点基因型的分布与正常对照组无显著性差异(表3)。

　　
　　2．3　单倍体分析：结果显示FokI位点和BsmI位点之间，kpaI位点、TaqaI位点和BsmI位点两两之间均存在较强的连锁不平衡(表4)，白癜风患者中fbAT、FbAT和FbaT单倍体型的频率显著高于对照组，提示7DR基因型为fbAT、FbAT和FbaT的个体患白癜风的危险性较大(表5)。


　　
　　3　讨论
　　
　　维生素D受体是甲状腺激素受体超家族成员，是介导维生素D类活性物质1，25－(OH)2D3发挥生物学效应的核内大分子，1，25－(OH)2D3不仅参与正常的骨质代谢功能，而且还具有其他多方面的作用。临床研究不仅观察到白癜风患者存在VDR的低表达，而且发现维生素D衍生物对白癜风具有治疗作用。维生素D在白癜风中的作用主要有两方面：其一是对免疫系统的调节功能，其二是对黑素细胞生物学功能的影响。
　　VDR基因存在多个单核苷酸多态性位点，这些单核苷酸多态性位点不同程度地影响维生素D的生物学功能的发挥。研究表明VDR基因多态性与多种自身免疫性疾病以及肿瘤有密切的关系。李春英。等发现VDR基因多态性与黑素瘤有明显相关性，Bitlea等在一小样本研究中也表明VDR基因多态性与白癜风相关，基于这些研究结果以及VDR的生物学特性，我们认为VDR基因多态性可能与白癜风有着密切的关系。
　　我们的研究结果表明白癜风患者和正常对照组的BsmI、ApaI、TaqI位点基因型分布有统计学差异，bb、aa、tt基因型在白癜风患者中出现的频率要高于对照组，携带维生素D受体基因纯合子bb、aa或tt基因型可能会增加对白癜风的易感性。进一步进行单倍体分析表明白癜风患者中fbAT、FbAT和FbaT单倍体型的频率显著高于对照组，提示VDR基因型为fbAT、FbAT和FbaT的个体患白癜风的危险性较大。
　　本研究表明，VDR基因多态性与白癜风有非常密切的关系，携带bb、aa或tt基因型的个体患白癜风的风险更高。由于VDR多态性具有非常明显的种族差异，因此在其他种族人群进行进一步研究具有重要意义。