白细胞1.6*10^9/L_血管钠肽通过抑制白细胞L-选择素表达保护碾压撕脱皮瓣

　　[摘要]目的:本研究组以往的工作已证实血管钠肽(Vasonatrin peptide,VNP)对碾压撕脱伤皮瓣有明显的保护作用,本研究拟探讨该作用是否通过抑制皮瓣损伤后白细胞的L-选择素表达介导。方法:24只大鼠随机分为3组(n=8),分别为SHAM手术组、碾压撕脱组及VNP+碾压撕脱组,于术前及术后12h取材,HE染色观察组织学改变和白细胞浸润情况,并通过免疫组织化学染色对表达于白细胞表面的L-选择素进行标记以明确VNP对碾压撕脱皮瓣的具体作用。结果:碾压撕脱组皮瓣组织损伤情况较重,可见大量中性粒细胞浸润,其表面的L-选择素表达也随之升高,而VNP治疗组皮瓣中的中性粒细胞数目明显减少,其所表达的L-选择素也较前者显著降低(P 　　1.3统计学处理:实验数据以x±s表示,用SPSS12.0(SPSS Inc. Chicago, Illinois)统计软件处理,组间比较用采用方差分析,P�0.05,差异有显著性。
　　
　　2结果
　　2.1 皮瓣成活率:通过我们的前期工作已证明,使用我科自行研制的皮肤碾压伤模型可以制作出稳定可重复的碾压皮瓣。皮瓣碾压后,组织自远端1/3开始逐渐发生干性坏死,随着时间推移,原本看似有活力的组织也开始发生坏死表现,表皮脱屑、变硬等继发性坏死特征相继出现,至术后7天坏死和成活组织呈现明显界限。此时计算各组皮瓣的成活率(皮瓣成活率=皮瓣存活表面积/皮瓣总表面积×100),结果如下:A组(SHAM): 61.12±4.92;B组(单纯碾压撕脱):37.42±4.36;C组(碾压撕脱+VNP):49.96±1.32。 可以看出VNP治疗能显著提高皮瓣的成活面积(P0.05)。术后12h切片:SHAM手术组中L-选择素阳性表达的细胞不多,多呈黄色、棕黄色等弱阳性表现(图4);碾压撕脱组皮瓣可观察到大量L-选择素阳性表达的细胞,且呈棕褐色的强阳性表现,并其多位于管腔内及血管周围,尤其在管腔内呈大量聚集表现,这与中性粒细胞聚集部位相一致,证明了在碾压撕脱伤早期白细胞因L-选择素的高表达而聚集于管腔之中,并最终渗出浸润至组织各处参与炎性反应过程(图5);VNP治疗组中L-选择素的表达较碾压撕脱组明显减少,散在于管腔及内皮细胞周围,说明VNP较好地抑制了白细胞在炎症反应中的作用(图6)。术后12h各组间平均积分光密度(IOD)差异具有显著性(P 　　[3]Dwir O, Kansas GS, Alon R. Cytoplasmic anchorage of L-selectin controls leukocyte capture and rolling by increasing the mechanical stability of the selection tether [J]. Cell Biol, 2001, 155(1): 145-156.
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　　[收稿日期]2009-12-02 [修回日期]2010-02-23
　　编辑/张惠娟