不同斑试材料和加样剂量对斑试皮肤反应结果的影响|溶斑降浊通脉汤剂量

　　[摘要]目的：评估斑试材料、剂量、时间、抗原、浓度等因素对斑贴试验结果的影响。方法：采用国际标准(国际标准芬兰小室，Finn－chamber)、日本POLA、中国中亚牌三种材料，对男、女各22名受试者背部进行斑贴试验，浓度为十二烷基硫酸钠(2％、1％、0.5％)、丙二醇(20％、10％)、戊二醇(20％、10％)、原浓度腮红，对照物为生理盐水和蒸馏水。结果：Finn－chamber加样剂量为0.015ml/0.015g，阳性率为15.76％；日本POLA加样剂量为0.05ml/0.05g，阳性率为17.69％；中国中亚牌斑试器加样剂量为0.03ml/0.03g，阳性率为14.11％。日本POLA和中国中亚牌斑试器两组间阳性率有显著差别，其余各组间无差别。十二烷基硫酸钠在24h的反应最高，男性阳性反应率较女性高。结论：按不同的加样剂量检测，国际标准Finn－chamber斑试器加样剂量小、敏感性高，斑贴后的观察时间、抗原浓度以及受试者性别等因素对斑试皮肤反应阳性结果也有影响。
　　[关键词]斑贴试验；斑试材料；十二烷基硫酸钠
　　[中图分类号]R758.23　[文献标识码]A　[文章编号]1008－6455(2007)03－0359－03
　　
　　斑贴试验在临床应用广泛，常用来检测潜在的刺激物或过敏原。在化妆品领域主要用于终产品在人体的安全性评价。既往的研究显示包括加样剂量、接触面积、观察时间、抗原浓度、斑试物体积在内的多种因素可影响斑贴试验结果的准确性和重复性。但不同材料及不同容积的斑试器对斑试结果的影响却少有研究。本试验观察了三种不同类型的斑试器、斑贴试验后不同观察时间、斑贴抗原浓度以及受试者性别等因素对斑贴试验结果的影响，对可能影响斑试结果的因素进行了分析，现将结果报道如下。
　　
　　1　材料和方法
　　
　　1．1　斑试器：本试验选用了三种斑试器：①国际标准Finn－chamber(国际标准芬兰小室)：日本大正富山医药品株式会社生产，为铝质材料，直径7mm，加样剂量0.015ml/0.015g；②日本POLA：日本POLA化成工业株式会社生产，直径15mm，加样剂量0.05ml/0.05g；③中国中亚牌斑贴试验胶带(A型)：上海医疗器械(集团)有限公司卫生材料厂生产，直径12mm，加样剂量0.03ml/0.03g。
　　
　　1．2　斑试物及浓度：十二烷基硫酸钠是经典的皮肤刺激试验物，丙二醇和1，2－戊二醇是常用的保湿化妆品原料。本试验选用了三种不同浓度的十二烷基硫酸钠(SLS)，分别为2.0％、1％、0.5％，作为斑贴试验阳性对照；丙二醇的浓度分别为20％、10％，1，2－戊二醇的浓度分别为20％、10％，腮红；生理盐水和蒸馏水为斑贴试验阴性对照。
　　
　　1．3　受试者：共选择44名健康受试者，其中女22例，男22例，年龄20～48岁，平均为(27.07±20.80)岁。2个月内使用过糖皮质激素、非甾体抗炎药及抗组胺药物者不纳入本研究，另外，哺乳或妊娠期妇女、皮肤疾病、晒斑、瘢痕体质或过度文身及遗传过敏体质者均不列入研究。所有受试者在试验前均签订知情同意书。
　　
　　1．4　操作方法
　　1．4．1受试部位：选择受试者的背部(肩胛骨以下，腰部以上)以及腋中线至腋前线作为受试部位，受试样品加样剂量分别为Finn－chamber 0.015ml、POLA 0.050ml和中国中亚牌常规斑试器0.030ml，受试物直接贴敷于皮肤，贴敷时间为24h。斑试物浓度十二烷基硫酸钠分别为2.0％、1％、0.5％，作为斑贴试验阳性对照；丙二醇的浓度分别为20％、10％；1，2一戊二醇的浓度分别为20％、10％；腮红；生理盐水和蒸馏水为斑贴试验阴性对照。试剂配置及加样过程中均有专人复核。
　　
　　1．4．2　阳性评估：24h后去除斑试器，受试者静坐30min，在统一明亮的环境下，参照文献按标准临床评估方法对皮肤反应进行评估，去除斑试物当天为1h，第二天为24h，第三天为48h。
　　
　　1．5　统计学处理：不同斑试材料、男女阳性率、斑试物浓度以及不同观察时间之间比较均采用X2检验。
　　
　　2　结果
　　
　　2．1　三种斑试器结果比较(见表1)：以“-、±”为阴性反应，“+～+++”为阳性反应。Finn－chamber加样剂量为0.015ml/0.0t5g，阳性率为15.76％；POLA加样剂量为0.05ml/0.05g，阳性率为17.69％：中国中亚牌斑试器加样剂量为0.03ml/0.03g，阳性率为14.11％。三种斑试器比较，Finn－chamber和POLA斑试器无统计学差异；Finn－chamber和国产斑试器无统计学差异；POLA和国产斑试器问有统计学差异。此外，POLA斑试器脱失3孔，国产斑试器脱失30孔，Finn－chamber斑试器未见脱失。

