戊唑醇、肟菌酯和吡唑醚菌酯在青花椒中的残留行为

杨双昱，何志强，曾 全，肖银波，王 新，杨 莉

（1.四川省林业科学研究院森林保护研究所，成都 610081；
2.西华师范大学生命科学学院，四川南充 637009）

花椒是我国西南地区最主要的经济作物之一，随着花椒产业的快速发展，种植面积也随之加大，然而花椒锈病的发生愈加严重，造成严重减产[1]。戊唑醇、肟菌酯、吡唑醚菌酯是高效、广谱、低毒杀菌剂，被广泛用于农作物病害的防治[2-4]。上述几种农药复配使用能有效扩展杀菌谱和减小抗药性的产生[5-8]，如杨双昱等[9]使用戊唑醇、肟菌酯和吡唑醚菌酯复配防治花椒锈病，其作用效果明显。目前，国内外已有关于戊唑醇、肟菌酯和吡唑醚菌酯在水稻[10-11]、小麦[12]、玉米[13]、核桃[14]、西瓜[15]、茶叶[16]、番茄[17]、苹果[18]等的分析方法和残留行为的报道，但在青花椒叶片和果实中的残留行为和安全性研究尚未见报道。

本研究利用75%肟菌·戊唑醇水分散粒剂（WG）和30%唑醚·戊唑醇悬浮剂（SC）的复配混合方式喷施青花椒叶片和果实，初步探讨了戊唑醇、肟菌酯和吡唑醚菌酯在叶片和果实中的残留行为，并通过测定可食部位中目标农药的残留量评价其安全性，旨在为制定青花椒的农药残留限量标准提供数据支持和科学依据。

1.1 试验地点与材料

试验地点：四川省资阳市乐至县孔雀乡马鞍山村花椒基地；
试验材料：九叶青花椒（树龄为7年）。

1.2 试剂与仪器

75%肟菌·戊唑醇WG（肟菌酯25%，戊唑醇50%），拜耳作物科学（中国）有限公司；
30%唑醚·戊唑醇SC（吡唑醚菌酯10%，戊唑醇20%），陕西上格之路生物科学有限公司；
戊唑醇、肟菌酯、吡唑醚菌酯的标准品（纯度≥98%），德国Dr.Ehrenstorfer公司；
甲醇、乙腈均为色谱纯，德国默克公司；
甲酸（色谱纯），上海安谱实验科技股份有限公司；
氯化钠（分析纯），四川西陇化工有限公司；
超纯水，实验室自备。

超高效液相色谱-串联质谱仪，配电喷雾电离源（ESI），美国沃特世公司；
JA3003分析天平，上海精密科学仪器有限公司；
T18 ULTRA-TURRAX高速匀浆机，德国IKA公司；
Neofuge 18R高速离心机，香港力康生物医疗科技控股集团；
Milli-Q超纯水仪、0.22 μm有机系滤膜，美国安捷伦公司。

1.3 田间试验处理

将75%肟菌·戊唑醇WG 3 000倍液和30%唑醚·戊唑醇SC 1 500倍液稀释混合后，每棵树每次喷药750 mL，每次施药间隔期为7 d，共计施药3次，施药方式为叶面喷雾。对青花椒园进行常规田间管理，椒园行距和株距为3 m×3 m，每1 100棵/hm2，施药面积为1 000 m2。在第3次施药后2 h，1、3、5、7、14、21、30 d采集青花椒的叶片或果实。

1.4 分析方法

1.4.1 样品前处理

各称取5.00 g均质青花椒叶片和果实的样品分别置于50 mL离心管中，加入10 mL乙腈匀浆2 min，随后加入3～5 g氯化钠，于8 000 r/min下离心5 min，吸取1 mL上清液，加入1 mL甲醇-水（50∶50，V/V），过0.22 μm有机滤膜，待测。

1.4.2 标准溶液配制

准确称取一定量标准品，用乙腈溶解并定容于50 mL容量瓶中至刻度，制备成质量浓度约为1 000 mg/L母液。分别将青花椒叶片和果实提取液逐级稀释至0.01、0.02、0.10、0.20、0.50 mg/L，制备成系列基质标准溶液，待测。

