[氢化可的松溶液微生物限度检查方法学验证]微生物限度方法学验证

　　【中图分类号】R725 【文献标识码】B 【文章编号】1672－3783(2011)07－0160－02 　　【摘要】目的 验证氢化可的松溶液微生物限度检查方法的专属性和有效性。方法 采用直接接种法和培养基稀释法对氢化可的松溶液进行验证试验，并测算菌回收率。结果 氢化可的松溶液以直接接种法检查，白色念珠菌、黑曲霉菌的菌回收率＞70%，采用培养基稀释法后金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的菌回收率＞70%。结论 氢化可的松溶液可以用直接接种法进行控制菌、霉菌及酵母菌总数检查，以培养基稀释法测定细菌总数。
　　【关键词】氢化可的松溶液；微生物；限度检查；验证
　　
　　氢化可的松溶液为肾上腺皮质激素类药物。具有抗炎、抗过敏和抑制免疫等多种药理作用。为保证药品质量，按照中国药典2005版［1］的要求，对其微生物限度检查方法进行验证，如下。
　　1实验材料
　　1.1培养基:培养基均购自中国药品生物制品检定所。
　　1.2菌种:大肠埃希菌(CMCCB44102)第2代，枯草芽孢杆菌(CMCCB63501)第2代，金黄色葡萄球菌(CMCCB26003)第2代，白色念珠菌(CMCCF98001)第2代，黑曲霉菌(CMCCF98003)第2代
　　1.3稀释液:pH=7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。
　　1.4样品:氢化可的松溶液（201007022010070320100704 牡丹江市皮肤病防治研究所）
　　2方 法
　　2.1 直接接种法供试液制备:取供试品10g三份，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，振摇5～10分钟，萃取，静置，使油水明显分层，取其水层作为1：10的供试液，取2mL分别加入置2个平皿中。
　　2.2直接接种法菌液制备:取1∶10 供试液2mL，分别加入置2个平皿中，再分别加入大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌50～100 个菌/mL 的菌液1mL，作为加阳性菌供试液样。每种菌制备2 份。
　　2.3培养基稀释法供试液的制备:将1∶10供试品溶液1mL，分别注入10个平皿中，每个0.1mL，10个为一组，共两组。
　　2.4培养基稀释法加阳性菌供试液的制备:将1∶10 供试品溶液1mL，分别注入10 个平皿中，每个0.1mL，10 个为一组，再分别加入大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉50～100 个菌/mL 的菌液1mL，每种菌株两组。
　　2.5操作步骤
　　2.5.1直接接种法:取1∶10供试液2mL注入2个平皿中，分别加入大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉50～100个菌/mL 的菌液1mL，作为加阳性菌供试液样。每个菌制备2个平皿。
　　2.5.2培养基稀释法:将1∶10供试液2mL，分别注入20个平皿，再分别加入大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌50～100个菌/mL的菌液1mL，每组10个平皿，每个菌株两组。分别加入已溶化保温至45℃营养琼脂培养基，玫瑰红钠琼脂培养基15mL。每1mL供试品溶液所注的平皿中生长的菌落之和为1mL，计算每1mL供试品溶液的平均菌落数，按平皿法计数规则报告菌落数。
　　2.5.3大肠埃希菌检查:取1 ∶ 10 供试品溶液10mL 接种于胆盐乳糖培养基中，培养24h，取上述培养物0.2mL，接种至含5mL MUG 培养基的试管内，培养，于5、24h 在365nm 紫外线观察，同时用未接种的MUG 培养作本底对照。管内培养物呈现荧光，为MUG 阳性；不呈现荧光，为MUG 阴性。
　　2.6培养:各平皿培养基凝固后，细菌检查平皿置30～35℃培养箱48h，霉菌检查平皿置23～28℃培养箱72h。
　　2.7样品微生物限度测定:取供试品10mL，加pH=7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲溶液90mL，混匀，分别按常规法和培养基稀释法各3份进行操作。
　　3结 果
　　氢化可的松溶液以常规方法检查，金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念球菌、黑曲霉各菌的平均回收率分别为55%、50%、67%、96.4%、97.0%。该样品对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的检出均有影响，而对白色念球菌、黑曲霉的加样回收率均高于70%，故认为常规法测定霉菌和酵母菌总数是符合中国药典2005年版的要求的；采用培养基稀释法金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌各菌的平均回收率分别为88.3%、97.6%、92.8%，均高于70%，故认为培养基稀释法测定细菌总数是符合中国药典2005版的要求的。控制菌检查氢化可的松溶液无明显的影响，故控制菌采用常规法进行检验。
　　4结 论
　　氢化可的松溶液可以使用常规法即直接接种法进行控制菌、霉菌及酵母菌总数检查，以培养基稀释法测定细菌总数检查。
　　
　　参考文献
　　［1］ 中国药典2005年版二部［S］.2005.附录93-101.
　　作者单位 157011 牡丹江市药品检验所�1
　　157011 牡丹江医学院红旗医院�2