　　
　　2．2　男、女皮肤阳性反应比较(见表2)：男性阳性反应率为17.41％，女性阳性反应率为14.34％。经统计学比较两者有显著性差异(P＜0.05)。

　　
　　2．3　斑试物浓度、观察时间与皮肤阳性反应间的比较(见图1～2)：以蒸馏水为阴性对照，对不同浓度样品及不同观察时间的阳性反应孔数检验，结果显示十二烷基硫酸钠的浓度与皮肤阳性反应率呈正相关，不同浓度梯度问的结果有统计学差异(P＜0.05)。SLS组，观察24h组阳性率最高，与48h组相比有统计学差异(P＜0.05)；而其他两组斑试物，1h组阳性率最高，与24h及48h组相比有统计学差异(P＜0.05)。


　　
　　3　讨论
　　
　　斑贴试验在临床上广泛用于检测潜在的刺激物或过敏原，多种实验因素可影响斑贴试验结果的准确性和可重复性，如不同斑试物体积或剂量、不同斑试器类型、不同性别以及斑贴试验后不同时间对试验结果均有影响。文献报道体积和剂量对斑试皮肤反应结果有一定影响，随试验物剂量增加，皮肤反应程度有增加趋势。由于POLA和国产斑试器材料相同或相似，仅容量不同，此结果表明增加斑试物的剂量可使斑贴试验结果阳性率提高；比较Finn－chamber和国产斑试器材料， 虽然Finn－chamber斑试器加样剂量仅有15μl，但其阳性率仍高于加样剂量为2倍的国产斑试器，提示Finn－chamber斑试器的铝制材料比塑料材料有更高的斑贴试验阳性检出率。
　　SLS是强刺激性化学物质，它对皮肤的刺激性和其浓度正相关，因此SLS常被用做斑贴试验体系的阳性对照物质。本实验选用了三种不同浓度的SLS在同一受试者身上进行斑贴，结果表明SLS的斑贴试验阳性率随浓度下降逐渐降低，各浓度之间有显著性差异(P＜0.05)。SLS之所以在24h的反应最高，原因是由于浓度不同，SLS出现皮肤屏障破坏最大反应的时间也是不同的，低浓度及短时间的SLS可以引起皮肤屏障功能的破坏，但它只影响角质层脂质及蛋白变化，不引起炎症反应；但高浓度和长时间SLS刺激不会继续增加对屏障功能的破坏，而是引起炎症反应，且炎症反应至少在6h之后才会出现，这一结果表明本实验体系的稳定性和可靠性，所得结果是客观准确的。
　　不同性别对斑贴试验结果的影响少有报道。男、女皮肤在生理特点甚至组织结构上有所不同，比如受内分泌影响，男性皮肤皮脂腺较丰富，功能活跃，男性皮肤多毛，通过毛囊的吸收也可能比女性多一些。从质地上看男性皮肤不如女性皮肤细腻，这可能和角质层生理状态以及含水量有关。本文发现针对同样的化学物质，在同一试验体系内男性皮肤比女性皮肤敏感性高。
　　在化妆品领域内斑贴试验技术被越来越多地应用于终产品在人体的安全性评价，即预测产品是否可能引起人类皮肤的刺激性或变态反应。在进行这一类临床评价时应尽量排除上述诸多因素对实验结果的影响。