1.4.3 仪器条件

色谱条件。液相色谱柱：Acquity UPLC BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；
进样量：1 μl；
柱温：30℃；
流速：0.30 mL/min。梯度洗脱条件见表1。

表1 梯度洗脱条件

质谱条件。扫描方式：电喷雾离子源ESI＋；
毛细管电压：3.0 kV；
锥孔电压：30 V；
离子源温度：150℃；
脱溶剂温度：500℃；
脱溶剂气流量：850 L/h；
锥孔气流量：50 L/h；
多反应监测模式（MRM），见表2。

表2 多反应监测模式测定参数

1.5 数据处理

采用一级动力学方程，按式（1）分析青花椒叶片和果实中的农药残留消解情况，采用式（2）计算所试药剂的半衰期。

式中：Ct为施药后第t d的农药残留量，mg/kg；
C0为原始沉积量，mg/kg；
k为降解速率常数；
t为施药后时间，d。

2.1 方法验证

如表3所示，在0.01～0.5 mg/L范围内，3个目标化合物在青花椒叶片或果实基质提取液中的峰面积（y）与其进样质量浓度（x）间的线性关系良好，相关系数（R2）均大于0.99。

表3 目标化合物的线性方程和相关系数

如表4所示，当青花椒叶片中的添加水平为0.02、0.50、1.00 mg/kg时，平均回收率为90.4%～95.3%，相对标准偏差（RSD）为2.6%～5.1%；
当青花椒果实中的添加水平为0.02、0.10、0.50 mg/kg时，平均回收率为89.1%～95.4%，RSD值为1.7%～4.7%。建立的分析方法灵敏度、重复性等均可以满足农药残留检测要求[14]。典型色谱见图1。

表4 目标化合物在不同样品中的添加回收率试验结果（n=5）

图1 戊唑醇、肟菌酯和吡唑醚菌酯定量离子色谱图

2.2 戊唑醇、肟菌酯和吡唑醚菌酯在青花椒叶片及果实中的消解

在第3次施药后，以不同时间段青花椒叶片和果实中戊唑醇、肟菌酯和吡唑醚菌酯的残留量作消解动态曲线，得出3种有效成分的残留量随时间增加而降低并最终趋于稳定。戊唑醇、肟菌酯和吡唑醚菌酯的消解符合一级动力学方程。其中，戊唑醇的半衰期为3.8～4.4 d；
肟菌酯的半衰期为3.4～3.9 d，吡唑醚菌酯的半衰期为4.1～4.4 d（表5）。

表5 戊唑醇、肟菌酯和吡唑醚菌酯在青花椒叶片和果实中的消解动态

结合图2和图3可知，青花椒叶片和果实中戊唑醇、肟菌酯和吡唑醚菌酯的残留量均在施药21 d后开始趋于稳定，3种药剂在青花椒叶片中的残留量大于在果实中。青花椒果实中戊唑醇、肟菌酯和吡唑醚菌酯的最终残留量均达到最低定量限0.02 mg/kg。

图2 叶片中戊唑醇、肟菌酯和吡唑醚菌酯的消解动态曲线

图3 果实中戊唑醇、肟菌酯和吡唑醚菌酯的消解动态曲线

本研究采用超高效液相色谱-串联质谱残留分析方法检测了青花椒叶片和果实中戊唑醇、肟菌酯和吡唑醚菌酯的残留量，该方法的灵敏度和准确度达到农药残留检测要求。在本研究施药剂量下，青花椒果实中戊唑醇、肟菌酯和吡唑醚菌酯的残留量均达到最低定量限0.02 mg/kg。虽然我国GB 2763—2021《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中目前并没有明确规定3种有效成分在花椒叶片和果实中的最大残留限量，但参照本次试验结果，可初步判断青花椒果实中的残留量达到标准要求，处于可接受的安全水平。

此外，结合本团队先前的药效试验[9]和本次残留试验结果，推荐将75%肟菌·戊唑醇WG（3 000倍液）与30%唑醚·戊唑醇SC（1 500倍液）混合后，采用每棵树每次用药量750 mL（树龄7年），以叶面喷雾方式（施药隔期7 d）进行青花椒锈病的防治。