小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察
来源:公共英语 发布时间:2021-04-17 点击:
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察
实验目的 掌握动物骨髓染色体标本制备基本过程,了解操作步骤的原理
实验原理 小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞,具有高度的分裂能力,本实验采用这一材料,通过前处理,低渗,固定,制片,染色等步骤制得染色体标本,可观察到许多处于分裂中期的染色体,可以进行染色体组型分析。
实验原理 制备方法包括以下几个要点: 1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成,使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处 2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上 3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经 Giemsa 染色后便可观察到染色体的显微图象
实验用品 1.材料:小白鼠 2.器具:注射器(1ml,5ml)
剪刀 镊子 玻璃吸管 10ml 刻度的离心管 离心机 载玻片 盖玻片 显微镜 滤纸 擦镜纸 纱布 恒温水浴锅 3.药品:0.01%秋水仙素 0.075MKCl 固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)
2%柠檬酸钠 改良石炭酸品红 实验步骤 预处理取股骨冲洗骨髓离心低渗离心固定离心滴片染色观察
1.预处理:实验前 2.5-3 小时,按每克体重注射 0.02ml,给小白鼠腹腔注射秋水仙素。
2.取股骨:断颈处死小鼠后,剔去肌肉组织,洗净 3.冲洗骨髓:剪去两端的股骨头,吸取 10ml 2%柠檬酸钠,注射 器针头插入股骨一端,反复冲洗两根股骨,洗液收集到 10ml 的离心管中 4 .离心:
1000r/min 离心 10 min ,弃上清 5 .低渗:加入 8ml 0.075mol/LKCl 溶液,滴管吹散,37℃水浴低渗 30 min ,中间(约 15 min )再吹散一次,使细胞分散,悬浮于溶液中 6.离心:1000r/min 离心 10 min,弃上清 7.固定:沉淀加 8ml 固定液,并用吸管轻 轻吹匀,进行固定,中间(约 15 min )再吹散一次 实验步骤 8. 离心:
1000r/min 离心 10 min ,留 1 ml 左右上清,轻轻吹打成细胞悬液 9. 滴片:用吸管吸取细胞悬液,高度 30-40 cm,滴在预冷的载玻片上,在酒精灯火焰上微微加热,室温晾干 10. 染色:改良石炭酸品红染色 10-20 min 11. 观察:低倍高倍
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